Abstract
Beclin 1, en nøkkel regulator av autophagy, har blitt funnet å være avvikende uttrykt i en rekke humane maligniteter. Heri, ansatt vi immunhistokjemi (IHC) for å påvise proteinet uttrykk for Beclin en ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) og sammenkoblede normale tilstøtende lunge vev, og analysert sin clinicopathological /prognostisk betydning i NSCLC. Mottaker som opererer karakteristikk (ROC) kurve analyse ble benyttet for å bestemme en cutoff-punkt ( 2 VS. ≤2) for Beclin en ekspresjon i et treningssett (n = 105). For validering, ble ROC-avledet cutoff verdi utsatt for analyse av foreningen av Beclin en med pasientenes kliniske karakteristika og utfallet i en testsettet (n = 111) og den generelle pasient kohort (n = 216). Våre data viste at Beclin en var signifikant lavere hos NSCLC vev sammenlignet med de tilstøtende normalt vev, negativt assosiere med tumor tilbakefall (65,8% vs 32,3%;
p
0,001). I testsettet og den samlede pasientmateriale, lav uttrykk for Beclin 1 viste signifikant dårligere total overlevelse (OS) (
p
0,001) og progresjonsfri overlevelse (PFS) (
p
0,001) sammenlignet med høy uttrykk for Beclin 1. i testing settet og den generelle pasient årsklasse, var median varighet av OS for pasienter med høyt og lavt uttrykk for
Beclin en
var 108 VS. 24,5 måneder (
p
0,001) og 108 VS. 28 måneder (
p
0,001), henholdsvis. Videre lav uttrykk for
Beclin en
var også en dårlig prognostisk faktor innenfor hvert trinn av NSCLC pasienter. Multivariat analyse avdekket at
Beclin en
var en uavhengig prognostisk faktor for NSCLC. Våre funn i denne studien gitt bevis for at Beclin en kan dermed fremstå som en uavhengig prognostisk biomarkør i denne svulsten enhet i fremtiden.
Citation: Zhou W, Yue C, Deng J, Hu R, Xu J, Feng L, et al. (2013) autophagic Protein Beclin en fungerer som en uavhengig Positiv Prognostic biomarkør for ikke-småcellet lungekreft. PLoS ONE 8 (11): e80338. doi: 10,1371 /journal.pone.0080338
Redaktør: Andreas-Claudius Hoffmann, West German Cancer Center, Tyskland
mottatt: 02.06.2013; Godkjent: 02.10.2013; Publisert: 15.11.2013
Copyright: © 2013 Zhou et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Arbeidet ble støttet av Nature Science Foundation National of China (Grant nr 81160305 og Grant nr 81160306), en National Science Fund for Distinguished Young Scholars (Grant nr 30888003), og staten Key Program of National Natural Science of China (Grant Nei. 81130040). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Lungekreft står for 15% av kreftdiagnoser, presentere som en av de viktigste årsakene til kreft-relaterte dødsfall på verdensbasis [1]. Ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) representerer 80-85% av lungekrefttilfellene [2]. Til tross for betydelige fremskritt i kirurgiske teknikker og medisinsk behandling, 5-års overlevelse hos pasienter med NSCLC er fortsatt bare 15% [2]. Vanskelighetene med tidlig diagnose og høyt potensial for metastasering og forekomsten av behandlingsresistens ved avansert sykdom er ansvarlig for dårlig overlevelse av NSCLC. Selv om mye er kjent om årsaksfaktorer, kliniske funksjoner og patogenesen ved NSCLC, den molekylære markør som har stor klinisk prognostisk prediktiv verdi forblir vesentlig begrenset. Mange studier har vist at flere genetiske endringer og epigenetiske endringer er ansvarlig for utvikling og progresjon av NSCLC [3]. Tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjon representerer den mest vanlige molekylære endringer i NSCLC og har vist seg å være assosiert med en dårlig prognose [4]. Aktivering av PI3K /AKT sti og tap av PTEN i NSCLC pasienter er forbundet med høy klasse og mer avansert sykdom [5]. Videre avvikende DNA metylering fungert som en markør for tidlig deteksjon av lungekreft [6]. Promotoren metylering av p16 er en indikator på dårlig prognose av NSCLC [7]. Dermed kan identifikasjon av biologiske markører hjelpe til å vurdere prognose eller mer presist å bestemme tydeligere ved bruk av hjelpeterapi.
Autophagy refererer seg til en cellulær katabolsk prosess som gir cytoplasma-komponentene til lysosomer for påfølgende degradering eller resirkulerer lang -lived proteiner og organeller for å opprettholde intracellulær homeostase i cellen [8]. Det er tre prinsipielle autophagic veier, inkludert microautophagy, anstand-mediert autofagi (CMA), og macroautophagy [9]. Macroautophagy er den viktigste subtype av autophagy (heretter referert til som autofagi) [9]. Beclin 1, som først identifisert pattedyr autophagy effektor, er viktig for initiering av autophagy ved å forme Beclin 1-veksel kompleks, som består av BCL-2-familieproteiner, den klasse III fosfatidylinositol 3-kinase (VPS34), og ATG14L [10]. Det blir klart at Beclin en besitter en roman BCL-2 homologi region-3 (BH3) domene [11-13]. Bcl-2 familien proteiner kan binde seg til den BH3 domenet Beclin en og hemme Beclin 1-mediert autofagi av avsette Beclin en bort fra hVps34 [11-13]. Modulering av Beclin en eller BCL-2 ved fosforylering eller ubiquitinering kan dissosiere BCL-2-familiemedlemmer fra Beclin 1 og aktivere VPS34 kinase-aktivitet, som fører til en økning i autofagi [14]. Følgelig apoptose og autofagi kan være co-regulert i samme retning.
Nylig er autofagi feil rapportert å spille en avgjørende rolle i tumordannelse og tumorprogresjon [10,15-17]. Faktisk har en Beclin blitt rapportert å være mono-allelically redusert eller slettet i human ovarie, bryst og prostata-kreft [10]. Becn1
+/- svulster viste nedsatt autofagi, forhøyet stress i cellene og genom instabilitet som til slutt akselererer melke tumorigenesis [18]. Knockdown av
Beclin en
hos mus fører til hemming av autophagy og deretter en høy forekomst av spontane tumorer, inkludert lymfom, lever og lungekreft [19,20]. Videre er redusert ekspresjon av Beclin 1 funnet å være assosiert med den primære tumorvekst i NSCLC [21]. Disse dataene indikerer at
Beclin en
fungerer som en haploinsufficient tumor-suppressor protein gjennom sin regulering av autofagi. Ikke desto mindre, synes autophagy til som et cytobeskyttende prosess, og det ble foreslått som en alternativ mekanisme for legemiddelresistens gjennom å fremme tumorcelleoverlevelse under ugunstige betingelser. I lungekreft, flere studier viser at autophagy inhibering representerer en lovende tilnærming for å forbedre effektiviteten av behandlingen i pasienter med avansert ikke-småcellet lungekreft [22,23].
Heri, analyserte vi uttrykket av autophagic protein
Beclin en
i 216 NSCLC prøvene og analysert dens korrelasjon med clinicopathological faktorer av NSCLC pasienter. Våre resultater viste at
Beclin en
, som oppdaget av immunhistokjemi, var signifikant lavere hos NSCLC vev sammenlignet med de tilstøtende normalt vev, og negativt assosiert med tumor tilbakefall. Lav uttrykk for Beclin en spådd en mindreverdig OS og PFS i NSCLC. Videre multivariat analyse viste at
Beclin en
var en uavhengig prognostisk faktor for NSCLC.
Materialer og metoder
Pasienter og vevsprøver
Totalt 244 primær NSCLC prøver fra arkivene til Avdeling for patologi i kreft sentrum av Sun Yat-sen-universitetet (Guangzhou, Kina) ble inkludert i vår studie. Alle pasienter akseptert kurativ kirurgi fra 2001 til 2003. Vi ytterligere screenet pasienter ved hjelp av en streng kriteriene protokoll som følgende: mikroskopisk bekreftet NSCLC (inkludert plateepitelkarsinom, adenokarsinom og adenosquamous karsinom); uten fjernt metastatiske sykdommer; ingen tidligere kjemoterapi eller strålebehandling historie; har over 5 års oppfølgingsperioden; inkludert røykere (daglig sigarettforbruk × år med røyking = 0) og røykere (tidligere røykere og /eller nåværende røykere) [24]. Til syvende og sist, 28 pasienter med tap av oppfølgingen ble ikke inkludert i den foreliggende undersøkelse, som fører til 216 NSCLC kastes ytterligere klinisk og overlevelsesanalyse. Blant de totalt antall pasienter (n = 216), 116 (116/216, 53,7%) ble sensurert som døden i løpet av 5 års oppfølgingstid (4 tilfeller døde av postoperative komplikasjoner og 112 tilfeller døde av svulst progresjon).
av de 216 NSCLC pasienter (median alder, 47,0 år, range, 22-74 år), de med positive lymfeknutemetastase (n = 100) ble behandlet med fire til seks sykluser av cisplatin + Navelbine adjuvant kjemoterapi etter kirurgisk reseksjon, mens pasienter med negativ lymfeknutemetastase (n = 116) fikk ikke adjuvant kjemoterapi. Videre ble ingen adjuvant radioterapi administreres til hvilket som helst av de pasienter etter kirurgi. Kohort av 216 NSCLC pasienter ble deretter tilfeldig delt inn i treningssettet (n = 105) og testing sett (n = 111) av en datamaskin (SPSS 17,0 programvare). Kort, i treningssettet, er det 78 menn og 27 kvinner, med 38 saker for stadium I, 31 tilfeller for stadium II og 36 saker for stadium III. Samtidig er det 81 menn og 30 kvinner i testsettet, med 41 saker for stadium I, 28 saker for stadium II og 42 saker for stadium III. Den histologiske og scenetypen ble bestemt i henhold til klassifiseringen av NSCLC av WHO og International Union mot kreft Tumor-Node-metastaser (TNM) staging system [25]. Skriftlig informert samtykke til bruk av vev ble innhentet fra alle pasienter før operasjonen, og studien ble godkjent av Institute forskningsetiske komité for Sun Yat-Sen University.
Tissue microarray konstruksjon og immunhistokjemi flekker
To representative kjerne vevsbiopsier (0,6 mm i diameter) ble utstanset fra representert NSCLC vev og en sylinder med samme diameter fra tilgrensende normalt lungevev. Flere seksjoner (5 um tykke) ble kuttet fra TMA blokkene og montert på objektglass. En del fra TMA blokken ble farget med Hematoxylin og eosin (H E) for å bekrefte at de slag som finnes svulst
Immunhistokjemisk farging ble utført som beskrevet tidligere [26].. I korte trekk, etter deparaffinization, rehydratisering, antigen gjenfinning, og blokkering ble TMA glir inkubert over natten ved 4 ° C med et polyklonalt antistoff mot humant
Beclin en plakater (1: 200, Santa Cruz, SC-11427) i et fuktig kammer. Deretter ble objektglassene inkubert i tilsvarende sekundære antistoffer (HRP-anti-kanin;. Thermo Scientific, Cat No. 31460) ved romtemperatur i 30 minutter. Reaksjonsproduktene ble visualisert ved farging med 3, 3-diaminobenzidin (3, 3-diaminobenzidin, Dako, Cat No. K5007.). Etter kontra med hematoksylin, alle lysbildene var dehydrert og lagret. Negative kontroller ble oppnådd ved å erstatte
Beclin en
antistoff med tilsvarende ikke-immune serum immunglobulin. Våre tidligere veldefinerte immunostaining- positive magekreft lysbilder ble brukt som positiv kontroll [27].
Farging evaluering
Den fargeintensitet og omfanget av
Beclin en
ble gradert som tidligere beskrevet [27]. Kort fortalt ble det fargeintensitet gradert i negativ (0 poeng), som grenser (skår 1), svak (skår 2), moderat (skår 3) og sterk (skår 4). I tillegg ble det flekker grad også gradert i fem nivåer i henhold til prosentandelen av celler med forhøyet Beclin en farging, inkludert negative (0 poeng), 0-25% (skår 1), 26-50% (skår 2), 51 -75% (skår 3) og 76-100% (skår 4).
Beclin en
farging ble vurdert av to patologer som var uvitende om noen kliniske detaljer knyttet til pasientene. Vurderingen ble kongruente i 85% av tilfellene, noe som indikerer en meget reproduserbar scoring system. I avvikende tilfeller, ble en ny vurdering utført. Verdien ble valgt til begge patologer enige med resultatet.
Valg av en cutoff poeng for
Beclin en
uttrykk
Receiver Operating Characteristic (ROC) kurve analyse er vanligvis brukt i klinisk onkologi for å evaluere og sammenligne sensitiviteten og spesifisiteten til diagnostiske tester [28,29], eller identifisere den terskelverdi over hvilken et testresultat bør betraktes som positiv for noen utfall [28]. ROC-kurven analyse har vist seg å være reproduserbare til å evaluere IHC protein ekspresjon og for å velge biologisk eller klinisk relevant en cut-off stillingen for tumor positivitet [27,28,30]. Heri, brukte vi ROC kurve analyse for å velge cutoff punkt
Beclin en
for OS og PFS i treningssettet (n = 105). I korte trekk, poengsummen lokalisert nærmest punktet både maksimal sensitivitet og spesifisitet (0,0, 1,0) ble valgt som score på
Beclin en
cutoff, som fører til størst antall svulster som ble korrekt klassifisert med eller ikke å ha utfallet. ROC kurven analyse ble tilrettelagt av dichotomizing funksjonene i pasientenes utfall i overlevelse (død VS. andre (sensurert, levende eller død av andre årsaker)) og progresjon (lokal svikt eller fjernmetastaser).
Følg opp
Alle pasientene hadde oppfølgings poster for over 5 år. Etter fullførelse av behandlingen, ble pasientene observert ved 3 måneders intervaller i løpet av de første 3 år, og ved 6 måneders intervaller etterpå. Den siste oppfølging ble oppdatert i september 2011. OS ble definert som tiden fra tumorreseksjon til dato for død eller når sensurert senest dato dersom pasientene var fortsatt i live; PFS ble definert som tiden fra tumorreseksjon til datoen for sykdommen tilbakefall /progresjon eller dato for død eller når sensurert senest dato.
Statistisk analyse
ROC analyse ble brukt for å få en optimal cutoff punkt
Beclin en
uttrykk for overlevelse analyse i treningssettet (n = 105). For validering, forholdet mellom
Beclin en
ekspresjon og OS, ble PFS evaluert i testsettet (n = 111) og den samlede pasient kohort (n = 216). Forholdet mellom
Beclin 1
uttrykk og clinicopathological variabler ble analysert av khikvadrattest eller Fishers eksakte test. Kaplan-Meier analyse ble benyttet for å vurdere forholdet mellom
Beclin en
uttrykk og OS og PFS. Forskjeller i overlevelsessannsynlighet mellom pasient undergrupper ble vurdert av log-rank tester. Den multivariate Cox modellen ble brukt til å beregne hazard ratio og 95% konfidensintervall for pasientenes prognose. Alle
p
angitte verdiene var tosidig og
p
0,05 ble ansett som statistisk signifikant. Statistisk analyse ble utført ved hjelp av SPSS v. 17.0 (SPSS, Inc, Chicago, IL).
Resultater
Beclin en
uttrykk i NSCLC og normal tilstøtende vev
Immunohistochemistry ble ansatt for å undersøke protein uttrykk for
Beclin en
i primær NSCLC prøver og normal tilstøtende vev. Immunreaktiviteten av
Beclin en
ble observert i første rekke i cytoplasma (figur 1 og figur S1). Basert på kombinasjonen av intensiteten av fargingen og omfang, ble prøvene klassifisert i fire grupper, fra gruppe 1 med nesten negativ farging (+), gruppe 2 med svak farging (++), gruppe 3 med moderat farging (++ +), til gruppe 4 med den sterke farging (++++; figur 1A-C). Som vist i figur 1, er høy ekspresjon av
Beclin en
hovedsakelig finnes i normalt lungevev, manifesterer stort antall prøver med gruppe 3 (74 av 216, 34,3%, figur 1D) og gruppe 4 (93 fra 216, 43,1%, figur 1D), mens lunge tumorvev, uavhengig av tumor subtyper, viste moderat
Beclin en
farging (figur 1 A, B, D)
(AC), NSCLC vev arrays som inneholder vanlige lunge og tumorvev ble farget for
Beclin en
uttrykk. Farget normale og tumorvev ble inndelt i fire grupper (+ til ++++) i henhold til fargeintensitet og forlengelse av hvert vev. (D), prosentandel av normale eller tumorvev i hvert farging gruppe. Vevsprøver med forskjellig fargeintensitet og utvidelse ble gruppert og ordnet.
For ytterligere overlevelsesanalyse og unngå problemene med flere skjæringspunkt valg, ble ROC kurve analyse utføres for å bestemme en rimelig cutoff poeng av
Beclin en
i treningssettet (n = 105).
Beclin en
cutoff poeng for OS og PFS i treningssettet var 2,7 (
p
0,001, figur 2A) og 2,9 (
p
= 0,001, figur 2B), respektivt. En score på 2 ( 2 VS. ≤2) for
Beclin en
uttrykk ble valgt som uniform cutoff poeng å skille NSCLC pasienter som høyt eller lavt uttrykk for
Beclin en
.
(A) og (B) viste
Beclin 1
cutoff poeng for total overlevelse og progresjonsfri overlevelse i treningssettet. Ved hver immunhistokjemisk score, sensitivitet og spesifisitet for utfallet blir studert ble plottet, og dermed generere en ROC kurve. Cutoff punktet
Beclin en
for total overlevelse og progresjonsfri overlevelse var henholdsvis 2,7 og 2,9.
Beclin en
uttrykk og kliniske funksjoner
De kliniske funksjonene til pasienter, inkludert alder, kjønn, røyking historie, CEA nivå, innledende klinisk stadium, histologi, differensiering, tumor stadium, lymfeknutemetastase, tilbakefall, og
Beclin en
uttrykk, ble oppsummert i tabell 1.
Beclin en
cutoff score på 2 avledet fra treningssett med hell separert testing satt inn i to undergrupper. I korte trekk, pasienter med en score 0,001). Videre korrelasjonsanalyse viste at
Beclin en
uttrykket er negativt korrelert med tumor tilbakefall i begge settene (
p
0,001 i treningssettet og
p
= 0,001 i testsettet, tabell 1). I tillegg
Beclin en
uttrykk også negativt korrelert med den innledende tumorstadium (
p
0,001, Tabell 1). Lav uttrykk for
Beclin en
var assosiert med metastatisk spredning til lymfeknuter (
p
= 0,001, Tabell 1) i treningssettet, og korrelert med differensiering (
p
= 0,020, Tabell 1) og CEA nivå (
p
= 0,002, Tabell 1) i testsettet. Vi kunne ikke vise noen sammenheng mellom Beclin en uttrykk og andre pasientkarakteristika inkludert alder, kjønn, røyking historie osv
Variabel
Alle saker
Training Set (n = 105)
Testing Set (n = 111)
Høy Lav
P
Høy
Lave
P
Alder (år ) ≥ 60,010526212533 60.011130280.71325280.667GenderMale15943353447Female5713140.53116140.285Smoking historyYes12835272739No8821220.44223220.289CEA (ng /ml) 5.09722241536≤ 5.011934250.31835250.002Initial klinisk stagei7927112318II5920110.00012160.169III789271527HistologySquamous celle carcinoma451491012Adenocarcinoma16542400.41238450.839Adenosquamous carcinoma60024DifferentiationWell441271015Moderately7223150.19222120.020Poorly10021271834Tumor stageT
1 + T
216044314243T
3 + T
45612180.0838180.095Lymph node metastasisNegative11640192928Positive10016300.00121330.205RecurrencePositive11717332245Negative9939160.00028160.001Table 1. Association of
Beclin en
uttrykk med pasientens clinicopathologic egenskaper i NSCLC
CSV ned CSV
Beclin en
uttrykk og overlevelsesanalyse. Univariat overlevelse analyse
som vist i figur 3, Kaplan-Meier-analysen viste at lave ekspresjon av
Beclin en
sterkt spådd en mindreverdig OS og PFS i testsettet (
p
0,001 for både OS og PFS, 3A og 3B) og den generelle pasient kohort (
p
0,001 for både OS og PFS, figur 3C og 3D). I testsettet og den generelle pasient årsklasse, var median varighet av total overlevelse for pasienter med høyt og lavt uttrykk for
Beclin en
var 108 VS. 24,5 måneder (
p
0,001) og 108 VS.28 måneder (
p
0,001), henholdsvis. ble utført ytterligere analyser mellom
Beclin en
uttrykk og undergrupper av NSCLC pasienter innenfor hver klinisk stadium. Lav uttrykk for
Beclin en
også fungert som en dårlig prognostisk faktor i alle faser av NSCLC pasienter i testsettet: stadium I (
p
= 0,002 for OS og
p
= 0,030 for PFS, 4A og 4B), stadium II (
p
= 0,018 for OS og
p
= 0,049 for PFS, figur 4C og 4D), og fase III (
p
0,001 for OS og
p
= 0,003 for PFS, 4E og 4F). For den samlede pasientmateriale, resultatene var lik de som finnes i testsettet (figur 4G-L).
(A) Lav uttrykk for
Beclin en
var nært korrelert med dårlig generelle overlevelse og (B) progresjonsfri overlevelse i testsettet (n = 111). (C) Pasienter med lavere
Beclin en
uttrykk også fått en dårligere total overlevelse og (D) progresjonsfri overlevelse i den samlede pasientmateriale (n = 216). I testsettet og den generelle pasient årsklasse, var median varighet av total overlevelse for pasienter med høyt og lavt uttrykk for
Beclin en
var 108 VS. 24,5 måneder (
p
0,001) og 108 VS.28 måneder (
p
0,001), henholdsvis
(A) Sannsynlighet for generelle. overlevelse og (B) progresjonsfri overlevelse av NSCLC pasienter med stadium jeg i testsettet: lavt uttrykk, n = 18; høy uttrykk, n = 23. (C) Sannsynlighet for total overlevelse og (D) progresjonsfri overlevelse av NSCLC pasienter med stadium II i testsettet: lavt uttrykk, n = 16; høy uttrykk, n = 12. (E) Sannsynlighet for total overlevelse og (F) progresjonsfri overlevelse av NSCLC pasienter med stadium III i testsettet: lavt uttrykk, n = 27; høy uttrykk, n = 15. (G) Sannsynlighet for total overlevelse og (H) progresjonsfri overlevelse av NSCLC pasienter med stadium Ⅰin den samlede pasientmateriale: lav uttrykk, n = 29; høy uttrykk, n = 50. (I) Sannsynlighet for total overlevelse og (J) progresjonsfri overlevelse av NSCLC pasienter med stadium II i den samlede pasientmateriale: lav uttrykk, n = 27; høy uttrykk, n = 32. (K) Sannsynlighet for total overlevelse og (L) progresjonsfri overlevelse av NSCLC pasienter med stadium III i den samlede pasientmateriale: lav uttrykk, n = 54; høy uttrykk, n = 24.
multivariat Cox regresjonsanalyse
I den hensikt å unngå påvirkning forårsaket av univariat analyse, uttrykk for
Beclin en
som vel som andre parametre ble undersøkt i multivariat analyse Cox i testsettet og den samlede pasient kohort (tabell 2 og tabell 3). Som vist i tabell 2,
Beclin en
var en selvstendig biomarkør for å forutsi prognosen for OS (hazard ratio, 4,235; 95% CI, 2,382 til 7,528;
p
0,001, Tabell 2) og PFS (hazard ratio, 3.420, 95% KI, 1,936 til 6,042;
p
0,001, Tabell 2) i testsettet. Lignende observasjon ble også funnet i den generelle pasientmateriale (for OS, hazard ratio, 3,721; 95% CI, 2,453 til 5,645;
p
0,001, Tabell 3, for PFS, hazard ratio, 2,987; 95 % CI, 2,004 til 4,453;
p
0,001, Tabell 3). Videre CEA nivå, lymfeknutemetastase, røyking historie, og alder ble også identifisert som uavhengige prognostiske parametere for OS og /eller PFS i testsettet og /eller den samlede pasient kohort (tabell 2, tabell 3). Men innledende klinisk stadium, som en godt karakterisert uavhengig prognostisk faktor, ble ikke gjenkjent som uavhengig prognostisk faktor i våre resultater.
Variabel
For døden
For progresjonsfri overlevelse
Hazard ratio
95% konfidensintervall
P
Hazard ratio
95% konfidensintervall
P
Alder (år) ≥ 60.00 ( VS. 60,0) 1,266 (0,734 til 2,185) 0.3961.053 (0,613 til 1,808) 0.852Gender Mann (VS. Female) 3,289 (1,336 to8.096) 0.0103.449 (1,535 til 7,747) 0.003Smoking historikk Ja (VS. No) 4,643 (1,958 til 11,009) 0.0002.443 (1,158 til 5,152) 0.019CEA (ng /ml) 5 (VS. ≤ 5) 2,556 (1,516 til 4,309) 0.0002.133 (1,271 til 3,581) 0.004Initial klinisk stageI0.998 (0,277 til 3,603) 0.9981.063 (0,267 til 4,231) 0.931II0.785 (0,340 til 1,813) 0,5710 0,928 (0,387 til 2,228) 0.868III1111HistologySquamous celle carcinoma1.558 (0,443 til 5,478) 0.4901.195 (0,405 til 3,523) 0.747Adenocarcinoma1.474 (0,378 til 5,742) 0.5760.640 (0,179 til 2,293) 0.493Adenosquamous carcinoma1111DifferentiationWell0.886 (0,414 til 1,897) 0.7560.538 (0,258 til 1,121) 0.098Moderately1.159 (0,578 til 2,324) 0.6770.641 (0,315 til 1,303) 0.219Poorly1111Tumor scenen T
4 + T
3 (VS. T
2 + T
1) 1,091 (0,583 til 2,042) 0.7851.359 (0,715 til 2,585) 0.350Lymph metastaser Positiv (VS. Negativ) 2,448 (1,428 til 4,199) 0.0011.854 (1,098 til 3,130) 0,021
Beclin 1
Low (VS. Høy) 4,235 (2,382 til 7,528) 0.0003.420 (1,936 til 6,042) 0.000Table 2. Resultater av multivariat Cox proporsjonal-farer analyse i testsettet (n = 111).
CSV Last ned CSV Variabel
For døden
For progresjonsfri overlevelse
Hazard Ratio
95% konfidensintervall
P
Hazard Ratio
95 % konfidensintervall
P
Alder (år) ≥ 60,00 (VS. 60.0) 1,375 (0,951 til 1,988) 0.0911.039 (0,708 til 1,524) 0.846Gender Mann (VS. Female) 1,422 (0,794 til 2,546) 0.2361.285 (0,744 til 2,219) 0.369Smoking historikk Ja (VS. Nei) 1,493 (1,021 til 2,184) 0.0391.105 (0,637 til 1,917) 0.723CEA (ng /ml) 5 (VS. ≤ 5) 2,186 (1,484 til 3,220) 0.0002.043 (1,395 til 2,992) 0.000Initial klinisk stageI0.758 (0,286 til 2,012) 0.5780.969 (0,354 til 2,652) 0.951II0.853 (0,467 til 1,558) 0,6050 0,928 (0,494 til 1,742) 0.816III1111HistologySquamous celle carcinoma1.239 (0,379 til 4,047) 0.7230.987 (0,354 til 2,746) 0.979Adenocarcinoma1.070 (0,305 til 3,763) 0.9160.632 (0,199 til 1,950) 0.417Adenosquamous carcinoma1111DifferentiationWell0.765 (0,434 til 1,347) 0.3530.640 (0,369 til 1,110) 0.112Moderately0.959 (0,619 til 1,485) 0.8500.931 (0,606 til 1,430) 0.745Poorly1111Tumor scenen T
4 + T
3 (VS. T
2 + T
1) 1,122 (0,701 til 1,794) 0.6311.195 (0,678 til 1,814) 0.477Lymph metastaser Positiv (VS. Negativ) 2,576 (1,725 til 3,847) 0.0001.862 (1,262 til 2,746) 0,002
Beclin 1
Low (VS. Høy) 3,721 (2,453 til 5,645) 0.0002.987 (2,004 til 4,453) 0.000Table 3. Resultater av multivariat Cox proporsjonal-farer analyse i den generelle pasientmateriale (n = 216).
CSV Last ned CSV
Diskusjoner
Autophagy, som er sterkt konservert fra gjær til menneske, er et viktig katabolismen for degradering av cellulære komponenter i lysosome [8]. Forskjellig fra ubiquitin-Proteasome system (UPS), som direkte degraderer en rekke regulatoriske proteiner i cytoplasma eller kjernen, er rettet mot autophagy et vidt spektrum av materialer inkludert proteinaggregater, langlivede proteiner eller skadede organeller mot lysosomer for etterfølgende nedbrytning. Autophagy innebærer i en serie av normale og patologiske prosesser. Nylig, autophagy dukket opp som et viktig regulator av flere aspekter av kreft biologi, inkludert initiering og progresjon av kreft, så vel som innflytelse på effekten av terapeutiske inngrep på denne sykdommen [31,32]. Autofagi kan vise en anticarcinogenic funksjon i primærceller ved å sikre mot metabolsk stress gjennom homeostatic omsetning av mitokondrier og eliminering av proteinaggregater.
Beclin en
, som en viktig regulator av autofagi, får mye oppmerksomhet de siste årene på grunn av sitt engasjement i kreftutvikling og kreft progresjon. Kliniske studier har knyttet dårlig prognose og aggressive kreft fenotyper med avvikende uttrykk for
Beclin en
i tumorvev [27,33-36]. Videre Beclin en avhengig autophagic funksjon har vist seg å bli undertrykt i human kreft gjennom aktivering AKT [37].
Nylig, redusert uttrykk for
Beclin 1 Hotell og
LC3
ble påvist i humane lungekreft vev, noe som indikerer en mulig rolle i patogenesen av lungekreft. Men ingen av de ovennevnte studiene adressert prognostisk rolle Beclin 1 i lungekreft så langt [38]. I tillegg, en annen studie viste at
Beclin en
uttrykk ble omvendt assosiert med tumorstørrelse og primærtumorstadium (PT) i lungen plateepitelkarsinom og adenokarsinom, men viser ingen sammenheng med total overlevelse [39]. Her, for å unngå problemene med flere skjæringspunkt utvalg og få en objektiv
Beclin en
cutoff poeng for klinisk implikasjon, brukte vi ROC kurve analyse som en alternativ metode i valg og validering av cut-off score for å bestemme mest klinisk relevante terskelen for immunhistokjemisk svulst positivitet. Vi analyserte clinicopathological /prognostisk betydning av
Beclin en
i et totalt antall på 216 NSCLC, som består av kullet I (n = 105) for treningssettet og kohort II (n = 111) for testing set. ROC-avledet grenseverdi den ble utsatt for analyse av foreningen av
Beclin en
med pasientenes kliniske karakteristika og utfallet i en testsettet (n = 111) og den generelle pasient kohort (n = 216).
Derfor
Beclin en
uttrykk, ble i hovedsak funnet å være lav hos pasienter med tilbakefall av sykdom (tabell 1), noe som indikerer at
Beclin en
kan være involvert i NSCLC progresjon . Videre Kaplan-Meier overlevelsesanalyse viste at lav uttrykk for
Beclin en
spådd en betydelig OS og PFS ulempe over høy uttrykk for
Beclin en
undergruppe i testsettet og den generelle pasient kohort ( figur 3). I tillegg holdt seg lav Beclin en uttrykks en dårlig prognostisk faktor i alle faser av NSCLC (figur 4), fremstår som en uavhengig prognostisk faktor for NSCLC (Tabell 2, Tabell 3). Men innledende klinisk stadium ble ikke gjenkjent som uavhengig prognostisk faktor i våre resultater. Allikevel, det er en trend for bedre total overlevelse i de lavere kliniske stadier, som står for små saker, og er ikke statistisk signifikant.
Med tanke på prognostiske effekten av
Beclin en
protein i forskjellige menneske kreft, har rapporter trukket kompliserte konklusjoner. Tidligere har en rekke studier dokumentert at
Beclin en
uttrykk er nedregulert i brystkreft, leverkreft, livmorhals og eggstokkreft, assosiere med en dårlig prognose [33,34,36].
