Abstract
Reseptor tyrosin kinaser (RTK), som svar på sine vekstfaktor ligander, phosphorylate og aktivere nedstrøms signaler viktige for fysiologiske utvikling og patologisk transformasjon. Øket ekspresjon, aktivering av mutasjoner og omorganisering fusjoner av RTK’er føre til kreft, inflammasjon, smerte, nevrodegenerative sykdommer og andre lidelser. Aktivering eller over-ekspresjon av ALK, ROS1, TRK (A, B, og C), og RET er assosiert med onkogene fenotyper for de respektive vev, noe som gjør dem attraktive terapeutiske mål. Cancer array-cDNA-undersøkelser vist over-ekspresjon av TRK-A og ROS1 i en rekke kreftformer, sammenlignet med deres respektive normale vev kontroller. Vi har syntetisert et bibliotek av små molekyler som hemmer de ovenfor angitte RTK’er med picomolar til nanomolar potens. Ledningen molekylet GTX-186 hemmet RTK-avhengige kreftceller og tumorvekst.
In vitro Hotell og
in vivo
vekst av TRK-A-avhengige IMR-32 neuroblastom celler og ROS1-overekspresjon NIH3T3 celler ble hemmet av GTX-186. GTX-186 også hemmet inflammatoriske signaler formidlet av NFkB, AP-1, og TRK-A og potent redusert atopisk dermatitt og luft-posen betennelse i mus og rotter. Videre GTX-186 effektivt hemmet ALK fosforylering og ALK-avhengige kreftcellevekst. Samlet har RTK inhibitor GTX-186 en unik kinase profil med potensial til å behandle kreft, betennelser, og nevropatisk smerte
Citation. Narayanan R, Yepuru M, Coss CC, Wu Z, Bauler MN, Barrett CM , et al. (2013) Discovery og Preklinisk Karakterisering av nye små molekyl TRK og ROS1 tyrosinkinasehemmere for behandling av kreft og betennelser. PLoS ONE 8 (12): e83380. doi: 10,1371 /journal.pone.0083380
Redaktør: Irina U. Agoulnik, Florida International University, USA
mottatt: 11 oktober 2013; Godkjent: 02.11.2013; Publisert: 26.12.2013
Copyright: © 2013 Narayanan et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Forfatterne har ingen støtte eller finansiering for å rapportere
Konkurrerende interesser:. RN, MY, CCC, ZW, MB, CMB, MLM, YW, JK, LS, YH, DDM, og JTD er ansatt GTX og har GTX Aksjeoppsjoner. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
reseptortyrosinkinasehemming (RTK) familie består av 58 transmembrane proteiner som regulerer mange cellefunksjoner, inkludert spredning, migrasjon, og cellecyklusprogresjonen [1]. Øket ekspresjon, aktiverende mutasjoner, fusjons rearrangementer, eller coactivation av disse proto-onkogener fremme onkogene transformasjon av de respektive vev [2], [3]. På grunn av deres funksjonelle betydning, er RTK’er utviklet seg som terapeutiske mål for behandling av kreft, inflammasjon, smerte, nevrodegenerative sykdommer, og til [4]. Discovery arbeidet med å utvikle små molekyl hemmere eller antistoffer av RTK har eksponentielt økt de siste 10-15 årene. Siden oppdagelsen av BCR-ABL omorganisering og dens hemmer imatinib, andre RTK-hemmere, som crizotinib (ALK-hemmer), afatinib (EGFR-hemmer), og lenvatinib (VEGFR-hemmer), har blitt utviklet for onkologi indikasjoner [5] – [7 ].
Tropomyosin relaterte kinase (TRK) er en familie på tre RTK (TRK-A, TRK-B, og TRK-C) som regulerer flere signalveier som er viktige for overlevelse og differensiering av nevroner [8 ], [9]. I tillegg til deres kritisk funksjon i nerveceller, de og deres ligander (nervevekstfaktor (NGF), hjerne-avledet vekstfaktor (BDNF), og neurotrofiner, henholdsvis) er viktig for ikke-neuronal cellevekst og overlevelse. Øket ekspresjon og aktivering av TRK-A observeres i neuroblastom, brystkreft, psoriasis, og nevropatisk smerte, for å nevne noen få sykdommer som følge av TRK-A dysfunksjon [10] – [12]. Selv onkogene fusjoner av TRK-A ikke har blitt identifisert til nå, er tilstrekkelig til å øke spredning og invasjon av celler sin over-uttrykk. Mens NGF-antistoffer er i kliniske studier for smerte, K252a, den eneste lite molekyl TRK-A-inhibitor i klinikken, er for tiden under vurdering for behandling av psoriasis [13], [14].
ROS1 er et proto-onkogen som tilhører samme fylogenetisk gren som TRK-A [15]. I motsetning til TRK-A, aktivering av ROS1 oppstår vanligvis når det er fusjonert til onkogene fusjonspartnere som for eksempel smeltet sammen i glioblastoma (FIG) og oppløst stoff bærefamilie 34 elementet 2 (SLC34A2) [2], [16]. ROS1 har vist seg å være overuttrykt i glioblastom, kolangiokarsinom, lungekreft, og andre [17] – [19]. Økt uttrykk for ROS1 i ulike kreftformer har ført til utvikling av selektive hemmere. Crizotinib, utviklet for Alk- positiv lungekreft, også hemmer ROS1 og er i en klinisk studie for ROS1- positiv lungekreft.
Den selektive trykket ved kontinuerlige RTK hemming resultater i fremveksten av ulike klonal bestander av kreft celler med ervervet motstand og ofte akselerert proliferasjon [20], [21]. Escape mekanismer som brukes av kreftceller til å overvinne RTK hemming inkluderer mutasjoner, onkogene fusion, og aktivering av sekundære kinaser og signalveier. Derfor er utvikling av andre og tredje generasjons RTK-inhibitorer viktig å behandle de resistente fenotyper som uunngåelig vil oppstå fra første generasjon terapi. Utvikling hemmere med forskjellige pharmacophores og unike kinase hemmende profiler vil gi nødvendige alternative strategier for å overvinne motstand.
Det finnes noen studier som viser ROS1 eller TRK-A overekspresjon i kreft, men individuelle eller kombinert uttrykk for ROS1 og TRK- en i et bredt spekter av cancere ble hittil dårlig karakterisert. Ved hjelp av 381 cDNA prøver fra 22 kreftformer, viser vi over-uttrykk for TRK-A og ROS1 i kreft som ikke tidligere er beskrevet. TRK-A er over-uttrykt i 100% av pheochromocytoma og de fleste andre kreft analyserte prøvene. GTX-186, en roman RTK inhibitor med unik kinase-hemmende profil, hemmer TRK familien, ROS1, ALK, og RET kinaser på picomolar til lav nanomolare IC
50 verdier. GTX-186 effektivt inhiberte kreft drevet av TRK-A og ROS1 uttrykk og var også enestående i å overvinne inflammatoriske sykdommer slik som eksem.
In vitro
studier viste at GTX-186 hemmer også nevropatisk smerte signale formidlet av TRK-A ligand, NGF, noe som gjør GTX-186 et verdifullt verktøy i armamentarium å bekjempe kreft, betennelser og smerter.
Materialer og metoder
Reagenser
Alle antistoffer ble anskaffet fra Cell Signaling (Danvers, MA). Realtime PCR reagenser og TAQMAN primere og prober ble oppnådd fra Life Technologies (Carlsbad, California). Rotte cytokin matrise-2 ble innhentet fra Ray Biotech (Norcross, Georgia). Kreft undersøkelse cDNA utvalg (CSRT 103) var fra Origene (Rockville, MD). Menneske rekombinante NGF 2,5 s var fra Millipore (Billerica, MA) og deksametason ble hentet fra LKT Labs (St. Paul, MN). Tumornekrosefaktor α (TNF-a) og lipopolysakkarid (LPS) ble anskaffet fra R crizotinib ble oppløst i 10% DMSO + 90% PEG-300) som vist i figurene. Tumorvolum og kroppsvekt ble målt som angitt i figurene. Tumor volum ble beregnet ved hjelp av formelen lengde * bredde * bredde * 0,5236.
Croton Oil-indusert Dermatitis
C57BL /6 mus ble behandlet to ganger på 16 timer og 2 timer før påføring av aceton eller krotonolje (20 ul av 10% krotonolje i aceton på hver indre øre) [24]. Seks timer etter Croton olje søknaden, ble dyrene avlivet, og ørehull ble veid og lagret i RNA senere for RNA isolering.
Air veske Betennelse Modell
Air ble injisert i flankene av Sprague Dawley rotter fire dager (20 ml) og to dager (10 ml) før injeksjonen av carrageenan (1 ml av 2% karragenan) i posen [25]. Seks timer etter carrageenan administrering ble dyrene avlivet, ble 5 ml saltvann injisert inn i posen, posen eksudater ble oppsamlet og antall leukocytter og makrofager infiltrert inn i posen ble tellet under et mikroskop.
Statistiske analyser ble utført hjelp GraphPad Prism programvare.
Resultater
TRK-A og ROS1 er over-uttrykt i flere Kreft
Isolerte studier har identifisert over-uttrykk for enten TRK-A eller ROS1 i neuroblastom [26], lungecancer [2], glioblastom [16], og kolangiokarsinom [17]. Siden begge disse kinaser er proto-onkogener, spekulerte vi at informasjon om kombinert uttrykk kan bidra til å forutsi additiv eller synergistisk vekst av den respektive kreft. For å bestemme TRK-A og ROS1 uttrykksmønster, ble vev-scan-cDNA-matriser inneholdende 381 cDNA-prøver fra 22 kreftformer og tilstøtende normale vev anvendt (figur 1). Kreft i binyrene (7/10 kreftprøver uttrykt TRK-A), bukspyttkjertel (5/17 TRK-A), eggstokk (7/20 TRK-A), spiserør (9/20 TRK-A og ROS1), urinblæren ( 6/22 TRK-A), og endometrium (9/17 ROS1) uttrykt økte nivåer av TRK-A og /eller ROS1, sammenlignet med korresponderende normale prøver. Interessant, 100% av pheochromocytoma, en nevrohormon adrenal kreft med sympatiske nervesystemet opprinnelse, samples over-uttrykte TRK-A mellom 50-1000 ganger, sammenlignet med normale adrenal vev. Tidligere rapporter har vist at pheochromocytoma cellelinje, PC12, uttrykte det høyeste nivået av TRK-A blant mange
in vitro
cellulære systemer undersøkt, bekreftende disse funnene [27]. Prøver fra kreft i urinblæren (3 prøver) og spiserør (4 prøver) uttrykte både TRK-A og ROS1, noe som potensielt kan føre til additiv eller synergistisk spredning. Kreft i prostata, bryst og andre ikke klarte å uttrykke påvisbare nivåer av hver av de kinaser. Siden disse resultatene er fra en liten del av prøvene, må de være validert med flere prøver.
Uttrykk av TRK-A og ROS1 ble kvantifisert ved realtime PCR i cDNA fra 381 prøver fra 22 ulike kreftformer og tilsvarende normal vev. TRK-A og ROS1 ekspresjon ble normalisert til aktin og representert som gangers forskjell fra normale ikke-kreft eksempler ved å bruke ddCt metode. Gjennomsnitt av normale prøver ble tatt for beregning ddCt. Ad.C-Adrenal kreft; Normal-cDNA fra ikke-cancerous vev. Nummer i prøvene indikerer normale prøver.
In vitro karakterisering av GTX-186
GTx186 er en imidazo [4,5-f] isoindole derivat knyttet til tidligere avslørt romanen RTKI GTX -134 [28]. For å utnytte onkologi, provoserende, og nociceptive roller TRK-A og ROS1 tyrosin kinaser, bygde vi et bibliotek av små molekyler som selektivt hemmer kinaser i fylogenetisk gren som inneholder TRK-A og ROS1. GTX-186 selektivt hemmet TRK-A, TRK-B, TRK-C, ROS1, ALK, og RET-mediert fosforylering med IC
50 verdiene i picomolar til lave nanomolare området (tabell 1). På den annen side, GTX-186 hemmet IGF-1R og EGFR-mediert fosforylering ved mye høyere konsentrasjoner (større enn 100 til 1000 nM), noe som indikerer dens selektivitet mot bare et delsett av kinaser. Siden ALK og RET uttrykk i normale vev er minimal og knockout dyr har inkonsekvente fenotyper [29], [30], kryssreaktivitet med disse to kinaser er av liten interesse slik at GTX-186 for å behandle TRK-A og ROS1-avhengige sykdommer, med minimal risiko for uønskede effekter.
GTX-186 Hemmer TRK-A-avhengige IMR-32 Nevroblastom Cell og Xenotransplantat Vekst
Siden IMR-32 neuroblastom celler uttrykker TRK isoformene og er avhengig på TRK-A for deres vekst [31], vi brukte denne linjen som en modell for å studere effekter av GTX-186 på TRK-A fosforylering og vekst, både
in vitro Hotell og
in vivo
. Den svært potent GTX-186 inhiberte NGF-indusert fosforylering av p42 /44 MAPK, en kinase nedstrøms av TRK-A som medierer proliferasjonen og betennelse i respons til NGF [32], i en konsentrasjon så lav som 10 nM (figur 2A). På den annen side, en 10-ganger mindre potent analog inhiberte NGF-indusert p42 /44 MAPK fosforylering bare ved en konsentrasjon som er større enn 100 nM. Deretter, IMR-32-celler ble behandlet med økende konsentrasjoner av GTX-186 for å bestemme effekten på celleveksten etter 72 timer. Som vist i figur 2B, GTX-186 doseavhengig hemmet veksten av IMR-32-celler med en IC
50 verdi på ca 100 nM. GTX-186 også fullstendig hemmet NGF-avhengig migrering av IMR-32 celler (Figur 2C), noe som indikerer at hemming av TRK-A er både anti-proliferativ og anti-invasiv. Under identiske betingelser, GTX-186 hadde ingen virkning på veksten av SH-SY5Y-celler, en neuroblastom-cellelinje som mangler TRK-A [26].
A. GTX-186 hemmer NGF-indusert ERK (p42 /44 MAPK) fosforylering. IMR-32 neuroblastom-celler ble serum-sultet i 2 dager, pre-behandlet i 2 timer med de angitte konsentrasjoner av GTX-186 og ble behandlet med 200 ng /ml NGF i 30 min. Celler ble høstet og Western blot utføres for fosfo-ERK og total-ERK. B. GTX-186 hemmer spredning av IMR-32 celler. IMR-32-celler ble sådd ut i vekstmedium og behandlet med den angitte konsentrasjon av GTX-186 i 3 dager. Celler ble fiksert og farget med sulforhodamin B (SRB) og optisk tetthet (OD) ble målt ved 535 nm. C. GTX-186 hemmer migrasjon av IMR-32 celler. IMR-32-celler ble sådd ut i en Vertikal migrering analyseplate og ble behandlet med bærer, NGF, eller en kombinasjon av NGF og GTX-186. Bilder ble tatt under lett mikroskop 12 timer etter behandling. D-G. GTX-186 hemmer IMR-32 neuroblastom xenograft vekst. IMR-32 celler ble subkutant implantert i hårløse mus (10 millioner celler /mus). Når tumorer nådde 100-200 mm
3, dyr (n = 8) ble randomisert og behandlet daglig med bærer eller 20 mg /kg /dag, i.v. GTX-186. Tumorvolum (D) og kroppsvekt (F) ble målt hver dag i 4 dager. Dyrene ble avlivet, tumorene veies (E), som er lagret i formalin og bearbeidet for TUNEL immunhistokjemi (G-Antall TUNEL-positive celler (venstre panel) og intensiteten for TUNEL-farging (høyre panel)). Verdier er uttrykt som Gjennomsnittlig ± S.E. NGF-nervevekstfaktor; Åpne barer er kjøretøy-behandlet og fylt barer er GTX-186-behandlede prøver. * -statistically Signifikant på p 0,05; ** – Statistisk signifikant på p 0,01
For å demonstrere at de anti-proliferative effekter av GTX-186 er reproduserbare
in vivo
i en svulst xenograft modell, IMR-32. -celler ble implantert i nakne mus og tumorbærende dyr som ble behandlet med bærer eller GTX-186 intravenøst. På grunn av den raske proliferativ og meget inngripende karakter av IMR-32 celler, svulstene vokste fra 200 mm
3 til 2000 mm
3 innen fire dager. GTX-186 effektivt og betydelig redusert tumorvekst (figur 2D) ved å starte fra dag 1 til slutten av studien, noe som resulterer i mer enn 80% tumorvekst-inhibering. Disse effektene ble utløst uten synlige toksiske effekter, inkludert eventuelle endringer i kroppsvekt (figur 2F). GTX-186 også signifikant reduserte tumorvekt (figur 2E) med mer enn 50% sammenlignet med bærer-behandlede dyr. For å bestemme mekanismen for denne anti-tumor effekt, ble formalin faste tumorvev immunhistokjemisk farget for TUNEL og antallet TUNEL-positive celler og TUNEL fargeintensitet ble evaluert. GTX-186 økt apoptose av tumorceller med mer enn to ganger sammenlignet med bærer-behandlede dyr, som vist ved både antall TUNEL-positive celler og TUNEL-farging intensitet (figur 2G). Disse effektene ble utløst med en steady state konsentrasjon på ca 50 nm GTX-186, som er sammenlignbart med
in vitro
IC
50 verdier.
GTX-186 utløser Anti-inflammatoriske effekter in vitro
TRK-A og dens ligand NGF er mediatorer av inflammatoriske sykdommer slik som eksem, psoriasis og artritt. NGF er uttrykt i makrofager og
in vitro
, NGF induserer TNF-α syntese og synergizes med interferon-γ for å øke ekspresjonen av inflammatoriske cytokiner [33]. Disse effektene kan omgjøres av TRK-A-hemmere. I tillegg har NGF og TRK-A blitt implisert i en rekke forskjellige inflammatoriske og allergiske tilstander, inkludert astma og polymorfonukleære leukocytt kjemotakse [34]. For å forstå virkningen av GTX-186 på inflammasjon indusert av forskjellige cytokiner og vekstfaktorer, PC12-celler ble forbehandlet med GTX-186 eller deksametason og ble deretter behandlet med PMA eller NGF for å indusere ekspresjon av inflammatoriske cytokiner. Mens GTX-186 effektivt hemmet ekspresjon av MMP-3, et matriks-metalloproteinase, indusert av både PMA og NGF, deksametason hemmet MMP-3 ekspresjon bare indusert av PMA, men ikke med NGF (figur 3A). Dette viser at NGF og PMA medierer inflammasjon via forskjellige mekanismer, og glukokortikoider, så som deksametason, er effektive bare i ikke-NGF-mediert betennelse. For å bestemme bredere anti-inflammatoriske effekter av GTX-186, hvis noen, IMR-32-celler (figur 3B), normale humane keratinocytter (NHEK, figur 3C), LADMAC makrofager (figur 3D), og RAW 264.7 musemakrofager (figur 3E) ble forbehandlet med GTX-186, og inflammatoriske cytokiner ble indusert ved NGF, TNF-α, eller LPS. GTX-186 effektivt hemmet viktige inflammatoriske mediatorer slik som cFos, IL-8 og IL-1β med potens sammenlignes med dens virkninger på kinaseaktiviteten.
Celler ble serum sultet i 2 dager, forbehandlet med indikerte konsentrasjoner av GTX-186 i 30 min og ble behandlet med vekstfaktorer eller cytokiner i 12-16 timer. RNA ble ekstrahert, cDNA syntetisert, og ekspresjon av inflammatoriske gener ble målt ved realtime PCR ved anvendelse av Taqman-primer og prober. Alle forsøk ble utført in triplo og gjentas minst tre ganger. Verdier er uttrykt som Gjennomsnittlig ± S.E. Dex-Dexamethasone; PMA-forbolmyristatacetat; NGF-nervevekstfaktor; TNF-α-tumornekrosefaktor; LPS-Lipopolysakkarid; MMP3-Matrix Metalloproeinase 3; IL-8-interleukin 8; PC-12-feokromocytom-celler; IMR-32-neuroblastom celler; NHEK-Normal human epidermal Keratinocytter; LADMAC-macrophage /Monocytter; RAW-264.7-Mouse makrofagceller.
GTX-186 Hemmer Croton Olje-indusert atopisk dermatitt i Mus
Siden TRK-A har vært innblandet i psoriasis [12] og dermatitt [ ,,,0],35] og GTX-186 hemmet IL-8, en av de kritiske cytokiner som medierer dermal betennelse [36] (figur 3C), evaluerte vi GTX-186 i en krotonolje modell av atopisk dermatitt. Krotonolje øker erytem, øre vekt, og vaskulær lekkasje, en fenotype som ligner på atopisk dermatitt [37]. Bruk av krotonolje økt ødem og vekten av ørene, som var doseavhengig redusert med GTX-186 (figur 4A). RNA fra øret slag ble isolert og ekspresjon av forskjellige gener i de inflammatoriske pathways ble målt (figur 4B). Croton olje økte uttrykk for alle de målte betennelses sti gener, inkludert NGF, som alle ble markert hemmet av GTX-186 og deksametason.
A. C57BL /6-mus (20-25 g, n = 3) ble gitt to ganger med den angitte dosen av GTX-186 (sc) eller dexamethason (sc), 16 timer og 2 timer, før påføring av krotonolje (20 ul 10 % krotonolje i aceton på hver indre øret). Seks timer etter krotonolje søknad, ble dyrene avlivet, ørehull ble veid og lagret for RNA-isolering. * Indikerer signifikans på P 0,05 fra aceton brukt kjøretøy-behandlede dyr. # Indikerer betydning ved P 0,05 fra krotonolje brukt kjøretøy-behandlede dyr. B. RNA ble isolert fra øret slag av dyrene i panel A og ekspresjon av gener som er angitt ble målt ved hjelp av realtime PCR og normalisert til GAPDH ved hjelp av TaqMan primere og prober. Verdier er uttrykt som Gjennomsnittlig ± S.E. Dex-deksametason; 186-GTX-186; NGF-nervevekstfaktor; IL-Interleukin; CCL-kjemokin ligand; MMP-matriksmetalloproteinase; MCSF-makrofagkolonistimulerende Factor.
GTX-186 Hemmer Karraqenanfremkalt Betennelse i Rat Air veske Modell
NGF-antistoffer er klinisk vellykket i behandling av leddgikt smerte [38]. Imidlertid potensial til å behandle systemisk inflammasjon i forbindelse med smerte ble ikke evaluert. Siden GTX-186 hemmet inflammatoriske cytokiner i en rekke cellelinjer, inkludert makrofager, testet vi GTX-186 i karrageenan-indusert systemisk inflammasjon ved hjelp av en luftpose modell. Luften posen modellen er fysiologisk og mekanistisk sammenlignes med leddgikt, og dermed denne modellen ble brukt til å evaluere GTX-186 [25], [39]. Administrering av carrageenan økt leukocytt og makrofag infiltrering inn i luftposen, sammenlignet med saltbehandlede dyr (figur 5A og 5B). Subkutan og intra posen administrasjon av GTX-186 betydelig redusert leukocytter og makrofagin. Intra-posen administrasjon av GTX-186 fremkalte et bedre svar enn subkutan administrasjon, noe som indikerer en positiv sammenheng mellom eksponering for legemidlet på stedet av betennelse og anti-inflammatorisk effekt.
A-C. En pose ble opprettet subkutant i en flanke av rotter (n = 3) ved injisering av 20 ml luft i fire dager før og 10 ml luft to dager før behandling. GTX-186 (fm i panel A og intra-pose eller sc i panel B; 40 mg /kg), deksametason (30 mg /kg sc), eller indometacin (30 mg /kg sc) ble administrert tre ganger, 48 timer, 24 timer, og en time, før administrering av carrageenan (1 ml av 2%). Seks timer etter carrageenan administrering ble dyrene avlivet, 5 ml saltvann ble injisert inn i posen for å spyle posen fluidet og antallet av leukocytter og makrofager infiltrert inn i posen ble tellet under et mikroskop. TNF-α ble målt ved anvendelse av en ELISA i posen eksudater fra eksperiment i panel B. (C). D. Effekt av GTX-186 på inflammatoriske cytokiner i karragen-indusert luftlomme inflammasjon ble målt i posen eksudater ved hjelp av et cytokin matrise. Nøkkel cytokiner ble kvantifisert og uttrykt som søylediagrammer til høyre. Verdier er uttrykt som Gjennomsnittlig ± S.E. n = 3. 186-GTX-186; Indom-Indomethacin; Dex-Dexamethasone; TNF-tumornekrosefaktor; IL-Interleukin; Cinc-cytokin-indusert nøytrofilmedierte kjemotiltrekkende protein.
Air posen eksudater ble utsatt for cytokin array å bestemme effekten av GTX-186 og indometacin på det globale cytokin protein uttrykk (Figur 5D og Tabell S2) . Interessant, GTX-186 og indometacin skilte seg i sine effekter å hemme cytokiner. Mens både GTX-186 og indometacin hemmet karragenan-indusert TNF-α, IL-1β, fractalkine, IL-13, og leptin, bare GTX-186 hemmet Cinc-1, Cinc-2, IL-6, og LIX. På den annen side, inhiberte hverken GTX-186 eller indomethacin karrageenan-indusert Cinc-3, TIMP-1, PDGFa, MMP-8, MCP-1, noe som indikerer at disse cytokinene kan være kritiske mediatorer av inflammasjon i luftposen modellen .
TNF-α er en viktig formidler av betennelse i karrageenan-indusert akutt betennelse i luftpose synovial modeller. Lokale nivåene av TNF-α korrelert med hevelse og graden av inflammasjon, som ble reversert ved et anti-TNF-α antistoff [25].
