Abstract
Selen-bindende protein 1 (SBP1, SELENBP1, hSP56) er en selen-assosiert protein vist seg å være på lavere nivåer i tumorer, og de lavere nivåene er ofte prediktiv til det dårlige kliniske utfall. Skille lat fra aggressiv prostatakreft er en stor utfordring i sykdom ledelse. Sammenhenger mellom SBP1 nivåer, svulst klasse, og tilbakefall av sykdommen etter prostatektomi ble undersøkt av duplex immunfluorescens bildebehandling ved hjelp av en vev microarray som inneholder vev fra 202 pasienter med prostatakreft som opplevde biokjemiske (PSA) tilbakefall etter prostatektomi og 202 matchede kontroll pasienter med kreft ikke gjenta seg. Prøvene ble matchet av alder, etnisitet, patologisk stadium og Gleason grad, og bildene ble kvantifisert ved hjelp av Vectra multispektrale imaging system. Fluorescent etiketter ble målrettet for SBP1 og cytokeratins 8/18 å begrense omsatte i kreftceller, og celle-by-celle kvantifisering av SBP1 i kjernen og cytoplasma ble utført. Atom SBP1 nivåer og atom til cytoplasma-forhold var omvendt assosiert med tumor grad ved hjelp av lineær regresjonsanalyse. Etter klassifisering av prøvene i kvartiler basert på SBP1 nivåer mellom kontrollene, svulster i laveste kvartil var mer enn dobbelt så stor sjanse til å gjenta seg i forhold til de i andre kvartil. Induserbar ektopisk ekspresjon SBP1 redusert evne til HCT-116 humane tumorceller å vokse i myk agar, et mål for transformasjon, uten å påvirke proliferasjon. Celler som uttrykker SBP1 viste også en robust induksjon i fosforylering av p53 tumor suppressor ved serin 15. Disse data indikerer at tapet av SBP1 kan spille en uavhengig bidrar rolle i sykdomsprogresjon og dens nivå kan være nyttig for å skille lat fra aggressiv sykdom.
Citation: Ansŏng E, Ying Q, Ekoue DN, Deaton R, Hall AR, Kajdacsy-Balla A, et al. (2015) bevis for at selen Binding Protein 1 er en svulst lyddemper i prostatakreft. PLoS ONE 10 (5): e0127295. doi: 10,1371 /journal.pone.0127295
Academic Redaktør: Carl G. Maki, Rush University Medical Center, UNITED STATES
mottatt: 08.02.2015; Godkjent: 13 april 2015; Publisert: 18 mai 2015
Copyright: © 2015 Ansŏng et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av en bevilgning fra National Institutes of Health (Grant # R01CA127943) til AMD og stipend fra National Natural Science Foundation of China (Grant # 91229115 og 81272251) for å WY
konkurrerende interesser:.. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Prostatakreft er den mest utbredte typen av kreft blant menn med anslag på over 240 000 nye krefttilfeller og 33.000 dødsfall i USA alene i 2011 [1]. Sykdommen er først og fremst finnes blant eldre menn med om lag 91% av de diagnostiserte som har svulster begrenset til den primære nettstedet eller lokale lymfeknuter [2]. Tidlig påvisning av prostatakreft har økt dramatisk, men det blir stadig klarere at behandling er gitt til et stort segment av pasienter med sykdom var lat, derfor å ha liten innvirkning på deres sykelighet eller dødelighet [3]. Gitt de negative bivirkninger forbundet med prostata kreft behandlinger som radikal prostatektomi, hormonbehandling, brachyterapi og andre former for strålebehandling, er en stor utfordring i å håndtere prostatakreft finne pålitelig måte å skille klinisk signifikant sykdom fra det som er lat og bedre ikke blir behandlet. For å bidra til dette arbeidet har vi fokusert på selen Binding Protein 1 (SBP1, SELENBP1, hSP56), en selenholdig protein som uttrykkes i en rekke forskjellige vevstyper, inkludert hjerne, prostata, lunge og tarm. Form av selen i SBP1 er ukjent så er innholdet av sin tilknytning: selen forblir bundet til proteinet når elektroforese i SDS akrylamidgeler men spaltes ved ekstreme pH [4]. Funksjonen til SBP1 også er ikke klarlagt, selv om det kan være involvert i intra golgi transport [5], har vist seg å regulere HIF-1α [6], og er forbundet med to forskjellige isoformer av von Hippel-Lindau-protein interaksjon deubiquitinating enzym 1, noe som indikerer SBP1 kan ha funksjoner i proteinnedbrytning [6,7].
lav SBP1 nivåer er assosiert med dårlig klinisk resultat i flere krefttyper. Dette ble første gang vist for lunge adenokarsinomer, der lave nivåer av SBP1 var sterkt assosiert med dårlig overlevelse [8]. Deretter ble lave nivåer av SBP1 ble likeledes vist seg å være assosiert med dårlig prognose av ovarial [9], tykktarm [10,11] og sist hepatocellulært karsinom [12]. Lite er kjent om SBP1 rolle i prostata kreft, selv om det er sterkt uttrykt i normal menneskelig prostata vev [13]. Her rapporterer vi på vurderingen av om nivåene av SBP1 indikerer sannsynligheten for biokjemisk tilbakefall av prostatakreft ved hjelp av utfallet microarray, samt studier for å begynne å forstå SBP1 biologiske rolle i kreft.
Materialer og Metoder
UIC Kontor for beskyttelse av forsøkspersoner har fastslått at dette arbeidet ikke oppfyller definisjonen av menneskelige subjekt forskning. Alle data fra menneskelig vev ble analysert anonymt.
Immunohistochemistry
Prostatakreft utfallet microarray ble hentet fra Cooperative prostatakreft Tissue Resource (CPCTR), en multi-institusjonelle konsortium til bank prostatektomi vev , samt relevant pasientdata inkludert demografi, kirurgisk patologi og oppfølging historie, under et sett med ensartede retningslinjer. Den CPCTR har samlet mer enn 6000 prostatakreft og kontrollprøver, den største samlingen av denne typen vev tilgjengelig i dette landet med kliniske og patologiske utfall [14,15]. De arrays brukt i denne studien omfatter vev kjerner med diameter 0,6 mm, i fire eksemplarer, fra 202 menn ( «case») som opplevde biokjemisk tilbakefall (én etter operasjonen PSA-verdi over 0,4 ng /ml eller to påfølgende PSA over 0,2 ng /ml) etter prostatektomi og 202 ikke-tilbakevendende kontroller matchet på alder ved kirurgi (+/- 5 år), årsmodell kirurgi, rase, Gleason score (både primær og sekundær) og patologisk stadium. Vev på objektglassene ble blokkert med H
2o
2 Blokkering reagens (Abcam) i 30 minutter, behandlet med en proteinblokkeringsløsning i 15 minutter ved romtemperatur, skylt og inkubert med monoklonalt mus anti-SBP-1-antistoffet (Cat # M061-3, MBL International.) og CK8 /18-antistoff (amerikansk forskning Products), både på et titer på 1: 100 i 60 minutter ved romtemperatur. Platene ble skylt i TBST i 5 minutter, og deretter behandlet med anti-muse Alexa Fluor 647 og anti-kanin Alexa Fluor 488 polymer i 20 minutter ved romtemperatur. Platene ble skyllet i destillert vann; kjerner ble kontra med DAPI, dehydrert gjennom en alkohol gradient og montert med Micromount (Leica Microsystems). SBP1 og CK8 /18 ble påvist i farget kjerner av multispektrale skanning ved hjelp av Vectra kvantitativ bildesystem (Perkin Elmer, Hopkinton, MA). Autofluorescence ble fjernet fra bildene og epitel (tumor) områder av hver kjerne ble identifisert ved CK8 /18 farging hjelp informere (Perkin Elmer) maskin læring algoritmer. Manuell redigering fjernet godartet epitel fra analyse. DAPI farging ble anerkjent av programvaren som kjernen i hver celle, og det cytoplasmatiske signal ble oppnådd ved prøvetaking peri-kjernefysiske området. Innenfor kreft områder eksporterte vi både kjernekraft og cytoplasmatiske data fra SBP1 kanal på en per-celle basis.
Statistisk analyse
Den fluorescerende intensiteter av kjernekraft og cytoplasma SBP1 ble vurdert for normalitet og log-transformeres for statistisk analyse. Pasientene ble gruppert i tre kategorier basert på deres Gleason grad (kategori 1 = Gleason ≤6, Kategori 2 = Gleason 7 (3 + 4) Kategori 3 = Gleason 7 (4 + 3) eller ≥8). Kjerner med Gleason score 4 + 3 ble tildelt kategori 3, det høyeste Gleason gruppe, fordi dødeligheten hos pasienter med prostatakreft av Gleason vurdering 4 + 3 er tre ganger høyere enn 3 + 4 kreft Stark 2009 [16]. Sammenhengen mellom SBP1 nivåer og Gleason kategorier er vurdert ved hjelp av Wilcox Rank Sum test. Pasient vev ble også tildelt kvartiler basert på SBP1 intensitet blant kontrollpersoner. Betinget logistiske regresjonsmodeller ble montert for å beregne odds ratio og 95% konfidensintervall for risikoen for biokjemisk tilbakefall for hvert kvartil av SBP1. De betingede modeller innarbeidet justering for case-control matchende variabler; flere modeller ble passe med pre-kirurgisk PSA som en kovariat, siden Ptil var ikke en samsvarende faktor. Alle data innhentet ved hjelp av menneskelig vev ble analysert anonymt.
Plasmid Construction
En doksycyklin-induserbar SBP1 uttrykk konstruksjon ble dannet ved å sette av
SBP1
åpen leseramme som genereres av PCR forsterkning ved hjelp av en tidligere generert SBP1 konstruere som mal [17] og ligering inn i pRetroX-Tight-Pur vektor (Clontech, Mountain View, California). For forsterkning, en forover primer (5′- ATAGCGGCCGCTACAGCATGGCTACGA AAT-3 «) og revers primer (5′-ACGAATTCGCTCAAATCCAGATGTCAGAGC-3») ble anvendt, ble amplifikasjonsproduktet spaltet med
NotI
og
EcoRI
og retningsbestemt ligert inn i vektoren. Den induserbar ekspresjon systemet omfatter pRetroX-Tight-Pur-Teton-Advanced plasmid som inneholder Tet-On transaktivatorprotein genet. Tet-On-genet koder for et protein som binder seg til promotor-regionen til pRetroX-Tight-Pur plasmid og induserer transkripsjon av genet nedstrøms for promoteren som reaksjon på doksycyklin. Den SBP1 genet ble innsatt nedstrøms for doksycyklin responsiv promoter-regionen i pRetroX-Tight-Pur plasmid som gir den pRetroX-Tight-Pur-SBP1.
Cell Culture
HCT116 humane colon carcinoma celle linjen ble verifisert (Genetica DNA Lavoratories, Burlington, NC) og opprettholdt i McCoys 5a-medium (Mediatech, Manassas, VA), og den GP2-293 retroviral pakkelinjen ble opprettholdt i DMEM-medium (Life Technologies, Carlsbad, CA). Alt medium ble supplementert med 10% FBS, 100 U /ml penicillin, og 100ug /ml streptomycin og inkubert ved 37 ° C med 5% CO
2. Selen konsentrasjonen av serum som ble benyttet ble bestemt til å være 152 nM av grafittovn atomabsorpsjonsspektrometri utført ved Texas A 1C.
Et eksempel på et bilde av en kjerne oppnådd fra resultatet CPCTR vevet mikromatrise farget med anti-SBP1 (røde) antistoffer etterfulgt av Alexa488 geite-anti-kanin og Alexa647 geit-anti-mus respektivt. Kjerner ble kontra med DAPI (blå). A er et eksempel på atom lokalisert SBP1 viser B cytoplasma SBP1, og C er et eksempel på svært lav SBP1 uttrykk i prostatavevet.
Den SBP1 atom til cytoplasma ratio er omvendt korrelert med prostatakreft Gleason scorer
for å kunne vurdere sammenhengen mellom SBP1 nivåer og Gleason score, pasientene ble gruppert i tre kategorier basert på deres Gleason grad (kategori 1 = Gleason ≤6, Kategori 2 = Gleason 7 (3 + 4) Kategori 3 = Gleason 7 (4 + 3) eller ≥8). Analyse av SBP1 nivåer i prostata vev indikert at den gjennomsnittlige atom SBP1 signal i hver celle var betydelig lavere i kategori 3 enn i kategori 2 (fig 2). I tillegg atom: cytoplasma ratio på SBP1 var betydelig lavere i kategori 3 vs. Kategori 1 (fig 3). Cytoplasmatiske og totale celle SBP1 nivåer ble ikke signifikant assosiert med Gleason score, og heller ikke var det en betydelig forskjell mellom kategori 1 og 3.
Pasienter i prostatakreft utfallet vev microarray ble fordelt i tre kategorier (Gleason Kategori) basert på Gleason score (A). Mean kvantifisert vev SBP1 ble rangert for alle pasienter og tildelt en poengsum 1-368 basert på relative SBP1 nivåer der pasienten med lavest vev SBP1 fikk en score på 1, og pasienten med de høyeste SBP1 nivåene fikk en score på 368. Box-and-whisker plott viser omfanget av score fra pasienter i hver kategori (vertikale linjer) og omfanget av den første og tredje kvartil i hver kategori (bokser). Den horisontale linjen inne i boksen indikerer median. Sammenhengen mellom SBP1 og Gleason Kategori ble bestemt ved hjelp SBP1 i kjernen (B), cytoplasma (C) og total celle (D).
Pasienter i prostatakreft utfallet mikromatriser ble fordelt i tre kategorier (Gleason kategori) basert på Gleason score (A). Mener kvantifisert vev SBP1 ble rangert for alle pasienter og tildelt en poengsum 1-368 basert på relative SBP1 nivåer der pasienten med lavest vev atom: cytoplasma ratio på SBP1 fikk en score på 1, og pasienten med høyest ratio mottatt en poengsum på 368. Box-and-whisker plott viser omfanget av score fra pasienter i hver kategori (vertikale linjer) og omfanget av den første og tredje kvartil i hver kategori (bokser). Den horisontale linjen inne i boksen indikerer median.
prostata kreftpasienter i den laveste kvartil av SBP1 uttrykk er betydelig større sannsynlighet for å inntreffe igjen etter radikal prostatektomi
For å finne ut om det var en assosiasjon mellom SBP1 og biokjemiske gjentakelse, SBP1 nivåer i kjernen, cytoplasma, og total celle ble først analysert ved hjelp av en paret t-test. ble ikke observert noen signifikant forskjell mellom tilbakevendende tilfeller og ikke-recurred kontroller. For å undersøke muligheten for en ikke-lineær sammenheng mellom SBP1 uttrykk og gjentakelse ble prøvene alternativt fordelt i kvartiler basert på vev SBP1 nivåer mellom kontroller. Ved hjelp av denne tilnærmingen, logistisk regresjonsanalyse av de interkvartilt oddsen for prostatakreft tilbakefall indikerte at pasientene i laveste kvartil av atom SBP1 nivåene var signifikant mer sannsynlig å gjenta seg enn de i noen andre kvartil (tabell 1). Alle estimater ble justert for PSA, Gleason grad, scene, rase, året av kirurgi og alder ved diagnose.
Siden svært variabel intracellulær SBP1 stedet ble hyppig observert i enkelte lederne, vi vurdert om forholdet mellom kjernefysisk til cytoplasma SBP1 var knyttet til sannsynligheten for biokjemisk tilbakefall. Pasientene ble tildelt kvartiler basert på SBP1 kjernefysisk til cytoplasma ratio, og beregnet odds ratio og 95% konfidensintervall for sammenhengen mellom prostatakreft tilbakefall og hvert kvartil ble oppnådd. Det var ingen bevis for en signifikant sammenheng mellom kjernefysisk til cytoplasma ratio på SBP1 og prostatakreft tilbakefall (tabell 2). En oppfølging analyse av prosenten av SBP1 positive celler i en gitt kjerne viste en redusert sannsynligheten for tilbakefall blant pasienter i de høyeste kvartil sammenlignet med den laveste kvartil. Total celle prosent positivitet var ikke signifikant assosiert med tilbakefall (S1 tabell). Den positivitet terskelen ble definert av synlig påvisbar intensitet.
Ektopisk uttrykk for SBP1 påvirker ikke spredning av HCT116-celler, men hemmer forankringsuavhengig vekst
Prostatakreft tilbakefall etter radikal prostatektomi oppstår fordi primær svulster har allerede spredning før operasjonen. Anchorage uavhengig vekst har blitt validert som et surrogat fenotype av metastatiske potensielle bruker genekspresjonssignaturer [18]. For å undersøke SBP1 innvirkning på forankringsuavhengig vekst, ble en doksycyklin-induserbar SBP1 ekspresjonskonstruksjon innføres i HCT116-celler. Disse cellene ble valgt på grunn av deres mangel på påviselig SBP1 uttrykk, er tilstedeværelsen av en villtype p53 (se nedenfor), og fordi de har blitt brukt tidligere for å studere SBP1 funksjon [19]. S1A Fig viser robust induksjon av SBP1 i HCT116 TetSBP1 celler.
Spredning av HCT116-celler ble ikke signifikant påvirket av SBP1 uttrykk (Fig 4). HCT116-celler som bare inneholder pRetroX-Tight-Pur-SBP1 plasmid uten Teton transaktivatorprotein plasmid ble brukt til å kontrollere for doxycycline effekter på spredning og ble dyrket samtidig med TetSBP1 celler, ved hjelp av forskjellen i vekst mellom kontrollceller med og uten doksycyklin på hver gang for å justere dataene TetSBP1 spredning. For å gjøre dette, fluorescerende rapporterte veksten av doxycycline behandlet HCT116-TetSBP1 celler (fluorescerende enheter, FU) ble delt av forskjellen i FU sett mellom doksycyklin behandlet og ikke-behandlede kontrollceller. For å bestemme evnen til SBP1 å påvirke vekst i semifast medium, ble HCT116-celler som uttrykker TetSBP1 SBP1 (+ Dox) samt SBP1-null (-Dox) celler suspendert i 0,4% agarose, inkuberes, og koloniene telles 15 dager etter plating. SBP1 betydelig redusert evne til cellene til å vokse i semifast medium (figur 5)
HCT116-celler med TetSBP1 (+ Dox) og uten (-Dox) SBP1 ble dyrket i 6 dager på en 96 brønns tallerken. Celler ble behandlet med 1 ug /ml doksycyklin 48 timer før 0-timerstidspunktet. Fem hundre celler ble sådd ut i triplikat i 24 timer før den 0-timerstidspunktet. Fluorescensmerkede dsDNA fra hver brønn av en 96 brønners plate ble kvantifisert ved fire tiden poeng 0, 48, 96 og 144 timer, og feilfelt representerer standardavvik på hvert tidspunkt.
Evnen av HCT116-celler med og uten SBP1 til å danne kolonier i bløt agar ble målt. Celler indusert til å uttrykke SBP1 samt SBP1-null-celler ble blandet med media inneholdende 0,4% agarose, og hver gruppe ble sådd ut i triplikat på 6-brønners plater belagt med 0,6% agarose i media. Hver brønn inneholdt 5×10
4 celler, og kolonier større enn 0,5 mm ble tellet på dag 15 av vekst (A). Feilfelt representerer S.D. (* P 0,05 n = 3)
SBP1 endrer ikke uttrykk for glutation peroksidase-1 4, tioredoksinreduktase-1 eller NF-ĸB
En mulig forklaring på den undertrykkende virkning av SBP1 på forankringsuavhengig vekst er at det påvirker nivåene av selenoproteins som har blitt implisert i onkogene signalisering via endre nivået av reaktiv oksygen arter (ROS). For å undersøke denne muligheten, ble lysatene fra HCT116 TetSBP1 celler med og uten SBP1 induksjon immunoblottet bruker antistoffer mot TrxRD1, gpx-en, og GPX-4. Disse tre selenoproteins er antioksidanter innblandet i etiologien av flere typer kreft [20]. SBP1 ikke endre nivåene av noen av selenoproteins undersøkt (S1B og S1C figur), heller ikke det påvirke nivåene av ROS sensitive transkripsjonsfaktor NF-ĸB (S1A figur).
SBP1 sensitizes celler til 5 -Fluorouracil
en annen mulig forklaring på sammenhengen mellom aggressiv prostatakreft og lav kjernefysisk SBP1 er at kreftceller, som typisk opplever høy ustabilitet kromosom, har overlevelsesfordel når det er lav atom SBP1. For å undersøke om SBP1 påvirkes celle respons til DNA-skade, ble HCT116-celler behandlet med 5-fluorouracil (5-FU), som blokkerer syntesen av tymidin og fører til DNA-skade [21,22]. SBP1 ble indusert i HCT116 TetSBP1 celler med doksycyklin og dyrket på 96-brønners plater i 6 dager og samplet ved 48 timers tidspunktet samtidig med SBP1-null-kontrollceller i den samme 5um konsentrasjonen av 5-FU. Celler som uttrykker SBP1 var mer følsomme for 5-FU eksponering (fig 6).
Veksten av HCT116-TetSBP1 celler ble målt etter en 6 dagers behandling med 5um 5-FU. Dobbelt-trådet DNA ble målt som en indikator på celleveksten ved fire tid poeng-0, 48, 96 og 144 timer, og Feilstolpene representerer standardavviket ved hvert tidspunkt (* p 0,05, ** p 0,01). Fem hundre celler ble sådd ut i triplikat i 24 timer før 0-timerstidspunktet, og fluorescensmerket dsDNA fra hver brønn av en 96-brønners plate ble kvantifisert etter at cellene ble lysert mens det fremdeles er festet til platen.
SBP1 induserer fosforylering av p53 ved serin 15
Tidligere arbeid har beskrevet involvering av p53 i den cellulære respons på 5-FU [23,24]. Gitt evne SBP1 å sensibilisere celler for 5-FU, undersøkte vi hvorvidt SBP1 påvirker fosforyleringen av serin 15 (Ser15) på p53, som er en post-translasjonell modifikasjon er nødvendig for å aktivere den p53-avhengig DNA-skade reaksjon [25]. Western blotting av ekstrakter fremstilt fra HCT116 cellene ikke oppdage fosforylert p53-Ser15 (Fig 7A). Men induksjon av SBP1 resulterte i robust fosforylering av p53 på Ser15 (Fig 7A). Det er klart at stimulering av fosforylering av p53 ved Ser15 falt sammen med en reduksjon av total p53 (figur 7B).
Totale celleekstrakter fra doksycyklin behandlede eller ikke-behandlede HCT116-TetSBP1 celler ble analysert ved hjelp av immunobloting for endringer i fosforylert Ser15 på p53 (A) og total p53 (B) nivåer i respons til induksjon av SBP1 ved anvendelse av anti-humant SBP1, fosfo p53-Ser15, p53 og p-aktin-antistoffer. β-Actin ble brukt som en endogen kontroll.
Diskusjoner
Sammenhengen mellom SBP1 og prostatakreft aggressivitet ble undersøkt fordi tidligere studier har rapportert lavere SBP1 nivåer var assosiert med dårlig klinisk utfall av pasienter med flere andre krefttyper (anmeldt i [26]). Sammenhengen mellom SBP1 nivåer og flere kliniske trekk ved prostatakreft ble undersøkt ved hjelp av prostatakreft microarray for å identifisere variabler som påvirker pasientenes prognose. Når en mulig sammenheng mellom SBP1 nivåer og Gleason score ble undersøkt, ble total SBP1 nivåer ikke forbundet med Gleason score, i tråd med vår forrige western blot undersøkelse av 24 prostatektomi prøvemateriale [27]. Imidlertid, i den foreliggende data i dette manuskriptet, var det en statistisk signifikant lavere SBP1 atom: cytoplasma-forhold i vev som er kategorisert som høyere grad prostatakreft (kategori 3) sammenlignet med vev kategorisert som lavere grad (kategori 1). I den etterfølgende analyse av biokjemiske gjentakelse, ble den cellulære plasseringen av SBP1 også anvendes i analysen av vevet matrise, noe som indikerer at pasientene i den laveste kvartil av kjerne SBP1 ekspresjon var signifikant mer sannsynlig skal gjentas enn de i en hvilken som helst annen kvartil. Den mekanistiske Betydningen av den cellulære compartmentalization av SBP1 er ikke kjent, og ingen kjent enzymatisk aktivitet har blitt tilskrevet dette proteinet. Det er mulig imidlertid at forandringer i SBP1 rapporterte interaksjon og mulig modulerende innvirkning på ikke-nukleære proteiner som GPX-1 og VDU1, bidra til SBP1 biologiske funksjon (er).
For å kunne undersøke de molekylære mekanismer der SBP1 kan påvirke kreft aggressivitet, vi ectopically uttrykte det i dyrkede celler som ikke uttrykker noen påviselig SBP1. Induksjon av SBP1 i disse cellene redusert sin evne til å vokse i semi-faste medier mens ikke påvirker cellenes proliferative egenskaper. Mens SBP1 har tidligere blitt vist å undertrykke forankringsuavhengig vekst i både PC3 og LNCaP human prostatatumorcellelinjer utvunnet, SBP1 hemmet proliferasjonen eneste av PC3 og ikke LNCaP-celler [6]. Som en del av vårt arbeid for å få en forståelse av mekanismen som SBP1 forårsaket de observerte fenotyper, en robust induksjons i fosforylering av p53 på Ser15 ble observert (fig 5). Som nylig utvidet på, kan fosforylering av p53 på Ser15 påvirke en bred rekke av p53-medierte funksjoner, inkludert cellesyklus-stans, så vel som respons på DNA-skade og andre påkjenninger [28]. Det kan derfor tenkes at i det minste noen av konsekvensene av tapet av SBP1 uttrykk som ofte følger med ondartet progresjon kan bli formidlet gjennom en reduksjon av p53 fosforylering på dette området, og de ulike effektene av SBP1 på HCT116, PC3 og LNCaP kan skyldes til den annen status av p53 i disse cellene; HCT116 og LNCaP har funksjonell p53 mens PC3 ikke [29,30]. På lignende måte kan p53-avhengige prosesser være involvert i økningen i følsomhet for 5-FU observert når HCT116-celler ble indusert til å uttrykke SBP1. Ved hjelp av flercellede kuler for å studere 5-FU motstand i kolorektale cancerceller, Lee et al. rapporterte at SBP1 ble uttrykt forskjellig på 5-FU-resistente celler og disse forfatterne foreslo at SBP1 kan være en ny biomarkør av 5-FU chemoresistance [31]. Dataene som presenteres her, sammen med tidligere studier som har rapportert om effekten av SBP1 i dyrkede celler eller hyppig tap av SBP1 i kreft hos mennesker, kollektivt støtter tanken om en medvirkende rolle SBP1 tap i kreft progresjon.
inntak av selen har vært forbundet med redusert risiko for prostatakreft hos humane epidemiologiske studier [32], selv om resultatene av SELECT selen tilskudd prøve etablert som gir lave doser av selen til eldre menn på gjennomsnittlig risiko i Nord-Amerika ikke redusere forekomsten av prostatakreft [33]. Den mekanismen som inntak av selen kan tenkes å forebygge prostatakreft er fortsatt ukjent, men det kan innebære selen sin innvirkning på selen inneholder proteiner, hvorav flere har vært innblandet i risikoen for kreft og andre sykdommer på grunn av foreningen av spesifikke genetiske polymorfismer med risiko sykdom [34,35]. Effekten av selen forbruk på SBP1 eller noen av de selenocystein holdige selenoproteins er imidlertid ukjent. Men informasjon om sannsynligheten for prostatakreftpasienter gjentakende etter prostatektomi er av avgjørende betydning i arbeidet med å hindre unødvendig behandling for menn med lat svulster. Fremtidige studier bør vurdere prognostiske nytten av å undersøke SBP1 nivåer i prostatavevet og videre undersøke om SBP1 tap bidrar til utvikling av sykdommen.
Hjelpemiddel Informasjon
S1 Fig. SBP1 uttrykk endrer ikke nivåene av GPX-en, gpx-4, NF-ĸB eller TrxRD1.
Totalt celle ekstrakter fra doksycyklin behandlet eller ubehandlet HCT116-TetSBP1 celler ble analysert ved hjelp av immunoblot for endringer i NF-ĸB ( A) og TrxRD1 (B) nivåer i respons til doksycyklin avhengig induksjon av SBP1. Anti-human SBP1, ble TrxRD1, NF-ĸB og p-aktin-antistoffer anvendt for å detektere proteinnivåer. p-aktin ble benyttet som en endogen kontroll. Kontrollceller bare inneholde pRetroX-SBP1 plasmid uten transaktivatorprotein
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127295.s001 plakater (TIF)
S1 Table. Prostatakreftpasienter med høyere prosentandel av positive kjernefysiske og cytoplasma SBP1 flekker i sine prostatakreft hadde mindre sannsynlighet for å gjenta seg.
Odds ratio (OR) og 95% konfidensintervall (KI) for prostatakreft tilbakefall etter kvartil av andelen positive atom og cytoplasmatiske SBP1 farging. Positivitet ble definert av synlig detekterbar intensitet, og kvantifiseres ved hjelp av målingene som oppnås ved Vectra kvantitativ bildedannende system. All OR estimatene korrigeres for PSA, Gleason grad, tumor stadium, og pasientens alder ved diagnose
doi:. 10,1371 /journal.pone.0127295.s002 plakater (docx)
