Abstract
Menneskelig bocavirus er den andre autonome menneske parvovirus med antatt sykdomsfremkallende potensial. Andre parvovirus er kjent for å vedvare og med integrere i vertsgenomet, til slutt bidra til den flertrinns utvikling av kreft. Humant bocavirus vedvarer også i en ukjent prosentandel av klinisk asymptomatiske pasienter i tillegg til dem med primær infeksjon. Formålet med denne studien var å analysere rollen av Menneskelig bocavirus i lunge og kolorektal kreft. Derfor ble formalinfikserte, parafininnstøpte, arkivtumorprøver screenet for menneske bocavirus DNA ved PCR, Southern blotting, og sekvensering. Positive vev ble ytterligere utsatt for fluorescens in situ hybridisering analyse for å spesifikt gjenkjenne humant bocavirus DNA i de infiserte celler. Totalt, 11 til 60 (18.3%) lunge og 9 av de 44 (20,5%) kolorektale tumorer testet positivt for humant bocavirus DNA ved hjelp av PCR og ble bekreftet ved sekvensering og fluorescens in situ hybridisering analyse. Således er humant bocavirus DNA til stede i kjernen av infiserte celler, i enten enkle eller multiple kopier, og ser ut til å danne concatemers. Forekomsten av disse menneskelige bocavirus DNA-strukturer støtter eksistensen av den postulerte σ- eller rulle-hårnål replikasjonsmekanisme. Videre fluorescens in situ hybridisering mønstre inspirert den hypotese at humant bocavirus DNA enten som vedvarer cccDNA eller er integrert i vertsgenomet. Dette funnet tyder på at dette viruset kan indirekte bidra til utvikling av enkelte kolorektal og lunge kreft, som gjør andre DNA-virus, som for eksempel menneske hepatitt B virus, eller kan spille en aktiv rolle i kreft ved å samhandle med vertsgenomet.
Citation: Schildgen V, Malecki M, Tillmann RL, Brockmann M, Schildgen O (2013) The human Bocavirus er forbundet med noen Lung og kolorektal kreft og vedvarer i solide tumorer. PLoS ONE 8 (6): e68020. doi: 10,1371 /journal.pone.0068020
Redaktør: Amit Kapoor, Columbia University, USA
mottatt: 08.02.2013; Godkjent: 24 mai 2013; Publisert: 27 juni 2013
Copyright: © 2013 Schildgen et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av en ubegrenset forskningsstipend fra Else Kröner-Fresenius Stiftung, Tyskland. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Siden den ble oppdaget i 2005 av Tobias Allander [1], er det økende bevis for at den utbredte menneskelige bocavirus (HBoV) spiller en betydelig rolle i luftveisinfeksjoner (subtype 1) og gastrointestinale infeksjoner (subtyper 2- 4) [2-6]. I tillegg er HBoV den fjerde vanligste virus påvist i luftveisinfeksjoner [7], og antas å være den andre parvovirus som er i stand til å infisere mennesker med potensiale til å forårsake klinisk sykdom. Imidlertid er dens rolle i gastrointestinale infeksjoner nå i tvil basert på en roman studie fra Storbritannia [8].
Tidligere våre gruppe identifisert DNA-sekvenser som inneholder «head-to-tail» genom fragmenter forbundet med en nylig identifisert linker strekningen. Etter publiseringen, ble den observasjon at «head-to-tail» sekvenser oppstå HBoV subtype en bekreftet av Kapoor og kolleger, som identifiserte de strukturer som episomal kovalent lukket sirkulært (CCC) DNA hos pasienter infisert med HBoV subtype 3 [9]. Kapoor og kolleger, samt grupper fra Kina [10,11] og USA [12], konkluderte med at disse cccDNA strukturene kan være virale genomer vedvarer i disse cellene. Denne konklusjonen støtter hypotesen om at HBoV kan vedvare i den infiserte vert og kan eksistere i en asymptomatisk men produktiv tilstand, som i sin tur kan forklare den relativt høye andelen av asymptomatiske pasienter som kaster viruset.
Et annet eksempel på en DNA-virus som vedvarer i et kovalent lukket sirkulær struktur og induserer vevsskade er human hepatitt B virus (HBV). I alle kroniske HBV-infeksjoner, er cccDNA tilstede i levercellene, og dette cccDNA utholdenhet induserer kronisk betennelse som ikke påvirker pasientens tilstand i lang tid, men langsomt fører til leverfibrose, cirrhose, og endelig kreft i en bemerkelsesverdig prosent av kronisk HBV-infeksjoner [13-17].
Gitt at andre parvovirus er i stand til å integrere i vertsgenomet [18], og den første kjente patogene humane parvovirus, parvovirus B19, er forbundet med flere kreftformer, inkludert lymfomer [ ,,,0],19], testikler svulster [20], papillær og anaplastisk thyroid karsinom [21,22] og kroniske inflammatoriske sykdommer så som Hashimotos tyreoiditt [23], vises kardiomyopati og myokarditt [24] en lignende mekanisme for HBoV-assosiert patogenese mulig.
sykdommen løpet av HBOV nærmeste slektninger, dvs. storfe parvovirus (BPV) og minutt virus av hjørnetann (MVC, CNMV, også kjent som CPV-1), resultater fra en innledende infeksjon i luftveiene, etterfulgt av infeksjon i tarmen og påfølgende Shedding via luft /tarm rute [25]. Hypotesene som HBoV kan vedvare i noen målorgan og at de berørte vev oppleve langsiktige skader bør derfor testes.
Dermed adressert vi spørsmålet om HBoV, analogisk for hepatitt B-viruset, kan påvises i tumorer. Tatt i betraktning at patogenesen av HBoV infeksjoner begynner i luftveiene og ender i mage-tarmkanalen, analyserte vi ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) tumorer og kolorektal tumorer. Begge er kreft hvor tumor utvikling er dårlig forstått, og der en viral bidrag ikke har blitt utelukket så langt [26-29].
Materialer og metoder
Etikk uttalelse
Alle prosedyrer ble utført i samsvar med erklæringen av Helsinki og i henhold til en stemme av Etisk komité for Private University of Witten-Herdecke (stemme nei. 73/2012). Dette stemme ble spesielt godkjent for den aktuelle studien. På grunn av den retrospektive natur og dobbel-blindet pasientprøver som brukes i studien, konkluderte Etisk Komité at ingen skriftlig informert samtykke var nødvendig. Studien kohort besto utelukkende av voksne pasienter.
Pasientprøver
Sixty formalinfikserte, parafininnstøpte (FFPE) lunge kreft seksjoner og 44 kolorektal tumorer ble tilfeldig valgt fra arkiverte prøver fra vår rutine kliniske laboratorium. Gjennomsnittsalderen for pasientene var 69,21 år, med en median på 71 år. Studien ble utført i ettertid. Ingen ytterligere kliniske data, inkludert terapi status, røykevaner, eller kreftbehandling, ble brukt fordi denne informasjonen ville ha hatt noen innflytelse på studiet utfallet. Som kontroller, ble tumorvevet fri fra regionen av hver tumor analysert for HBoV når det er tilgjengelig. En ytterligere 10 tumorfri, sunn lunge og kolorektal vevsprøver ble analysert for humant bocavirus DNA. Som flere kontroller, ble prøver fra 10 human papilloma virus (HPV) positive livmorsvulster og 10 HPV negative livmorsvulster, samt 10 brystsvulster screenet for HBoV DNA. Alle kliniske prøver ble samlet inn i 2011 og 2012.
PCR og real-time PCR-analyser
DNA fra FFPE vevsprøver ble ekstrahert med Maxwell 16 FFPE vev kit (Promega, Mannheim, Tyskland) henhold til produsentens protokoll. PCR og real-time PCR ble utført som tidligere beskrevet [30,31].
Sekvense
Prøver som testet positiv med real-time PCR for menneske bocavirus ble utsatt for konvensjonell PCR hjelp av primere HBoV-LC-Ku-en og HBoV-LC-Ku-2 [30,31]. PCR-amplifiserte DNA ble applisert på en 1,5% agarosegel i TAE-buffer og ble gel-ekstrahert før sekvensering. Gel ekstraksjon ble utført ved hjelp av en Qiagen Gel-Purification kit (Qiagen, Hilden) strengt følge pakningsvedlegget. For sekvensering, ble rensede PCR produktene ferdigblandet med enten HBoV-LC-Ku-en primer eller HBoV-LC-Ku-2 primer og sendt til Eurofins MWG (München, Tyskland) for kapillær Sanger-sekvensering. De fasta sekvenser oppnådd ble utsatt for sekvensanalyser og justering ved hjelp av Vector NTI programvare 12,0 (Invitrogen, Karlsruhe, Tyskland). Sekvensering ble utført for alle svulster som testet positivt for HBoV ved PCR (n = 20).
FISH Analyser
Fisk analysene ble utført hovedsakelig som beskrevet for andre vanlig testet biomarkører, som HER2neu og EML4-ALK, som tidligere publisert [32], med den modifikasjon at HBoV- og GAPDH-spesifikke prober ble anvendt, den sistnevnte som en kontroll. De prober ble konstruert for å hybridisere i nærheten av de to terminale regioner av genomet HBoV eller til både 5′-enden og 3′-enden av styre genet (GAPDH).
Testmetoden var lik break-apart FISH tilnærmingen som brukes for påvisning av EML4-alk. Når to probene binder i umiddelbar nærhet til hverandre, de røde og grønne signaler er nær nok til å opptre som en enkelt gul signal. Denne situasjonen kan oppstå dersom HBoV genomer forekomme som kovalent lukket sirkulært DNA, som beskrevet av Kapoor og medarbeidere [9]. I motsetning til dette distinkte signaler atskilt med minst to signallengder indikerer at probene hybridiseres på forskjellige steder, som i en lineær form av bocavirus genomet.
er oppført i tabell 1. prober FISH ble utført som følger : FFPE tumorvev, omkringliggende tumor gratis vev, og kontroll vev ble skåret i tre-mikrometer tykke skiver og montert på lysbilder. Som kontroller, humane HepG2-celler ble dyrket på kammers objektglass som beskrevet tidligere [33] og transfektert med den humane bocavirus plasmider p5TRHBoV [34] og PTA-RSV pCR II-TOPO plasmid inneholdende en delvis RSV N-gen-sekvensen) under anvendelse av Lipofectamine (Invitrogen, . Karlsruhe, Tyskland)
Target
fluorokromkonjugerte
Emission
Sequence
T
M
Modification
GAPDH StartRhodamine GreengreenTCTACGAGCCTTGCGGGCTCCGGGTCTTTGCAGTCGTATG (40) 75 ° C5′-RGR , 3′-RGRGAPDH StopRhodamine RedredCTGGGGACTGGCTTTCCCATAATTTCCTTTCAAGGTGGGG (40) 74,6 ° C5′-RRE, 3′-RREBoca leder SRhodamine GreengreenTCAGACTGCATCCGGTCTCCGGCGAGTGAACATCTCTGGG (40) 75 ° C5′-RGR, 3′-RGRBoca Tail SRhodamine RedredGTTCCTCTCCAATGGACAAGWGGAAAGAAAAGGGTGACTG (40) 72,5 ° C5 « -RRE, 3»-RRETable 1. FISH prober for påvisning av HBoV og GAPDH gener i FFPE- lysbilder av kolorektal og lungesvulster.
Alle prober ble koblet til fluorokromer på sine 3′- og 5′-ender for å forbedre fluorescens-signaler. CSV Last ned CSV
Lysbilder ble behandlet i henhold til ZytoLight SPEC ALK /EML4 TriCheck
TM probe-protokollen (ZytoVision, Bremerhaven, Tyskland) etter produsentens anbefalinger. Prober ble anvendt i konsentrasjoner på 2 pm hver. Mikroskopiske analyser og dokumentasjon ble utført på en Zeiss Axioplan mikroskop bruker AxioVision 4.8-programvaren (Zeiss, Jena, Tyskland). Alle HBoV positive tumorprøver ble utsatt for FISH analyser (n = 20).
Resultater
I alt 11 av de 60 (18,3%) lunge og 9 av 44 (20,5%) kolorektale tumorer testet positivt for HBoV DNA ved hjelp av konvensjonelle sluttpunkt PCR etterfulgt av gelelektroforese (data ikke vist) og ved qPCR (tabell 2). Endepunktet og qPCR resultatene var i avtalen, dvs. prøver som testet positivt etter sluttpunkt PCR var også positive ved real-time PCR og vice versa, mens prøver som var negative ved en metode forble negative med den andre analysen. Videre HBoV DNA ble ikke påvist i noen av kontrollgruppeprøver (10 brystsvulster, 10 HPV-positive cervikale tumorer, og 10 HPV-negativ cervikal tumorer). Sekvensering av PCR-produktene og påfølgende linjer bekreftet at HBoV DNA ble amplifisert fra tumorprøver (Figur 1a). Det var imidlertid ingen sammenheng mellom HBoV kopiere nummer og tumorstadium.
Pasient nr
Tumor opprinnelse
HBoV endepunkt PCR
HBoV endepunkt PCR Sex fra tumor miljø
HBoV FISH
HBoV kopier /ug total DNA
Alignment-nr. (Figur 1)
CR1femaleappendixpositivenegativepositive120656CR2Malecaecumpositivenegativepositive284915CR3femalecaecumpositivenegativepositive885failed sequencingCR4Malecolonpositivenegativepositive125CR5Malecolonpositivenegativepositive14182CR6femalecolonpositivenegativepositive70failed sequencingCR7femalerectumpositivenegativepositive1710failed sequencingCR8Malerectumpositivenegativepositive65failed sequencingCR9femalerectumpositivenegativepositive1failed sequencingL1femalelungpositivenegativepositive9480413L2femalelungpositivenegativepositive156314L3Malelungpositivenegativepositive37L4Malelungpositivenegativepositive119594L5femalelungpositivenegativepositive33L6Malelungpositivenegativepositive3361L7femalelungpositivenegativepositive17285712L8femalelungpositivenegativepositive619012L9femalelungpositivenegativepositive25400011L10Malelungpositivenegativepositive163008L11femalelungpositivenegativepositive110379Table 2. Pasienter, krefttyper og qPCR resultatene fra tumorvev
CR = tykktarms; L = Lung CSV ned CSV
Som referansesekvenser, ble brukt følgende GenBank sjonsnummer:. HBoV-1 = FJ858259 (Bonn-en ) a. på linje PCR-produkt-sekvenser erholdt fra tumor vevsprøver. i alt 15 prøver hadde nok DNA til stede etter PCR-amplifikasjon for direkte sekvensering. sekvenser ble sandblåst og justert til referansestamme Bonn-1. det er åpenbart at alle sekvenser var sterkt konservert og er fullt samsvar mellom referansesekvensen. tre sekvenser som hadde ytterligere ikke-HBoV sekvens oppstrøms for de innrettede områder (vist i figur 1b). b. Justering av oppstrømssekvensen til stede i tre HBoV genomet isolert fra tumorvev. oppstrøms~~POS=TRUNC innsatte sekvensen var observert i tre prøver som var uavhengig DNA ekstrahert og analysert ved PCR og sekvensering i tre uavhengige løper, og dermed unntak av en enkelt gjenstand eller krysskontaminering hendelsen. Overraskende, de understrekede sekvenser fullt samsvar mellom det menneskelige DNA-sekvensen fra kromosom 5, referansesekvenser AC008698.6 (
Homo sapiens
kromosom 5 klone CTB-70H11, baser 76065-76026) og AC025156.2 (
Homo sapiens
3 BAC RP11-494C5 fra Roswell Park Cancer Institute, baserer 130245-130284), noe som indikerer at HBoV er i stand til å rekombinere med sin vert.
i alle HBoV-positive pasient tumorer (tabell 2), ble de sunne vev som omgir disse tumorene også testet for HBoV DNA ved hjelp av PCR (n = 30; 2-tumor frie FFPE-blokker fra det område som omgir hver HBoV-positiv tumor). HBoV DNA ble ikke påvist i noen av de tumor fri vevsprøver undersøkt (to tilstøtende blokker FFPE per pasient, en på hver side av tumoren blokken). Dessuten ble det ikke HBoV DNA påvist i FFPE- vev fra pasienter uten lunge eller kolorektal tumorer (10 friske kontroll lungene og 10 friske kontroll kolorektal vev). Femten isolater passert Sanger-sekvensering kvalitetskontroll og avslørte sterkt konservert HBoV-1 NP1 gensekvenser.
Overraskende, i tre tilfeller ble NP1 DNA-sekvens flankert av et oppstrøms sekvens som inneholdt et konservert del av humant kromosom 5 ( 1b). Som disse tre prøver ble utsatt for uavhengig DNA-ekstraksjon, PCR og sekvense løper, kan muligheten for at denne observasjonen skyldes krysskontaminering blant de tre prøvene utelukkes.
Som det ble tidligere vist at HBoV kan vedvare i en episomal DNA form som er kjemisk definert som et kovalent lukket sirkulært (CCC) DNA, vi undersøkt i hvilken form HBoV DNA vedvarer i disse tumorprøver.
For å svare på dette spørsmålet, en fluorescens in situ hybridisering (FISH ) assay ble utviklet. Den humane HepG2-cellelinjen ble transfektert med p5TRHBoV [34] plasmid, som inneholder et nesten full-lengde kopi av HBoV genomet. Som kontroller, transfekterte vi HepG2-celler med et plasmid som inneholder en delvis humant respiratorisk syncytialvirus (RSV) sekvens og mock-transfekterte celler. Disse dataene er vist i figur 2a.
a. Rader 1-3 viser vev farget med HBoV spesifikke prober og DAPI; radene 4-6 viser positive og negative kontroller. LEH og REH svarer til den venstre enden (5′-enden) og den høyre ende (3′-ende) av det virale genom eller GAPDH-genet. Humane celler transfektert med plasmider med og uten menneskelig bocavirus genomer samt narretransfekterte celler ble brukt som kontroller. Rad 7 viser HepG2 celler farget med prober som er spesifikke for terminal sekvenser av GAPDH-genet. b. Utvidelse av det sammenslåtte bildet av HepG2 celle dobbel farget med sonder spesifikke for den menneskelige GAPDH-genet. Denne figuren viser at avstanden mellom de to forskjellige prober ved 5′-enden og 3′-enden er stor nok til å gi separate signaler (split signal). c. Sammenslåtte bilder av HBoV DNA positive vev, inkludert en negativ kontroll vev.
FISH prober rettet mot områdene nær den venstre enden hårnål (LEH) og høyre ende hårnål (REH) ble brukt. En probe ble merket med en grønn fluorescerende fargestoff, og den andre ble merket med et rødt fluorescerende fargestoff (tabell 1).
Transfekterte cellekulturer analysert ved fluorescens mikroskopi viste at sondene som anvendes for påvisning av HBoV genomisk DNA var meget spesifikk; Bare de cellene som ble transfektert med plasmid p5TRHBoV og hverken mock-transfekterte celler eller celler transfektert med kontroll plasmidet viste signaler (figur 2a, cellekultur). Disse eksperimentene ble utført in triplo.
I alle tumorprøver som testet positive ved PCR, HBoV ble også påvist ved FISH-analyse (n = 20, tabell 2). Flere signaler per celle ble påvist i 3 tykktarmssvulster og 4 lungesvulster, og enkle signaler ble påvist i de resterende seks kolorektal og 7 lungetumorprøver. Figur 2a viser bilder som representerer hver tumortype observert i fisken analysene. HBoV DNA ble ikke påvist i de negative kontrollprøver. HBoV-FISH signaler fra både LEH og REH ble oppdaget. Overraskende, deres fargemønster var ikke homogen: noen prøver viste en enkelt REH og LEH signal pr infisert celle, og multiple signaler ble påvist i andre prøver. Flere signaler per celle ble observert i noen lunge- og kolorektal vev (lunge: n = 4, kolorektal: n = 3), noe som indikerer at flere kopier av HBoV DNA som er tilstede i cellene på grunn av replikasjon eller flere genomer som vedvarer som episomer eller som blir integrert inn i vertens DNA. Disse observasjonene er sammenfallende med det faktum at HBoV replikerer i et midt måte. I tillegg er disse signaler ble ikke alltid er lokalisert i kjernen; noen syntes å være i cytoplasma, som indikert ved å slå sammen de forskjellige fargekanalene.
Videre analyser mikroskopisk FISH av GAPDH-genet viser at avstanden mellom hode og hale signalene til GAPDH-genet er stor nok til å klart skille begge signalene (figur 2a, siste linje, figur 2b, forstørret fra figur 2a). Sammenslåing av de fluoriserende bildene fra HBoV positive tumorer, viser at de terminale HBoV signalene er plassert i nærheten av hverandre i noen tilfeller, som antydet med grønne /røde signaler med en liten gul mellomliggende region, mens de røde og grønne signaler ble klart atskilt i andre (split -signaler), som viser at genomet skjer i en ikke-sirkulær form. De gule signaler støtter tidligere observasjon av Kapoor og kolleger at HBoV genomer vedvarer som cccDNA [9]. Representative fluorescerende bilder er vist i figur 2c.
Diskusjoner
I vår pilotstudie, som omfattet 60 lungesvulster og 44 kolorektal tumorer, identifiserte vi HBoV DNA i 18,3% (n = 11) av alle lungesvulster og 20,5% (n = 9) av alle kolorektal tumorer. Dataene som presenteres tyder på at HBoV er forbundet med noen lunge- og tykktarmssvulster og bekrefter antagelsen om at HBoV utholdenhet økes hos kreftpasienter [35]. Forekomsten av flere FISH-signaler i enkeltceller er forenlig med den hypotese at HBoV replikeres ved den rullende sirkelen eller alternativt rullende hårnål mekanisme for replikasjon. For å undersøke dette problemet, kan videre studier ved hjelp konfokalmikroskopi, en metode som ennå ikke er etablert i vårt laboratorium, være nyttig.
HBoV stammer identifisert i tumorprøver i denne studien alle tilhørte genotype 1, som er den mest hyppig genotype i Europa; Det er ikke uvanlig at ingen andre subtyper ble identifisert, som de andre undertypene er generelt sjelden og er forbundet med akutt gastroenteritt, en klinisk lidelse som ikke ble undersøkt i vårt studium.
Enten HBoV DNA vedvarer i tumorer som episomer eller om den er integrert i det humane genom gjenstår å undersøkes. Våre data viser at HBoV genomet kan bli funnet i en lineær form (split-signaler) eller i en «head-to-tail» form (gul fusjonerte signal eller direkte tilstøtende grønne og røde signaler). Denne observasjonen må tolkes forsiktig uten videre analyser. Den ikke-separert signaler kan representere «head-to-tail» replikering mellomprodukter, cccDNA, som observert tidligere [9,10,36] eller flere genom eksemplarer vedvarer i infiserte celler. De delte signaler kan speculatively tolkes som rullende hårnål replikering mellomprodukter eller som lineær genomisk DNA. Videre DNA ikke er tilstede i kjernen kan være lokalisert i cytoplasma eller pakkede i ekstracellulære viruspartikler.
Oppdagelsen av at HBoV kan vedvare i noen smittede vev i form av cccDNA, i likhet med andre kreftfremkallende virus, kunne tolkes på mange måter. Først HBoV kunne bidra til utvikling av enkelte lunge- og tykktarmssvulster, erkjenner at det fortsatt er uklart om HBoV har en aktiv eller passiv rolle i utviklingen av disse svulstene. Denne hypotese er fortsatt noen spekulasjon, men er understøttet av de humane DNA-fragmenter fra kromosom 5 funnet i tre uavhengige fullt tilfeller, noe som indikerer en rekombinasjon med vert-DNA (figur 1b). Selv om det er usannsynlig, er det minimal risiko for at dette resultatet er en PCR-artefakter. Enten HBoV er i stand til å integrere inn i humant kromosomalt DNA eller rekombinere med det humane genom gjenstår å undersøkes. I en oppfølgingsstudie, kan denne hypotesen bli undersøkt ved hjelp av frisk tumorvev og RFLP-analyse etterfulgt av Southern blotting, noe som ville føre til et band forskyvning i tilfellet med integrering i vertsgenomet. Dessverre, dette var teknisk umulig i vår studie fordi FFPE vev ble brukt i ettertid. Videre er det nødvendig å analysere ekspresjon av virusproteiner i de respektive tumorer og deres interaksjon med cellulære proteiner, en fremgangsmåte som ikke kan utføres i fravær av allment tilgjengelige antistoffer.
Second, noen lungesvulster og tykktarms kunne gi et optimalt miljø for HBoV og støtte HBoV replikering. Den andre forutsetningen i første omgang ser ut til å være mer sannsynlig fordi andre parvovirus foretrekker å dele seg og voksende celler [37,38].
Rollene som menneskelige parvovirus som forårsaker agenter for kreft eller bidragsytere til kreftutvikling har blitt grundig diskutert for det første kjente menneskelige parvovirus B19. I 2007, en kinesisk gruppe påvist parvovirus B19 i 81,1% av kolon adenokarsinomer ved in situ hybridisering og bekreftet dette resultatet i 78,4% av dem ved immunhistokjemi påvise virusproteiner i ISH-positive vev [39]. Studien støttet en tidligere klinisk observasjon hvor B19 var assosiert med lungekreft i en japansk pasient [40]. Dessuten, som nevnt i innledningen, ble parvovirus B19 mistenkt for å være en forårsakende middel av andre kreftformer og kan indusere kroniske inflammatoriske prosesser i en infisert vev [19-24]. Lignende mekanismer kan spille en rolle i HBoV infiserte vev; fremtidige studier bør derfor fokusere på de inflammatoriske prosesser knyttet til HBoV. Samlet utgjør disse observasjonene fører til hypotesen om at menneske parvovirus, særlig HBoV og parvovirus B19, kan spille en aktiv rolle i kreft hos mennesker. Derfor er ytterligere studier basert på prospektive studier ved bruk av friske tumor-vev eller den nye CUFI-8 cellekultursystem [7] er meget ønskelige og kunne klargjøre rollen av disse virus i humane kreftformer.
