Abstract
Bakgrunn
hepatoma oppregulert protein (HURP) er en del av chromatin- avhengige vei for spindelenheten. Vi undersøkte den prognostiske prediktiv verdi av HURP i menneskelig leverkreft (HCC).
Metoder
HURP uttrykk ble evaluert av immunocytochemistry av fine nål suges hepatomceller i 97 HCC pasienter med Barcelona Clinic leverkreft (BCLC) scenen A. Deretter disse pasientene gjennomgikk delvis hepatectomy (n = 18) eller radiofrekvensablasjon (n = 79) og ble fulgt i to til 35 måneder. De clinicopathological parametrene ble sendt inn for overlevelsesanalyse.
Resultater
HURP uttrykk i pustende HCC celler ble påvist i 19,6% av pasientene. Kaplan-Meier overlevelsesanalyse viste at positive HURP uttrykk (
P
= 0,023), cytologisk gradering ≥3 (
P
= 0,008), AFP ≥35 ng /ml (
P
= 0,039), bilirubin ≥1.3 mg /dL (
P
= 0,010), AST ≥50 U /L (
P
= 0,003) og ALT ≥35 U /L (
P
= 0.005) var alle tilknyttet en kortere sykdomsfri overlevelse. En trinnvis multivariat Cox proporsjonal risikomodell viser at positive HURP uttrykk (HR, 2,334; 95% CI, 1,165 til 4,679,
P
= 0,017), AST ≥50 U /L (HR, 3,697, 95% KI , 1,868 til 7,319,
p
0,001), cytologisk grad ≥3 (HR, 4,249; 95% CI, 2,061 til 8,759,
P
0,001) og tumor nummer 1 (HR, 2,633; 95% CI, 1,212 til 5,722,
P
= 0,014) var uavhengige prediktorer for sykdomsfri overlevelse. Ved å kombinere de 4 uavhengige prediktorer, pasienter med ulike risiko score (RS) viste skilles sykdomsfri overlevelse (RS≤1 vs RS = 2,
P
= 0,001; RS = 2 vs RS = 3, P 0,001). I motsetning til dette, kan pasientene ikke separeres i prognose kan skjelnes fra hverandre ved hjelp av undergrupper AJCC /UICC TNM staging system.
Konklusjon
HCC pasienter med BCLC trinn A kan deles inn i tre prognose-skjelnes grupper av bruk av en risiko score som er basert på HURP uttrykk i pustende HCC celler, ALT, cytologisk klasse og tumor antall
Citation. Chang ML, Lin SM, Yeh CT (2011) HURP Expression-pasning risiko~~POS=TRUNC Poeng Identifiser prognose skilles Undergrupper i Early Stage leverkreft. PLoS ONE 6 (10): e26323. doi: 10,1371 /journal.pone.0026323
Redaktør: Bernard W. Futscher, The University of Arizona, USA
mottatt: 22 juli 2011; Godkjent: 23 september 2011; Publisert: 17 oktober 2011
Copyright: © 2011 Chang et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette prosjektet ble støttet av stipend fra Chang Gung Medical Research Program (CMRP-370693). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Ved hjelp av en integrerende bioinformatikk tilnærming til å analysere sekvensen koder uttrykt i human lever, ble en ny cellesyklus-regulert gen kalt hepatoma oppregulert protein (HURP) identifisert 10 år siden [1]. HURP, uttrykt veldig i menneskelig leverkreft (HCC, altså. Hepatoma), er en mitotisk fosfoprotein substrat for Aurora-A [2]. Aurora-A er en cellesyklus-regulert serin /treonin-kinase som viser toppnivåer av ekspresjon i løpet av G2 /M fase [3], [4]. Det faktum at nivåene av HURP svinge i løpet av cellesyklusen, og når en topp ved G2 /M antyder at det spiller en rolle i cellesyklusregulering [5]. Videre studier har indikert at HURP er en komponent av kromatin-avhengige reaksjonsveien for spindelenheten. Den har en avgjørende rolle i kromatin-indusert microtubule montering, stabiliserer og bunter K-fibre, og er avgjørende for de novo microtubule produksjon fra kromosomer [6]. I tillegg er det aktivitet er nødvendig for riktig kinetochore fangst, effektiv kromosom congression, og rettidig mitotisk progresjon. Defekter i disse prosessene kan utløse upassende anaphase initiering og genomisk ustabilitet [7], [8]. Bortsett fra transkripsjonsregulering, er intracellulær overflod av HURP også regulert av Cdk1 /cyklin B på posttranslational nivå [9], [10]. Det kan imidlertid være noen overflødige trasé kompenserer for funksjonen av HURP i cellesyklusen som HURP (- /-) mus utvikler seg normalt og kan ikke skilles fra sine villtype-kullsøsken. Den eneste dokumenterte fenotypen for HURP (- /-) mus er at hunn-mus er ute av stand til å danne implantasjonssteder på grunn av en manglende evne til å gjennomgå den decidual reaksjon [11]
Til tross for det eksperimentelle data som indikerer en kobling mellom celle. syklus dysregulation og HURP aberrance har ingen overbevisende bevis er etablert hittil tyder på en direkte onkogen rolle HURP i HCC. Men biter av bevis implicating en onkogen potensialet HURP ble sporadisk rapportert. Positiv HURP uttrykket var forbundet med fremveksten og gjentakelse av overgangscellekreft [12], [13]; genekspresjon analyse viste at HURP representerte en prognose markør stand til å skille mellom godartede og ondartede tumorer binyrebark [14], [15]; og i 293T cellelinjer (American Type Culture Collection (ATCC) Manassas, VA, USA), overekspresjon av HURP i differensierte celler øket cellevekst og blokkerte apoptose som normalt induseres av serum sult [16]. På den annen side er det HURP genet stand til å forbedre kjemosensitivitet av deoxycytosine analoger i NIH3T3-celler [17], og det virale proteinet HBX aktiverer ekspresjonen av HURP for å forhindre apoptose i løpet av kreft progresjon og etablering av chemoresistance i Hep3B celler [18] .
HCC står for 90% av primær lever svulster, representerer den femte vanligste kreftformen i verden, og er den tredje største årsaken til kreft-relaterte dødsfall på verdensbasis [19], [20]. En presis iscenesettelse av sykdommen kan hjelpe leger til å forstå prognose og gjøre det riktige valget av terapeutiske metoder til fordel for pasientene. For tiden er det flere prognostiske poengsystemer som er etablert ved hjelp av ulike clinicopathological variabler [21]. Men selv mellom pasienter på samme stadium av HCC og kategorisert av samme scoring system, er det post-terapeutiske prognose fortsatt mangfoldig. Dette er mest sannsynlig på grunn av det faktum at HCC er en multi-etiologiske sykdom med komplekse underliggende patogene mekanismer forårsaket av en rekke risikofaktorer. Antagelig kan inkludering av gode molekylære markører i et prognostisk prediksjon system bøte på disse manglene og forbedre dagens staging metoder [22]. På grunn av tilgjengeligheten av ultralydundersøkelse, så vel som andre avanserte avbildningsmetoder, blir et økende antall HCCs oppdages på et tidlig stadium. Videre, for å minimere invasivitet av prosedyrene, er patologisk diagnose gradvis erstattet av cytologi gjennom tynn nål aspirasjon. I tillegg er kirurgisk fjerning erstattet i stor grad av radiofrekvens ablasjon (RFA) på grunn av den sammenlignbare terapeutiske effekt mellom de to behandlingene. Cytologiske kjennetegn ved HCC celler, inkludert differensiering gradering og farging av spesifikke antigener, er lett hentet fra tynn nål aspirasjon. Disse parametrene er foreløpig ikke inkludert i noen av scoring systemer, men de kan gi viktig informasjon for effektiv prognose prediksjon. Selv HURP først ble utvunnet fra databasen av menneskelig HCC oppregulert gener, sin rolle i menneskelig HCC
in vivo
har vært unnvikende. For å løse dette, har vi etablert en immunhistokjemi flekker metode for å påvise HURP uttrykk i pustende HCC celler fra pasienter. De clinicopathologic funksjoner, cytologiske gradering og HURP uttrykk i HCC celler ble alle tatt i betraktning for å beregne prognostiske prediktorer i disse HCC pasienter.
Materialer og metoder
Pasienter
Dette var et enkelt senter, prospektiv prognostisk studie som ble gjennomført etter godkjennelse av Institutional Review Board på Chang Gung Medical center. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle deltakerne før inkludering. Fra november 2007 til desember 2009, til 97 påfølgende pasienter (62 menn og 35 kvinner), som ble diagnostisert har HCC ved aspirasjon cytologi og minst to dynamiske bildediagnostikk (dynamisk computertomografi og angiografi), ble inkludert i studien. Disse pasientene enten møtte kriteriene for RFA behandling [23] eller hadde lokaliserte HCCs og var egnet for kirurgisk fjerning av svulster. Blod biochemistries for følgende parametre ble analysert: aspartat aminotransaminase (AST, 34 U /L), alanin aminotransaminase (ALAT, 36 U /L), total bilirubin (Bil 1,3 mg /dl), alfa- fetoprotein (AFP, 15 ng /ml), albumin (3.5 til 5.5 g /dl), Protrombintid (10-13 sekunder), kreatinin (F: 0,44 til 1,03, M: 0,64 til 1,27 mg /dl). Hepatitt B-virus-overflateantigener (HBsAg) ble analysert ved en kommersielt tilgjengelig radioimmunoassay-sett (Ausria-II, HBsAg-RIA; Abbott Laboratories, North Chicago, IL). Antistoffer mot hepatitt C-virus (HCV Ab) ble analysert ved hjelp av en tredje generasjons enzym immunoassay (Ax SYM HCV III, Abbott Laboratories, North Chicago, IL)
I tillegg er følgende clinicopathological data ble også registrert. Kjønn , alder, tilstedeværelse av skrumplever, alkoholforbruk, Edmondson er cytologisk klasse, antall svulster, største tumorstørrelse, tilstedeværelsen av ascites på terapi, dato for behandling (RFA eller kirurgi), dato for svulst tilbakefall, og dato for siste oppfølging eller HCC relaterte dødsfall. I vårt legesenter, ble pasienter med hoved portal venetrombose ekskludert fra kirurgisk eller ablasjon terapi.
Liver aspirasjon å diagnostisere HCC
Under ultrasonographic veiledning, en 21- eller 22-gauge perkutan transhepatisk cholangiogram nål ble brukt for aspirasjon cytologi. De lufttørket flekker ble umiddelbart farget med Riu metode [24]. Gradering av HCC ble gjort av Edmondson og Steiners klassifisering [25]. Hvis prøven var utilstrekkelig eller vanskelig for cytologisk diagnose, ble en umiddelbar leverbiopsi for patologisk undersøkelse foretatt [26].
HURP immunocytochemistry
Mus anti-HURP antistoffer ble vennlig levert av Prof. Chou CK (Yang Ming University, Taiwan). Spesifisiteten og sensitiviteten av disse antistoffene er blitt karakterisert i tidligere publikasjoner [1], [11], [16], [27]. HURP-positive og negative HCC vev (i henhold til Western blot-analyse) ble anvendt som kontroller for hvert parti av farging. Normale makrofager, lymfocytter og granulocytter i celle utstryk ble anvendt som intern negative kontroller. Aspirert HCC celler ble fiksert i ren metanol. Hepatocytt ekspresjon av HURP ble vurdert av avidin-biotin-metoden immunoperoxidase. De ble inkubert i fosfatglass saltvann (PBS) inneholdende 3% hydrogenperoksid i 20 minutter og ble deretter vasket to ganger (5 minutter hver) i PBS inneholdende 0,025% Triton X-100 (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) . Platene ble deretter inkubert med 10% normalt hesteserum i 30 minutter, etterfulgt av en inkubasjon med en 1:500 fortynning av muse-anti-HURP antistoff ved 37 ° C i 1 time. Etter å ha blitt vasket med fosfat-bufret saltløsning (PBS; 0,1 M, pH 7,4), ble seksjonene deretter inkubert med biotin-konjugert heste anti-mus immunoglobuliner (Jackson Immunoresearch Lab, West Grove, PA.) Ved en fortynning for 1:400 40 minutter. Etter å ha blitt skylt med PBS, ble seksjonene behandlet med avidin-biotin kompleks (Vectastain Elite ABC Kit, Vector Labs, CA) i 30 minutter og deretter inkubert i en diaminobenzidine løsning (DAB, Vector Labs, CA) i 1 minutt. Nuclear kontra ble utført med hematoksylin.
Tumor Ablation
Pasientene ble behandlet med den internt avkjølt RF ablasjon system (Valleylab ™, Boulder, Colorado, USA). Alle RF ablations ble utført av tre gastroenterologer med rikelig erfaring med ablativ teknikker. Detaljene i tumor ablasjon ble beskrevet tidligere [28].
Kirurgisk fjerning av svulst
Svulster ble helt resected, med en sikkerhetsmargin på over 1 cm.
Følg -up studier
for de pasientene som fikk RFA, ble computertomografi eller magnetisk resonans imaging utført 3 uker senere for å vurdere om ablasjon var fullstendig [28], [29]. Etter fullstendig ablasjon eller kirurgisk fjerning, ble oppfølging utført av ultralyd, røntgen, AFP, og blod biokjemi hver 1 til 3 måneder i det første året og hver 3 til 6 måneder etterpå. Unormale funn ble verifisert av computertomografi eller magnetisk resonans imaging. Intrahepatisk residiv ble etablert ved bruk av kriteriene beskrevet andre steder [30]. Avhengig av plasseringen av lesjoner samt tilstanden til pasienten, ble extrahepatic gjentakelse bekreftet ved biopsi, aspirasjon cytologi, computertomografi eller magnetisk resonans imaging [30].
statistikker
Sykdom -Gratis overlevelse ble målt fra diagnosedato til dato for tilbakefall, metastaser, død eller siste oppfølging. Kaplan-Meier metoden ble brukt for å estimere overlevelse sannsynlighet, og log-rank test ble brukt for å sammenligne overlevelseskurver mellom grupper. For å bestemme tidsavgrensninger av en faktor med parametriske data ble eksperimentell univariat analyse utført for å vurdere sammenhengen mellom faktor og sykdomsfri overlevelse ved hjelp av en serie med økende verdier som tidsavgrensninger. Denne metoden ble brukt til å identifisere kliniske og virologiske prognostiske faktorer i HCC pasienter [30]. De eksperimentelle cutoffs ble beregnet ved hjelp av følgende formel: den minste verdien + n /15 × (den største verdi – den minste verdi) (n = 1-14). Som sådan, ble en føljetong av cutoff-verdier generert for hver para faktor. De eksperimentelle dikotome gruppene ble således adskilt med en cut-off på minst 1/15 eller høyst 14/15 av faktoren rekkevidde. Denne måten å grupperingen var lettere å bli brukt for å ta behandlings anbefalingene i fremtiden. Cut-off som fører til den minste P-verdi ble deretter valgt for påfølgende Cox proporsjonal fareanalyse. Begrunnelsen samt begrensning av denne minimums P-verdi tilnærming i kliniske studier hadde også vært diskutert i en evaluering [31]. Trinnvis Cox proporsjonal fare modeller ble brukt til å forutsi uavhengige prediktorer assosiert med sykdomsfri overlevelse. Resultatene er uttrykt som fare rente forholdstall (HRS) med 95% konfidensintervall (KI). I denne studien ble Bonferroni korreksjon for flere forhold ikke brukes på grunn av to grunner. Først mange av de faktorer som inngår var kjent prognostiske faktorer, men ikke tilfeldig valgt ukjente faktorer. Vårt formål var å forstå hvor viktig det HUPR uttrykket var i sammenligning med disse kjente faktorer. Sekund, vårt endelige mål var å etablere en kombinasjon scoring system. Derfor kandidat faktorer som var muligens betydelig for å bli inkludert.
Statistisk analyse ble utført med SPSS (versjon 18.0).
Resultater
Kliniske parametre
baseline karakteristikker av de 97 pasientene er oppført i tabell 1. Alle av dem tilhørte den Barcelona Clinic leverkreft (BCLC) scenen A. HBV og HCV-infeksjon står for det meste av våre saker. Nesten 90% av pasientene var cirrhose. De fleste av pasientene hadde unormal leverfunksjon med gjennomsnitts ASAT og ALAT høyere enn normale grenser. Men bare et mindretall av pasientene hadde alvorlige komplikasjoner (for eksempel ascites: 11,3%), mens de gjennomsnittlige nivåer av albumin, bilirubin og protrombintid var innenfor normale grenser. 75,3% av pasientene hadde enslig HCC og bare 5,2% av pasientene hadde mikrovaskulær invasjon. Tumorstørrelsen varierte fra 1,3 til 5,0 cm i diameter. 81,4% av pasientene fikk RFA, mens de gjenværende pasientene hadde tumorer fjernet kirurgisk. Ifølge 6
th utgaven av AJCC /UICC TNM klassifisering, var det 69 og 28 pasienter tilhører stadium I og Stage II hhv.
Uttrykk av HURP i HCCs
Blant de 97 pasientene inkludert, ble positivt uttrykk for HURP funnet i aspirerte HCC celler av 19 pasienter (19,6%). Åtte representative tilfeller der aspirerte celler som farget positivt med anti-HURP er vist i figur 1. HURP ekspresjon ble påvist i over 80% av den aspirerte cellene i 15 pasienter og ekspresjon ble lokalisert i cytoplasma i HCC celler (figur 1, nedre panel). Imidlertid, i de resterende 4 pasienter, 50% av HCC celler ble positivt farget (figur 1, øvre panel). I to av disse 4 pasienter, ble bare noen få spredte HURP positive HCC celler funnet.
HURP var farget brun farge.
For å forstå om HURP uttrykket var forbundet med noen av de clinicopathological parametere, logistisk regresjonsanalyse ble utført. Det ble funnet at HURP uttrykk ikke var signifikant forbundet med noen clinicopathological parameter (P 0,05 for alle clinicopathological faktorer).
Association mellom kliniske parametre og sykdomsfri overlevelse
Sammenhengen mellom kliniske parametre og sykdomsfri overlevelse er vist i tabell 2. Blant de parametere, positive HURP uttrykk, cytologisk gradering ≥3, AFP ≥35 ng /ml, bilirubin ≥1.3 mg /dL, ASAT ≥50 U /L, og ALT ≥35 U /L ble funnet å være assosiert med en kortere sykdomsfri overlevelse (figur 2).
n, antall HCC pasienter i faresonen.
Uavhengige prediktorer av sykdom -Gratis overlevelse i trinnvis multivariat Cox proporsjonal risikomodell
Ved hjelp av en trinnvis multivariat Cox proporsjonal risikomodell, forble 4 faktorer som uavhengige prediktorer for sykdomsfri overlevelse: positiv HURP uttrykk i HCC celler, AST ≥50 U /L, cytologisk grad ≥3, og svulst nummer 1. Deres uavhengighet ble også bekreftet av bivariate korrelasjonstester. Det er verdt å merke seg at etter justering for andre konfunderende faktorer, svulsten nummer (som ikke er en vesentlig parameter for sykdomsfri overlevelse i univariat analyse) ble en vesentlig faktor i Cox proporsjonal risikomodell. Hazard ratio (HR), 95% konfidensintervall (KI), og P-verdiene av de 4 uavhengige prediktorer er oppført i tabell 3. Til slutt, tildelt vi en risiko poengsum til hver av pasientene ved beregning av antall uavhengige prediktorer båret av hver enkelt pasient. Risiko score varierte fra 0 til 3, uten pasienten bærer alle 4 faktorer (figur 3). Fordi ingen signifikant forskjell ble funnet i sykdomsfrie overlevelse mellom pasienter med risikoscore = 0 og de med risikoscore = 1 (figur 3A,
p
= 0,421), ble disse to gruppene slått sammen (figur 3B) . De sykdomsfrie overlevelse var signifikant forskjellig blant pasienter med risiko score ≤1, pasienter med risiko poengsum = 2, og pasienter med risiko poengsum = 3 (figur 3B). I kontrast, ingen forskjell (
p
= 0,91) ble observert mellom tilbakefall-fri overlevelse av 69 TNM stadium I og 28 scene II pasienter.
(A) Sammenligning av sykdoms- gratis overlevelse blant pasienter med ulike risiko score varierte fra 0 til 3. (B) hos pasienter med risikoscore = 0 og de med risikoscore = 1 ble slått sammen.
Diskusjoner
generelt lever reseksjon var overlegen til RFA i HCCs kvalifisert for kirurgisk fjerning, spesielt for svulster 3 cm [32]. Ved behandling av pasienter med enslig HCC ≤ 3 cm, har RFA en sammenlignbar gjentakelse overlevelse til kirurgisk fjerning samtidig er mindre invasiv [33]. Men fortsatt lever reseksjon behandling av valget for HCC i noncirrhotic pasienter på grunn av den godt bevarte leverfunksjon i rest leveren. På den annen side er RFA sikker og effektiv i å håndtere HCC pasienter med levercirrhose, og dens høy repeterbarhet gjør det spesielt verdifullt i å kontrollere intrahepatiske gjentagelse [34]. I to prospektive randomiserte kontrollerte studier som sammenlignet RFA med kirurgisk reseksjon, var ingen signifikant forskjell funnet i total overlevelse eller tilbakefall overlevelse. Videre lavere complication priser var Sprak hos pasienter behandlet med RFA [35], [36]. Derfor bør valget av terapi i meget tidlig stadium HCC avhenge av pasientens egnethet for kirurgi, den funksjonstilstand, alvorligheten av levercirrhose, og gjennomførbarheten av RFA gitt plasseringen av svulsten [37]. I vår serie ble pasienter uegnet for hepatectomy utsatt for RFA. I samsvar med tidligere rapporter, sykdomsfri overlevelse mellom disse to metodene var ikke signifikant forskjellig (tabell 2). Derfor bør favorisering av de ulike behandlingsmetodene være ubetydelig.
Den heterogene natur HCC har i stor grad hindret søk etter effektive molekylære prognostiske prediktorer. I en case-control studie av 39 hepatitt C-virus-relaterte HCC tilfeller (24 tidlig stadium) og 77 matchede kontroller, verken des-gamma-carboxy protrombintid eller AFP var i stand til å forutsi optimalt fremveksten av HCC [38]. Dermed, selv for HCC som har en homogen underliggende sykdom, en pålitelig biomarkør har ennå ikke funnet. Ifølge 6
th utgaven av AJCC /UICC TNM klassifisering, 69 og 28 BCLC stadium A-pasienter i den aktuelle studien ble klassifisert som stadium I og II, henholdsvis. Imidlertid kan disse pasientene ikke deles inn i prognose skjelnes undergrupper ved hjelp AJCC /UICC TNM staging system. I denne studien, viste vi den uavhengige prediksjon av sykdomsfri overlevelse i HCC av HURP uttrykk i aspirerte HCC celler. HURP regnes som en stamcelle markør og er umulig å oppdage i fullt differensierte celler [39]. I likhet med denne observasjonen, en annen stilk cellemarkør, epitelial celle adhesjonsmolekyl (EpCAM), ble funnet å bli uttrykt overveiende i sammenflytende multinodulært typen HCC og EpCAM ekspresjonsnivåene forutsagt gjentakelse av HCC [40]. I tillegg overekspresjon av Aurora B, en kromosom passasjer protein som er involvert i kromosom segregering, spindel-sjekkpunkt, og cytokinese [41], uavhengig spådde tumorinvasjon og dårlig prognose av HCC [42]. Den funksjonelle likheten mellom HURP og Aurora B støtter videre prediktiv rolle HURP i sykdomsfri overlevelse av HCC.
I de senere årene, tumor celle seeding langs nålen kanalen har vist seg å være en risiko forbundet med lever biopsi [43]. Tynn nål aspirasjon cytologi har vist seg å være en sikker og nøyaktig alternativ for leverbiopsi for å identifisere de aller fleste av HCC [44]. Derfor kan HURP flekker i pustende HCC celler potensielt utvikle seg til en praktisk metode for å forutsi sykdomsfri overlevelse av HCC. Det er imidlertid noen begrensninger forbundet med denne teknikken. Mens HURP er oppkalt etter sin gen blir oppregulert i menneskelig HCC, bare 19,5% (19/97) av vår HCC aspirert prøvene viste positiv HURP uttrykk. Det er mulig at i de resterende prøver, uttrykket nivåer av HURP var for lav for immunhistokjemi deteksjon. Sannsynligvis i disse prøvene, de fleste av HCC celler var i nonproliferating «out-of-syklus «statene. Dette førte tumorer til å vokse langsomt, noe som resulterte i en lengre sykdomsfri overlevelse. Alternativt, i lys av antakelsen om at HURP kan være en stamcelle markør, den lave forekomsten av HURP-positive celler i denne studien kan gjenspeile det faktum at de fleste av våre HCCs oppsto fra betennelse-relaterte mutasjon forårsaket av virus fornærmelser til hepatocytter (HBV eller HCV-infeksjon i vår serie var over 90%), mens HCCs som utvikler seg fra
de novo
mutasjon av de naive lever stamceller kun utgjorde et mindretall av tilfellene. I denne studien viste vi at høy ASAT, ALAT og bilirubin nivåer korrelerer med en kortere sykdomsfri overlevelse. Dette tyder på at viruset relaterte lever necroinflammation spiller en viktig rolle i HCC tilbakefall. På denne tiden, er det ikke klart om det er en vei for de HCC celler som utvikler seg fra virus relatert hepatocytter skade å utvikle seg til HCCs med underskrift av kreft stamceller. Til slutt, som nevnt i innledningen, redundante baner som kan kompensere for HURP funksjon er blitt foreslått. Som sådan, for HCCs som mangler HURP uttrykk, alternative onkogene reaksjonsveier som ikke er relatert til HURP over-ekspresjon er svært sannsynlig.
Et annet underlige aspekt ved den foreliggende data er at nesten alle HURP ekspresjon lokalisert i cytoplasmaet av celler HCC . Importin-α1 viste seg å være en uavhengig prediktor for tidlig tilbakefall etter HCC reseksjon [45]. HURP er en av spindelenheten faktorene hvis aktivitet er regulert av importins, og steady-state fordeling av HURP bestemmes ved kontinuerlig skytteltrafikk av HURP mellom cytoplasma og cellekjernen via importin [46]. De fleste HURP studier har fokusert på sin spindelenheten rolle i kjernen i løpet av mitose, mens lite er kjent om sin funksjon i cytoplasma under interfase. Både HURP og Importin-α1 er over-uttrykt i HCCs med dårlig prognose, noe som antyder viktige roller for disse molekylene i onkogenese. Den avvikende cytoplasmatiske over-uttrykk for HURP i HCC kan implisere en uutforsket funksjon i cellesyklusregulering som krever ytterligere avklaring.
Bortsett fra HURP positivitet, AST ≥50 U /L, cytologisk grad ≥3, og svulst nummer 1 ble også funnet å være uavhengige prediktorer for sykdomsfri overlevelse i våre HCC pasienter. Cytologisk gradering representerer differensiering av HCC celler og svulsten tallet kan tyde på en uni- eller multi-focal svulst opprinnelse eller alternativt iscenesettelsen av HCC. Disse faktorene er alle tyde på dårlig prognose og er dokumentert av flere studier [47], [48]. ASAT, ALAT, bilirubin og AFP nivåer, som ble identifisert til å være betydelige prognose prediktorer i univariat analyse, reflektert enten graden av betennelse (ASAT, ALAT og bilirubin) eller tumorbelastning (AFP). AFP speiles også graden av leverbetennelse i noen tilfeller [49]. I litteraturen flere linjer av bevis indikerer at leverbetennelse er en prognostisk indikator for HCC. Den preoperative CRP-nivået ble vist å være assosiert med aggressivitet av tidlig tilbakevendende HCC i en studie av 124 pasienter som gjennomgikk hepatectomy [50]. I tillegg har studier vedrørende HCV-relaterte HCC HCC vist at nesten alltid utvikles i et histologisk unormal lever og at Eksistensen av kronisk leversykdom representerer en potensiell risiko for utvikling av HCC [51]. Faktisk kan kronisk lever necroinflammation med påfølgende generasjon av reaktive oksygenforbindelser indusere kromosommutasjoner og til slutt malign transformasjon prolifererende hepatocytter. Likeledes, dårlig leverfunksjon reserve, foreslått av hyperbilirubinemi, var kjent for å være signifikant assosiert med HCC forekomst i andre studier [52]. En studie som inkluderte 150 pasienter med en enkelt HCC mindre enn 5 cm i diameter behandlet av partikkel strålebehandling fant at Child-Pugh klassifisering var en uavhengig risikofaktor for lokalt tilbakefall [53]. Til slutt, i en retrospektiv studie bestående av 413 cirrhosepasienter HCC pasienter som fikk RFA og 648 cirrhosepasienter HCC pasienter som fikk kirurgisk reseksjon, ble serum AFP funnet å være den eneste betydelige prediktiv faktor for all overlevelse analyser [54]. Ved å gre 4 uavhengige prediktorer, som hadde blitt direkte eller indirekte knyttet til prognosen for HCC i litteraturen, risiko score til pasienter med HCC separert pasientene inn i tre forskjellige grupper med vesentlig forskjellige post-terapi prognoser. Derfor, i pasienter med BLCL fase A, risiko score som inkluderer HURP farging er i stand til å gi ytterligere forskjeller mellom ulike post-terapeutiske prognosegrupper. Den lille utvalgsstørrelsen med denne studien er imidlertid begrenset klinisk verdi. For å validere den prognostiske betydningen av HURP uttrykk i en større HCC kohort, vil en multisenterstudie være svært lærerikt og bør gjennomføres i fremtiden.
Så vidt vi vet, er dette den første studien om klinisk anvendelse av HURP ekspresjon i å forutsi den sykdomsfri overlevelse av HCC pasienter. En ny risiko score, består av 4 uavhengige prediktorer inkludert HURP positivitet i HCC celler, AST ≥50 U /L, cytologisk grad ≥3, og svulst nummer 1, separert HCC pasienter med BCLC trinn A i tre prognose-skjelnes grupper. Disse funnene kan være verdifullt for å vurdere effekten av terapeutiske inngrep for HCC pasienter med BCLC fase A, som er den mest vanlige fasen oppdaget på grunn av tidlig deteksjon av HCC via velordnet tumor undersøkelsen. Endelig kan personlig terapi og oppfølging av pasienter med tidlig stadium HCC skje i nær fremtid.
