Abstract
En av de siste gjennombrudd i kreftforskningen er identifisering av aktivering mutasjoner i ulike reseptortyrosinkinasehemming (RTK) veier i mange kreftformer, inkludert tykktarmskreft (CRC). Vi hypotese at alternativ til mutasjoner, kan overekspresjon av ulike onkogene RTK også underbygge CRC patogenesen, og annerledes RTK kan par med forskjellige nedstrøms signalveier i ulike undergrupper av menneskelig CRC. Ved immunhistokjemi, viser vi her at RTK medlemmer ErbB2, ErbB3 og c-Met var i gjerning forskjellig overexpressed i kolorektal kreft pasientprøver som fører til konstitutiv aktivering av RTK signalveier. Ved hjelp av ErbB2 spesifikk hemmer Lapatinib og c-Met spesifikk hemmer PHA-665 752, har vi videre vist at denne konstitutiv aktivering av RTK-signalering er nødvendig for overlevelsen av kolorektal kreftceller. Videre viser vi at RTK overekspresjon mønster tilsier bruk av nedstrøms AKT og /eller MAPK veier. Våre data er viktige tilskudd til dagens onkogene mutasjoner modeller, og videre forklare den kliniske variasjoner i behandlingstiltak av tykk- og endetarmskreft. Våre funn argumentere for mer personlig terapi skreddersydd til den enkelte pasient basert på deres type RTK uttrykk i tillegg til sin mutasjonsstatus
Citation. Yao YL, Shao J, Zhang C, Wu JH, Zhang QH, Wang JJ , et al. (2013) Spredning av tykktarmskreft er fremmet av to signale Transduction uttrykk mønstre: ErbB2 /ErbB3 /AKT og MET /ErbB3 /MAPK. PLoS ONE 8 (10): e78086. doi: 10,1371 /journal.pone.0078086
Redaktør: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center Research Institute, USA
mottatt: 14 juni 2013; Godkjent: 07.09.2013; Publisert: 30 oktober 2013
Copyright: © 2013 Yao et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av stiftelsen Social Development Kunshan (nr. KS1130) og Foundation Scientific Research i Jiangsu University (no. 11JGD0090). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
tykktarms~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er en epitelial malignitet som oppstår i tykktarmen eller endetarmen. Mer enn 1 million mennesker er diagnostisert med tykktarmskreft årlig på verdensbasis som resulterer i ca 0,5 millioner dødsfall. I 2008 var det den nest vanligste årsaken til tumorassosierte dødsfall hos kvinner og den tredje mest vanlig hos menn. Det er mer vanlig i utviklet enn i utviklingsland [1] – [3]. Kjemoterapi kan bli anvendt som adjuvant behandling i tillegg til kirurgi i nesten alle pasienter med kolorektal kreft [4] – [6]. Med eller uten lymfeknutemetastase, er kjemoterapi ansett for å øke levealderen og redusere muligheten for gjentakelse. Cytostatika er utformet for å virke via en rekke mekanismer og kan omfatte kombinasjoner av midler slik som fluoruracil, capecitabin, UFT, leucovorin, irinotecan, eller oksaliplatin [7] – [9]. Imidlertid, av ulike grunner, kan kjemoterapi forårsake andre problemer for pasientene i hovedsak på grunn av sin ikke-spesifikt angrep og relaterte bivirkninger, slik som kvalme, oppkast, håravfall, tretthet, anemi og infeksjon blant andre. Derfor har målrettet kreftbehandling dukket opp som har blitt utviklet basert på kunnskap om cellesignalisering. Målrettet kreftterapi avhenger hovedsakelig av små-molekyl narkotika og monoklonale antistoffer som forårsaker langt færre bivirkninger sammenlignet med tradisjonell kjemoterapi.
Eksogene signaler slik som epidermal vekstfaktor (EGF) og hepatocytt-vekstfaktor (HGF) ble tidligere rapportert å være avgjørende for å opprettholde vedvarende vekst av tumorceller ved binding til deres reseptorer. Disse reseptorer tilhører reseptor-tyrosinkinaser (RTK’er) og familie ideelle mål i kreftterapi som vist i mange studier. Etter systemisk profilering av kreft genomer ved hjelp av neste generasjon sekvensering, vet vi nå at oppkjøpet av aktive mutasjoner i RTK eller nedstrøms signalmolekyler er en av de viktigste onkogene mekanismer. Men bare en liten del av pasientene har disse mutasjonene, noe som tyder på at andre alternative mekanismer er på spill. En av disse alternative mekanismer kan være overekspresjon av pro-sprednings- og pro-overlevelse RTK’er, og /eller differensial bruk av nedstrøms signalveier. Med mer dyptgående analyse av kreft genomer, er vi nå begynner å forstå de individuelle forskjellene som betegner unik sykdom biologi og klinisk ledelse kravet.
Familien til epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR) og c-Met er RTK som er hyppigst rapportert i kolorektal kreft progresjon og metastasering. Aktivering av disse RTK’er kan stimulere en rekke spesifikke veier direkte utføring av tumorcellemigrering, overlevelse og proliferasjon. Den avvikende regulering av RTK er ofte nevnt i avansert CRC. Sammenlignet med EGFR, andre EGFR familiemedlemmer, c-MET, ErbB2, ErbB3, og deres relaterte signalveier er relativt unknow [10]. Derfor, i denne studien undersøkte vi differensial uttrykk for RTK c-MET, ErbB2, ErbB3, og ned stream signalmolekyler i grunnskolen prøver av pasienter med kolorektal kreft, samt i representative menneskelige kolorektal kreft cellelinjer.
Materialer og metoder
pasienter
totalt 105 kolorektal kreft prøver ble undersøkt i denne studien og ble oppnådd fra pasienter på tidspunktet for kirurgisk reseksjon og endoskopi. Normale kolorektal vev ble oppnådd fra 40 kinesiske pasienter med ikke-tumorsykdommer som ordinært lang tykk- og vaskulær malformasjon. Alle sakene ble behandlet på det første Folkets sykehus i Kunshan, Kina mellom januar 2010 og august 2011, og alle prøvene ble samlet inn i henhold til de prinsipper som er nedfelt i Helsinkideklarasjonen. Skriftlig dokumentert informert samtykke for genekspresjon analyser av alle vev ble innhentet fra alle pasienter før operasjon eller endoskopi undersøkelse. Denne studien og samtykke prosedyren ble godkjent av lokale etikkutvalg av fort Folkets sykehus i Kunshan, Kina. Diagnosen og iscenesettelse av tykktarmskreft ble vurdert i henhold til AJCC (TNM) Staging System.
Cell Kultur og reagenser
LoVo, SW948 og SW480 cellelinjer ble oppnådd fra ATCC. EGF var fra Sigma (Milan, Italia), HRG1-β1 og IGF-1 fra R D Systems, (Minneapolis, MN). LY294002 var fra Calbiochem, U0126 fra Promega, PHA-665752 fra Tocris Bioscience, og Gefitinib fra Sequoia Forskning Products. Alle cellelinjer ble dyrket i DMEM supplementert med 10% FBS, penicillin (100 U /ml) og streptomycin (100 ug /ml) ved 37 ° C i 5% CO
2.
Western blotting
proteiner ble ekstrahert fra humane vev og cellelinjer, og kvantifisert ved anvendelse av en proteinanalyse (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Proteinprøver (30 ug) ble fraksjonert ved hjelp av SDS-PAGE og overført til en nitrocellulosemembran. Immunoblotting ble utført ved hjelp av antistoffer mot ErbB2, ErbB3, p-C-MET, C-MET, p-MAPK, MAPK, p-AKT og AKT (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, California). Resultatene ble visualisert ved hjelp av en kjemiluminescens deteksjon system (Pierce ECL underlaget western blot deteksjonssystem, Thermo Scientific, Rockford, IL) og eksponering for autoradiografi film (Kodak XAR film).
Immunohistochemistry (IHC)
Alle vev ble fjernet og fiksert i 4% paraformaldehyd over natten ved 4 ° C, deretter behandlet og i snitt på 5 um tykkelse. Snittede objektglass ble farget immunhistokjemisk til ErbB2, ErbB3 og c-MET (Santa Cruz Biotechnology, Inc.) fulgt av inkubering med sekundært antistoff ved 37 ° C i 30 minutter og omsetning med DAB-reagens i 5-10 min. Platene ble montert med nøytral tyggis for mikroskopisk undersøkelse. Celler med brune intracellulære granulater (cytoplasma eller nucleus) ble ansett for å være positivt farget.
celleviabilitet
dyrkede celler ble sådd ut i en tetthet på 6 × 10
3 celler /brønn i en 96-brønners plate og behandlet med forskjellige midler. Cellelevedyktigheten ble evaluert ved en MTS-analyse. CellTiter 96® vandige løsning Reagens (Promega, Madison, WI) ble tilsatt til hver brønn i henhold til produsentens instruksjoner, og platene ble returnert til inkubatoren. Etter 4 timer ble cellelevedyktigheten bestemt ved å måle absorbansen ved 490 nm ved anvendelse av en datastyrt plateleser.
Statistical Analysis
Data er uttrykt som gjennomsnitt ± standardavvik (SD). Sammenligninger mellom to grupper ble utført ved anvendelse av Students t-test eller Mann-Whitney U-test, etter behov. Alle statistiske analyser ble utført ved hjelp av SPSS statistisk programvare (versjon 13.0), og to-tailed t-tester ble brukt til alle opplysninger med mindre annet er spesifisert. En verdi på
P
mindre enn 0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant.
Resultater
Differensial Uttrykk av ErbB3, ErbB2 og c-MET i Human tykktarmskreft
for å undersøke ekspresjonen av et sett av reseptor-tyrosin-kinase-gener (RTK) i human kolorektal kreft, ble parafin innleiret blokker oppsamlet som inneholdt prøvestykker av 105 tilfeller av kolorektal kreft. Først uttrykk for den viktige onkogene heterodimer ErbB2 /ErbB3 ble bestemt av IHC. Som vist i figur 1A, ble ErbB3 betydelig overuttrykt i human kolorektal cancer vev, med ekspresjon hovedsakelig lokalisert i membranen av kreftceller. Partner av ErbB3 i heterodimeren, ErbB2, ble også plassert hovedsakelig i membranen av kreftceller, og ble på lignende måte overuttrykkes i human kolorektal kreft (figur 1B). En annen reseptor-tyrosinkinase, proto-onkogen C-MET, ble også detektert av IHC, i membranen av kreftceller i de fleste tilfeller (figur 1C). Til slutt ble kvantitativ analyse av uttrykket av de tre proteinene utført ved hjelp av bildeanalyse programvare Bilde-pro plus. De IHC-positive områder fra fem tilfeldige felt av hver IHC-farget delen ble evaluert som integrert optisk tetthet (IOD). Alle tre proteiner ble betydelig overuttrykt i menneskelige kolorektal vev. (ErbB3: kreftvev 3264 ± 1032 vs. normale kolorektal vev 1038 ± 354,
P =
0,0074, ErbB2: kreftvev 2616 ± 2019 vs. normale kolorektal vev 338 ± 154,
P
= 0,016, c-MET: kreftvev 3812 ± 739 vs. normale kolorektal vev 978 ± 313,
P
= 0,0057 med Mann-Whitney U-test)
(A, B, C. ) uttrykk for ErbB3, ErbB2 og c-MET i human kolorektal kreft. Eksemplarer av 105 parafininnstøpte kolorektal kreft vev ble analysert ved IHC for ErbB3, ErbB2 og c-MET, og representative tall viser sterke og svake /negative farging for hver markør med respektive normale kontrollprøver. Gjennomsnittlig integrert optisk tetthet (IOD) ble oppnådd ved å analysere fem felt for hvert lysbilde, evaluert av Image-Pro Plus (versjon 5.0) for IHC farging av ErbB3, ErbB2 og c-MET. Dataene er presentert som gjennomsnitt ± SD, og * P 0,05, ** P. 0,01 ved Mann-Whitney U test
Resultatet av uttrykket av alle tre proteiner var forventet, ikke bare på grunn til deres rolle som proto-onkogener, men også fordi tidligere lignende studier har indikert lignende resultater. Men etter nærmere undersøkelser fant vi varierende grad av variasjon i uttrykket av disse tre proteiner i human kolorektal kreft, spesielt i ErbB2 uttrykk. Av de 105 sakene, 45 tilfeller (42.85%) var negative for ErbB2 farging, 8 tilfeller viste sterk ErbB2 flekker, og resten (52 tilfeller) viste moderat eller svak ErbB2 farging. Kun ni tilfeller (8,5%) var negative for c-MET flekker mens 14 tilfeller viste sterk farging og 82 tilfeller viste moderat eller svak c-MET farging. Interessant, var ErbB3 positive i alle kolorektal kreft undersøkte vev (Figur 2A). Videre er den heterogene ekspresjon av disse tre proteinene i fire kolorektal kreft vev ble ytterligere undersøkt ved western-blot (Figur 2B). Forskjellen i ekspresjon mellom cancervev og normalt vev i alle tre proteiner bekreftet påliteligheten av IHC-farging, og videre antydet at tre typer av uttrykk mønstre fantes i de 105 tilfeller. Alle sakene kunne klassifiseres som: ErbB3: c-MET co-over-uttrykk tykktarmskreft, ErbB3: ErbB2 co-over-uttrykk tykktarmskreft, og ErbB3: ErbB2: c-MET co-over-uttrykk kolorektal kreft (figur 2C). Vi mener at disse resultatene er et godt eksempel på variasjon av svulst RTK uttrykk mønster, og videre at de molekylære mekanismene bak de ulike mønstrene er verdt å utforske.
(A) Forholdet mellom sterk /moderat /svak /negativ farging av ErbB3, ErbB2 og c-MET i human kolorektal kreft. (B) Påvisning av ErbB3, ErbB2 og c-MET på protein hentet fra vevsprøver av 4 tilfeller av tykktarmskreft. (C) Venn-diagram som viser samtidig uttrykk for ErbB3, ErbB2 og c-MET.
Spredning av kolorektal kreft celler er mediert av enten ErbB3 /ErbB2 eller ErbB3 /C-MET signalveier
for å finne egnede menneske kolorektal kreft cellelinjer som tilsvarer de tre molekylære mønstre som vi oppdaget i humane prøver, uttrykk for ErbB2, ErbB3 og c-MET i 9 menneskelige tykktarmskreftcellelinjer ble analysert ved western blotting ( data ikke vist). Resultatet viste at SW480 er et representativt cellelinje som samtidig uttrykte ErbB2, ErbB3 og c-MET. Cellelinjen LoVo eneste ko-over-uttrykker ErbB2 og ErbB3, mens SW948 er en representativ cellelinje som co-over-uttrykker ErbB3 og c-MET (figur 3A). Celleviabilitet ble åpnet av MTS analysen, og de relaterte mekanismer vil bli nærmere omtalt. Noen inhibitorer og agonister av disse tre proteinene ble utvalgt blant annet PHA-665752 (PHA) og lapatinib, som er inhibitorer av c-MET og epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR), respektivt. Når c-MET signale ble blokkert av PHA, cellen levedyktighet SW480 og SW948 sunket betraktelig (figur 3 B og D); imidlertid ingen vesentlig endring i celleviabilitet skjedde i LoVo-celler, kanskje på grunn av deres lave ekspresjon av c-MET (figur 3C). Motsatt lapatinib, en ErbB2 inhibitor, betydelig redusert celle levedyktighet LoVo og SW480 celler, samtidig som de har nesten ingen effekt på SW948 celler som har lav ErbB2 uttrykk (Figur 3D). Forskjellene mellom LoVo og SW948 celler i sitt svar til PHA og lapatinib er muligens på grunn av forskjeller i signaloverføring mønster (figur 3 C og D). Videre, for å undersøke hvorvidt agonistene kan redde celleviabilitet, HGF, en agonist av c-MET, og heregulin-β1 (HRG1-β1), som binder seg til HER3 og induserer dens heterodimerisering med de andre familiemedlemmer ble anvendt. Både HGF og HRG1-β kan delvis redde levedyktighet SW480 celler (Figur 3B); Men situasjonen var annerledes i LoVo og SW948 celler. HGF stimulering forårsaket en ubetydelig økning av cellelevedyktighet i LoVo-celler sammenlignet med LoVo-celler behandlet med PHA (figur 3C). SW948-celler reagerte mer følsomt til HGF, med en betydelig økning i celleviabilitet i forhold til PHA-behandlede SW480-celler (Figur 3D). Men SW948 celler reagerte mindre følsomt til HRG1-β1 i forhold til LoVo, kanskje på grunn av deres lave ekspresjon av ErbB2, men cellelevedyktigheten av SW948 ble fortsatt øket, muligens på grunn av de andre reseptorer av EGFR familien så som EGFR og ErbB4 som kan både dimerisere med ErbB3. Derfor ble ulike reaksjoner utforsket på grunn av ulike molekylære mønstre av uttrykk: ErbB3 /ErbB2 og ErbB3 /c-MET. Nedstrømssignaleringen ble deretter undersøkt videre.
(A) Påvisning av ErbB3, ErbB2 og c-MET i den menneskelige kolorektal kreft cellelinjer LoVo, sw948 og sw480 av western-blot. (B, C, D) Cellenes levedyktighet måles ved MTS-analyse i kolorektal cancer-cellelinjer LoVo, sw948 og sw480 behandlet som angitt i figuren. Dataene er presentert som gjennomsnitt ± SD, og * P 0,05, ** P. 0,01 av uparet Student t test
Ulike Molecular Patterns of Colorectal Cancer Involver Aktivering av Nedstrøms MAPK eller AKT Signa
for å undersøke nærmere mekanismen for nedstrøms signalisering av både molekylære mønstre i kolorektal kreft, cellelysatene ble brukt til å analysere aktivering av AKT og MAPK signal som er velkjente nedstrøms signalveier av ErbB2 /ErbB3 og ErbB3 /c-MET komplekser. En induserbar siRNA system var involvert i studien, og uttrykk for ErbB3 kunne bli brakt til taushet av doksycyklin (Doxy) behandling. Når SW948 ble behandlet med PHA eller Doxy, aktivering av både AKT og MAPK ble blokkert. Begge disse to signalveier kan reaktiveres ved HGF, men ingen signifikant aktivering ble funnet når ErbB3 ble stille selv med HGF behandling, noe som indikerer at aktivering av MAPK signalering i SW948 avhengig mer på ErbB3 (Figur 4A). Aktiveringen av AKT og MAPK signale ble åpnet på en annen måte i LoVo-celler på grunn av deres høye ekspresjon av ErbB2 /ErbB3. Både AKT og MAPK signal ble effektivt blokkert ved behandling med Doxy og lapatinib, noe som indikerer svekkelse av både ErbB3 og andre EGFR-molekyler som kan inaktivere AKT og MAPK signalering. HRG1-β1 var i stand til å sterkt aktivere både AKT og MAPK signal; imidlertid dens virkning på aktivering AKT var mer avhengig av ErbB3 mens dens aktivering effekt på MAPK var mer avhengig av andre EGFR-familiemedlemmer (figur 4B). Videre er behandlingsbetingelsene reversert mellom disse to celler. Lapatinib har liten effekt på aktiveringen i SW948-celler, men HRG1-β1 fortsatt kan indusere aktivering av både AKT og MAPK signale selv om aktiveringsgraden er mye svakere enn i LoVo-celler (Figur 4C). Tilsvarende er c-MET-inhibitor PHA alene har nesten ingen effekt på MAPK AKT og signalisering, og HGF knapt kan aktivere enten AKT eller MAPK signale sannsynligvis på grunn av den lave ekspresjon av c-MET (figur 4D). Spesifisiteten av veksten signal via ErbB3 /ErbB2 eller ErbB3 /c-MET ble videre undersøkt ved hjelp av spesifikke hemmere.
(A, B) Påvisning av AKT og MAPK signal i SW948 og LoVo celler ved western-blot, med den behandling som er angitt i figuren. (C, D) Påvisning av AKT og MAPK signal av western-blot i LoVo og SW948 celler med HGF eller HRG1-β1 behandling, med eller uten ulike agonister eller antagonister, som angitt.
AKT og MAPK er to Cell-signalveier Gover celleviabilitet av tykktarmskreft cellelinjer med forskjellige reseptorer uttrykk mønstre
for ytterligere å undersøke RTK uttrykk variasjon i kolorektal cellelinjer, en rekke tester av celle levedyktighet og cellesignalisering trasé som ble utført med spesifikke hemmere av AKT og MAPK. For LoVo-celler, ble cellelevedyktigheten signifikant redusert ved behandling med LY294002, en inhibitor av AKT signalering. Men var det ingen signifikant effekt når det ble behandlet med en hemmer av c-MET, U0126. Hvis LoVo ble behandlet med begge inhibitorer, rednings effekten av HRG1-β1 på celler som var mye sterkere enn den til HGF (figur 5A), og signaleringsaktivering analyse ved western blot også underforstått at aktivering av både AKT og MAPK ble delvis gjenopprettet ved HRG1 -β1 selv når de behandles med hemmere (figur 5B). Dette resultatet indikerer at cellen levedyktighet var ikke veldig avhengig av ErbB3 /c-MET /MAPK signalnettverk, men i stedet var avhengig av ErbB3 /ErbB2 /AKT signalering. Imidlertid er situasjonen ikke er den samme i SW948-celler, hvori svekkelse av cellelevedyktighet ved inhibitor av c-MET, U0126, var sterkere enn det som forårsakes av LY294002, og den styrkende virkning var forskjellig fra den i LoVo-celler når de behandles med både LY294002 og U0126, med den styrkende virkning av HGF å være sterkere enn HRG1-β1, og aktivering av både AKT og MAPK-signalering blir sterkere indusert av HGF enn HRG1-β1 (figur 5C, D). Til sammen våre resultater viser at tykktarmskreft viser variasjon i onkogene RTK på grunn av ulike molekylære mønstre uttrykks inkludert ErbB2 /ErbB3 /AKT og ErbB3 /c-MET /MAPK.
Forskjeller i celle levedyktighet i LoVo (A , B) og SW948 (C, D) celler etter behandling med forskjellige agonister eller inhibitorer, som angitt. Dataene er presentert som gjennomsnitt ± SD, og ** P. 0,01 av uparet Student t test
Diskusjoner
Aktivering av RTK er avgjørende for spredning og overlevelse av normal og ondartede celler. Nylig har forskjellige RTK-aktiverende mutasjoner er funnet i en undergruppe av kreftpasienter ved neste generasjon sekvensering, noe som tyder på at konstitutiv aktivering av RTK’er er en av de underliggende mekanismene for kreftutvikling. Men den resterende populasjon av kreftpasienter har ingen slike mutasjoner som innebærer at alternative RTK-aktiverende mekanismer eksisterer. Her viser vi en av slike alternative mekanismer er overekspresjon av RTK familiemedlemmer av c-MET, og ErbB2, ErbB3, i CRC celler samt representative CRC cellelinjer.
C-MET er en av de reseptor-tyrosin-kinaser (RTK) som er bredt distribuert på overflaten av epitel-opprinnelse endotel-celler. Dens eneste kjente ligand, hepatocytt-vekstfaktor (HGF), uttrykkes hovedsakelig i celler av mesenchymal opprinnelse [11]. C-MET dimerizes og autophosphorylates ved ligand binding, som igjen skaper aktive tilkoblings nettsteder for proteiner som megle serie nedstrøms signalaktivering inkludert MAPK, PI3K-AKT, SRC og STAT. Tallrike studier har rapportert at c-MET er overuttrykt i mange karsinomer inkludert lunge, bryst, eggstokk, nyre, colorektal, skjoldbruskkjertel, lever og gastrisk karsinom [12] – [14]. Det er velkjent at c-MET spiller viktige roller i utviklingen av kreft gjennom sin proliferation- og angiogenese fremmende effekter som utøves av nedstrøms onkogene trasé, og metastase fremmende effekt som hovedsakelig er avhengig av metalloprotease produksjon. På grunn av sin rolle i onkogenesen og progresjon av kreft, blir c-MET ansett for å være et viktig mål i anticancerterapi, og noen biologiske antagonister eller monoklonale antistoffer målrettet mot c-MET har dukket opp som er kjent som c-MET-TKI [15] – [ ,,,0],18]. Enkelte magekreft og NSCLC cellelinjer vise utsøkt følsomhet c-MET TKI, men, celler /svulster behandlet med c-MET TKI etter hvert utvikle resistens. Denne motstanden mot c-MET-TKI er et resultat av å overvinne hemningen gjennom vedvarende høy MAPK og PI3K /AKT-aktivitet, og EGFR-familiemedlemmer kan fungere som komplementære reseptorer for MAPK og PI3K /AKT aktivering mens c-MET blokkert [19] – [22]. Mens kjøp av nye mutasjoner kan være en av de mulige forklaringer til denne motstanden i klinisk behandling, aktive mutasjoner av flere RTK inkludert ErbB2, ErbB3 og c-MET ble oppdaget i mennesketykktarmskreft og andre kreftformer [23] – [27]. RTK overekspresjon og dowmstream signal aktivering gi en alternativ og gratis mekanisme. Imidlertid kan variasjonen av onkogene RTK uttrykk nivåer også understreke betydningen av individuell kreftbehandling.
I denne studien har vi ikke bare bekreftet over-uttrykk for c-MET, ErbB2 og ErbB3 i human kolorektal kreft , men også avdekket variasjonen og komplementære til disse reseptorer. Videre identifiserte vi
in vitro
cellelinje modeller med forskjellige molekyl uttrykk mønstre som oppviser ulik følsomhet for behandling av både antagonister og agonister av c-MET, og EGFR-signalering.
ErbB2-genet er også ofte referert til som Her-2 /neu, en av vekstfaktorreseptorer ledende celle signalisering relatert til cellevekst, adhesjon og bevegelsen [28], [29]. Det er også et hett mål for signalebasert legemiddelutvikling. Trastuzumab, binder en av de relaterte legemidler rettet mot ErbB2, ErbB2 og induserer frakobling av ligand-uavhengig HER2-HER3 heterodimerer, og dermed hemme nedstrøms signalering. Imidlertid har flere studier vist at trastuzumab behandling kan indusere motstand både ved forsterkning av signalering gjennom andre ErbB reseptorer og med cross-talk med heterologe RTK [30] – [32]. Som vi rapporterer i denne studien, har c-MET også blitt funnet å være oppregulert i trastuzumab-resistente ErbB2-overekspresjon celler etter eksponering for trastuzumab. Videre, en mekanistisk studie viste at aktivering av c-MET beskytter cellene mot trastuzumab ved abrogere induksjon av p27. Dette er i overensstemmelse med resultatet oppnådd i vår studie viser at forskjellige molekyl mønstre finnes i human kolorektal kreft. Heterogene uttrykk for ErbB2 og ErbB3 med varierende kombinasjoner av RTK underforståtte potensielt forskjellige kjemoterapi prosjekter
Det er forventet at et økende antall molekylære signalveien baserte legemidler vil dukke opp, rettet mot en rekke mål.; men det er meget mulig at ingen av disse stoffene alene vil ha en dominerende anti-tumor effekt. Kombinasjonsbehandling for kreft er en pågående og utvikle konseptet og viktigst, personlig deteksjon og analyse av et individs molekylær uttrykk mønsteret er uunnværlig for mer effektiv behandling med færre bivirkninger.
