Hepatitt B-infeksjon er mistenkt basert på medisinsk historie, tegn og symptomer, og fysisk undersøkelse. Hvis leverfunksjonstester (blodprøver) er unormale, kan legen mistenke infeksjon med hepatitt B-viruset. Men unormale leverfunksjonsverdier kan komme på grunn av mange forhold som påvirker leveren. Diagnosen hepatitt B er bekreftet basert på bestemte hepatitt B virus blodprøver kjent som hepatitt «markører» eller «serologi. Den blodprøve kan også bidra til å skille akutt fra kroniske infection.These markører er antigener dannet av hepatitt B-virus og antistoffer produsert av immunsystem til å bekjempe viruset. De tre antigener som vanligvis testet inkluderer – overflateantigenet (HBsAg), kjerneantigenet (HBcAg) og e antigen (HBeAg) .HBsAg og anti-HBs: Ved hepatitt B-overflateantigen (HBsAg) er påvist i blodprøven, det indikerer at pasienten er infisert med viruset. HBsAg kan påvises omtrent fire uker etter innledende eksponering for viruset. Hvis personen kommer seg fra akutt hepatitt B infeksjon HBsAg vinner i ca fire måneder etter symptomdebut. Disse menneskene danner antistoffer mot HBsAg (anti-HBs) som gir immunitet mot senere hepatitt B-virusinfeksjon. Tilsvarende, etter vellykket vaksinering personen former anti-HBs i blood.If viruset ikke er ryddet i løpet av en akutt episode personen utvikler kronisk hepatitt B. Kronisk hepatitt B er diagnostisert dersom HBsAg er til stede i blodet i minst seks måneder. I tilfeller av kronisk hepatitt B, fortsetter HBsAg som skal påvises i mange år, og anti-HBs ikke appear.Anti-HBcDetection av IgM-antistoffer rettet mot hepatitt B-kjerneantigen (anti-HBc IgM) kan brukes for å diagnostisere akutt hepatitt B-infeksjon. I senere stadier av infeksjonen, IgG antistoffer (anti-HBc IgG) utvikler og de vedvarer for livet. Dette kan eller ikke kan gi kronisk infeksjon i den enkelte og han kan komme også. .HBeAg, Anti-HBe, og pre-core mutationsHepatitis Vær antigen (HBeAg) oppdages ved blodprøver når hepatitt B-viruset er aktivt å multiplisere. Når antistoff mot HBeAg (anti-HBe) er funnet (også kalt HBeAg serokonversjon), betyr det en mer inaktiv tilstand av viruset og en lavere risiko for overføring. Dersom den hepatitt B-virus gjennomgår en strukturell endring, som kalles en pre-kjerne mutasjon, viruset ikke produserer HBeAg, selv om det er aktivt gjengivelse. I disse personer, selv om ikke HBeAg blir detektert i blodet, er den hepatitt B-virus fortsatt er aktiv, og det er infective.Hepatitis B-virus DNABlood test for påvisning av nivåer av hepatitt B-virus-DNA (HBV DNA) i blodet er den beste markør av hepatitt B-virus reproduksjon. Tilstedeværelsen av hepatitt B-virus-DNA viser at viruset er aktivt multiplisere i personen. HBV DNA er funnet snart etter infeksjon, men hvis infeksjonen er eliminert over tid det ikke er oppdaget. I tilfeller av kronisk hepatitt, fortsetter HBV DNA for å være høy i mange år og kan reduseres hvis immunsystem er i stand til å kontrollere viruset multiplikasjon. Nivå av HBV DNA i blodet er noen ganger referert til som «viral load».