Abstract
RAD52
er en viktig, men ikke godt karakterisert homolog rekombinasjon reparasjon genet som kan binde seg til enkelt-trådede DNA-ender og mediere DNA-DNA interaksjon nødvendig for gløding av komplementære DNA-trådene. For å vurdere rollen til
RAD52
varianter i responsen av kreftceller til platina agenter, undersøkte vi deres foreninger med platina motstand og prognose i livmorhalskreftpasienter. Vi har registrert 154 pasienter med livmorhals plateepitelkarsinom, som hadde radikal kirurgi mellom 2008 og 2009, og genotypet tre potensielt funksjonelle
RAD52
varianter av Snapshot analysen. Vi testet
in vitro
platina motstand og RAD52 uttrykk ved hjelp av MTT og immunhistokjemi metoder, henholdsvis. I 144 tilfeller som hadde genotyping data, fant vi at både rs1051669 variant og RAD52 protein uttrykk var signifikant assosiert med carboplatin resistens (
P
= 0,024 og 0,028, henholdsvis) og rs10774474 med nedaplatin resistens (
P
= 0,018). Den rs1051669 varianten ble signifikant assosiert med RAD52 protein uttrykk (justert OR = 4,7, 95% KI = 1,4 til 16,1,
P
= 0,013). Når disse tre
RAD52
varianter ble kombinert, progresjonsfri overlevelse var lavere hos pasienter som gjennomførte minst én (≥1) variant allelet sammenlignet med dem uten at noen av variant alleler (
P
= 0,047). Derfor både
RAD52
varianter og protein uttrykk kan forutsi platina motstand, og
RAD52
varianter syntes å forutsi prognose i livmorhalskreftpasienter. Store studier er garantert å validere disse funnene
Citation. Shi T-Y, Yang G, Tu X-Y, Yang J-M, Qian J, Wu X-H, et al. (2012)
RAD52
Varianter Tippe Platinum Resistance og prognose av livmorhalskreft. PLoS ONE 7 (11): e50461. doi: 10,1371 /journal.pone.0050461
Redaktør: Shannon M. Hawkins, Baylor College of Medicine, USA
mottatt: 16 juli 2012; Godkjent: 22 oktober 2012; Publisert: 29.11.2012
Copyright: © 2012 Shi et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av Science Foundation for unge forskere på Fudan University. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
livmorhals~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP er den tredje vanligste diagnosen kreft og den fjerde ledende årsak til kreft dødsfall hos kvinner, og står for 9% (529 800) av alle nye krefttilfeller og 8% (275 100) av alle kreftdødsfall blant kvinner i 2008 i verden [1]. Mer enn 85% av disse tilfellene og dødsfallene skjer i utviklingslandene, inkludert Kina [1]. Samtidig chemoradiation terapi er standardbehandling brukes oftest for pasienter med livmorhals plateepitelkarsinom (CSCC) som lokalt har avansert [2], [3] og tilbakevendende og /eller metastatisk [4] sykdommer. Imidlertid er primær eller ervervet chemoresistance et alvorlig klinisk problem som bidrar til tilbakefall av sykdommen, progresjon og sykdomsspesifikk dødelighet [5] – [7]. Mekanismen underliggende heterogen reaksjon av pasientene er multifaktoriell og kan inkludere flere genetiske faktorer. Noen av disse genetiske faktorer kan sikkert og prospektivt bli vurdert for deres rolle i å avgjøre respons på cytostatika.
DNA reparasjon er hovedsakelig ansvarlig for å reparere og /eller fjerne platina-DNA addukter. Dette DNA-reparasjon innebærer koordinering av aktiviteter av mer enn 20 enzymer som fjerner og gjenopprette et segment av DNA som inneholder en klumpete addukt [8]. Homolog rekombinasjon reparasjon (HRR) er et stort DNA-reparasjonsmekanismen for å reparere double-strand pauser (DSB) i løpet av S og G2-fasene [9], som er en cellulær forsvarsmekanisme mot cytotoksiske virkninger av platinabaserte kjemoterapeutiske midler [10] – [1. 3].
RAD52
, som en relativt mindre godt karakterisert HRR genet, spenner over 37,6 kb på kromosom 12p12.2-13 og koder for et protein med 417 aminosyrer, som kan binde seg til én DNA ender og videreformidle DNA-DNA interaksjon nødvendig for gløding av komplementære DNA-tråder [14]. Nylig, Tassone et al. rapportert at en overekspresjon av
RAD52
mRNA i BRCA1-defekt HCC1937 celler var assosiert med høy følsomhet for platina-avledet forbindelser [15]. Derfor hypoteser vi at
RAD52
kan være involvert i platina motstand i kreftceller.
enkeltnukleotidpolymorfi (SNPs) i gener involvert i DNA-reparasjon kan påvirke proteinbindingsseter eller tilhørighet eller føre til endringer i proteinstrukturen og således kan modifisere genfunksjoner og gjengi kreftceller mer følsomme overfor platina behandling [16], [17]. Til dags dato har noen rapportert studier undersøkte sammenslutninger av
RAD52
SNPs med risikoen for malignitet [18], [19], og ingen har vurdert dette med chemoresistance. I denne studien, vurderte vi sammenslutning av tre potensielt funksjonell
RAD52
SNPs med
in vitro
platina motstand og prognose hos pasienter med CSCC.
Materialer og metoder
Etikk erklæringen
Dette prosjektet ble godkjent av Institutional Review Board of Fudan University i Shanghai Cancer Center (FUSCC). En skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle rekruttert personer, og hver klinisk undersøkelse ble gjennomført i henhold til de prinsipper som er nedfelt i Helsinkideklarasjonen samtykke.
Pasienter
I denne studien rekrutterte vi 154 CSCC pasienter som hadde radikal hysterektomi og bekkenglandeltoalett mellom mars 2008 og mars 2009 ved Fudan University i Shanghai Cancer Center (FUSCC). Alle saker ble histologisk bekreftet å være plateepitelkarsinom av to gynekologiske patologer (XYT og GY). Den detaljerte kliniske opplysninger ble hentet fra pasientenes elektronisk database på FUSCC og inkludert alder, tumorstadium (FIGO, International Federation of gynekologi og fødselshjelp, 2009), tumorstørrelse (dvs. den største svulst diameter rapportert av patologen etter kirurgisk reseksjon) , bekken lymfeknute (LN) metastaser, Lympho-vaskulære rommet invasjon (Wire) og dybden av livmorhals stroma invasjon. Pasientene ble fulgt hver tredje måned for de to første årene, hvert halvår for de neste to årene, og hvert år for de neste årene etterpå. Analysen av alle blod og vevsprøver ble utført på en blindet måte med hensyn til pasientenes chemoresistance og overlevelse status.
SNP Utvalg
SNPs ble valgt ut fra NCBI dbSNP database (http : //www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP), International HapMap Prosjektarkiv (https://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/) og SNP funksjon prediksjon (FuncPred) programvare (http : //snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) basert på fire kriterier: 1) ligger på de to endene av
RAD52
genet [dvs. 5′-flankeangrep, 5′-uoversatt region (UTR), 3′-UTR, 3′-flankerende], 2) hadde en mindre allel frekvens på minst 5% i kinesiske populasjoner, 3) i lav koblingsulikevekt ved hjelp av et
r
2 terskel på 0,8 til hverandre, og 4) målt som potensielt funksjonelle SNP’er på mikroRNA (miRNA) bindingsseter eller transkripsjonsfaktorbindingsseter. Som et resultat av tre
RAD52
SNP ble valgt, og de er rs1051669G A (3′-UTR), rs10774474A T (5′-flankerende) og rs11571378T . A (5′-flankerende)
DNA Extraction og Genotyping
Genomisk DNA ble innhentet fra fullblodprøver med en QuickGene DNA Whole Blood Kit (Fujifilm Co., Tokyo, Japan) i henhold til produsentens instruksjoner. DNA renhet og konsentrasjon ble bestemt ved spektrofotometrisk måling av absorbans ved 260 og 280 nm ved Synergy ™ 4 Multi-Mode mikroplateleser (BioTek, Winooski, VT).
De valgte SNPs ble genotypet ved hjelp av multiplex Snapshot analysen. De primere for PCR forsterkning og snapshot forlengelse ble designet for å ha en glødetemperatur rundt 60 ° C ved hjelp Primer5 programvare. For å teste for eventuelle repeterende sekvenser, ble primere linje med genbanken databasen ved hjelp av BLAST nettbasert verktøy. AutoDimer programvare ble brukt i påvisning av potensielle hårnålstrukturer og mulige primer-dimer kombinasjoner. Alle primere ble syntetisert ved Sangon Biotech Co., Ltd (Shanghai, Kina). Etter forsterkning og rensing, PCR produktene ble blandet og brukt som mal i øyeblikksbildet forlengelse reaksjon. Deretter elektroforese ble utført på ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA) for å sjekke kvaliteten på PCR-produkter. De genotyping data ble endelig analysert av Peak skannerprogramvare versjon 1.0 (Applied Biosystems). Ti prosent av prøvene ble tilfeldig utvalgt til å bli sekvensert. Som et resultat av den midlere genotyping hastigheten var 93,5% ved hjelp av multipleks øyeblikksbilde analysen. Avviket satsen på alle positive kontroller (dvs. dupliseres prøvene, overlappende prøver fra tidligere studier og prøver tilfeldig valgt å bli sekvensert) var mindre enn 0,1%.
Den MTT analysen [20]
i utfører MTT analysen, vurderte vi tidligere rapportert maksimal plasmakonsentrasjon (PPCs) for de fire utvalgte platina midler: cisplatin 10 mikrogram /ml (Qilu Pharmaceutical Co., Kina, klinisk dosering 100 mg /m
2) [21] , carboplatin 20 mikrogram /ml (Qilu Pharmaceutical Co., Kina, klinisk dosering 450 mg /m
2) [22], nedaplatin 10 mikrogram /ml (Nanjing Dongjie Pharmaceutical Co., Kina, klinisk dosering 100 mg /m
2) [23] og oksaliplatin 12 mikrogram /ml (Nanjing Pharmaceutical Factory Co., Kina, klinisk dosering 130 mg /m
2) [24]. I selve analysen, anvendte vi 10 x PPC som den endelige arbeidskonsentrasjonen for hver av disse platinaderivater som anbefalt tidligere [25], [26].
Histopathologically bekreftet friske tumor-vev oppnådd ved kirurgi ble skåret i stykker av mindre enn 5 x 5 mm og suspenderes i RPMI 1640-medium (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) som følger med 15% føtalt bovint serum (Gibco, Langley, OK) ved romtemperatur. Suspendert kreftceller ble helt over en 150 mikrometer sterile stålnett plassert i fatet. Percoll diskontinuerlig gradient sentrifugering med 400 g ble anvendt for å separere og rense kreftceller som anbefalt tidligere [20]. Kreftceller ble identifisert ved hjelp av H E farget morfologisk undersøkelse og deretter resuspendert ved en konsentrasjon på 1 x 10
5 levedyktige celler /ml og dyrket i 96-brønners mikroplater ved 37 ° C i en 5% CO
2 inkubator. På dag to, 90 pl RPMI 1640 medium som følger med 15% føtalt bovint serum og 10 pl av oppløsningene med 100 x PPC for hver av de valgte stoffer ble blandet i 48 timer. For hver pasient, 100 mL av kreftcellesuspensjon uten platinaderivater ble dyrket som negative analyse kontroller. På dag fire, 20 ul MTT (5 mg /ml, Shanghai Lanji Co., Kina) ble tilsatt til hver brønn ved 37 ° C i 4 timer, og deretter ble 100 ul oppløsning buffer (10% SDS, 5% isobutanol og 0,012 mol /L HCl) ble tilsatt i hver brønn over natten for å oppløse formazankrystaller. Optiske tettheter (OD
570 nm) ble målt ved mikroplateleser (BIO-RAD550, Hercules, CA). Inhiberingshastigheten ble oppnådd ved å bruke formelen (1-OD
platina /OD
kontroll) x 100%.
Tissue microarray, Immunohistochemistry (IHC) analyse og vurdering av immun Farging
de partier av tumor /normalt vev som skal brukes for vevet microarray ble valgt ut fra et representativt tumor /normale område i det tilsvarende H 2+). For kjerner som var uninterpretable grunn av vev tap eller mangel på celler, en score på ikke aktuelt (N /A) ble gitt.
statistiske metoder
Fordi platina-hemming prisene ikke følge normalfordelinger, vi utførte nonparametric
Wilcoxon
test og
Kruskal-Wallis
test for å sammenligne platina-hemming priser for hvert middel både mellom aktørene og blant ulike grupper. Pearsons χ
2-test og logistisk regresjonsanalyse ble også brukt til å vurdere sammenhengen mellom
RAD52
genotyper og protein uttrykk. For overlevelsesanalyse, ble progresjonsfri overlevelse (PFS) og total overlevelse (OS) ganger beregnet fra datoen for første operasjonen til datoen for tilbakefall av sykdommen og død, henholdsvis. Pasienter uten progresjon, tapt for oppfølging eller døde av andre årsaker ble sensurert på sitt siste datoen for posten.
Kaplan-Meier
overlevelse estimat og log-rank test ble beregnet til å vurdere PFS og OS. Vi utførte Cox regresjonsanalyse for å evaluere effektene av
RAD52
genotyper på den kumulative sannsynligheten for å overleve i CSCC pasienter. Hver rapporterte
P
verdi var tosidig, og
P
0,05 ble brukt til å utlede statistisk signifikans. Alle analyser ble utført ved hjelp av SAS programvare (versjon 9.1, SAS Institute, Cary, NC).
Resultater
pasientkarakteristika og in vitro Platinum-hemming priser ved MTT analysen
Genotyping var mislykket i 10 tilfeller etter gjentatte analyser. Derfor er den endelige analysen inkluderte 144 CSCC pasienter, hvis kliniske og patologiske egenskaper er oppsummert i tabell 1. Pasientenes gjennomsnittsalder ved diagnose var 46,5 år (område, 20-70 år). FIGO stadium fordelingen var 68 (47,6%) stadium IB, 67 (46,9%) stadium IIA og åtte (5,6%) stadium IIB. Pasienter med en tumorstørrelse som er større enn 4 cm utgjorde 43,8% (63/144) av tilfellene. Førti ni (34,0%) og 50 (34,7%) av pasientene hadde positive bekken LN metastaser og positiv Lvsi hhv. Det var 109 (75,7%) tilfeller med kreft celler invadert mer enn 1/2 stroma lag av livmorhalsen. Median oppfølgingstid på 37,6 måneder (range, 32.1-41.6 måneder), og det var 20 (13,9%) tilbakefall og 10 (6,9%) døde i løpet av oppfølgingsperioden.
median
in vitro
hemming av kreft cellevekst av cisplatin, karboplatin, oksaliplatin nedaplatin og var 80,8%, 34,3%, 76,4% og 52,0%, henholdsvis (figur 1). Ved hjelp av
Kruskal-Wallis
test, fant vi at de fire platinaderivater viste en signifikant forskjell i å hemme kreftceller (
Kruskal-Wallis
test,
P
0,001; figur 1). Cisplatin og nedaplatin begge hadde en større effekt på å hemme kreftceller enn carboplatin gjorde (
Kruskal-Wallis
test,
P
0,001; figur 1). I tillegg ble det ikke observert noen signifikant forskjell i hemming priser mellom cisplatin og nedaplatin grupper (
Wilcoxon
test,
P
= 0,269; figur 1). For hver platina agent, vi sammenlignet sine hemming priser i ulike grupper i henhold til ulike kliniske og patologiske egenskaper, men ingen signifikant forskjell ble funnet (data ikke vist).
Median
in vitro
hemming frekvensen av kreft cellevekst av cisplatin, karboplatin, nedaplatin og oksaliplatin var 80,8%, 34,3%, 76,4% og 52,0%, henholdsvis, og er merket med «-«. Fire grupper viste en signifikant forskjell i å hemme kreftceller (
Kruskal-Wallis
test,
P
0,001). Det ble ikke observert noen signifikant forskjell i hemming priser mellom cisplatin og nedaplatin grupper (
Wilcoxon
test,
P
= 0,269).
Sammenhengen mellom RAD52 SNPs og in vitro Platinum-hemming priser
Alle de observerte genotypen fordelinger blant pasientene avtalt med Hardy-Weinberg likevekt (HWE,
P
= 0,533 og 0,115 for rs1051669 og rs10774474, henholdsvis), med unntak av rs11571378 (
P
= 0,0004). Totalt sett er rs1051669A og rs10774474T variant alleler var signifikant assosiert med platina motstand. Kreftceller med rs1051669AA og rs10774474TT variant homozygote hadde lavere respons på carboplatin og nedaplatin henholdsvis (
Kruskal-Wallis
test,
P
= 0,024 og 0,018, henholdsvis; Tabell 2). Nærmere bestemt ved å anta en recessiv genetisk modell, fant vi at pasienter som bar rs10774474 TT genotype hadde en betydelig økt motstand mot nedaplatin, sammenlignet med dem som utførte AA /AT genotyper (
Wilcoxon
test,
P
= 0,027). De rs1051669 AA genotype operatører syntes å ha økt karboplatin motstand mot GG /AG genotype seg, men dette var ikke statistisk signifikant (
Wilcoxon
test,
P
= 0,074). Det var ingen signifikant sammenheng mellom
in vitro
hemming priser og rs11571378 SNP.
Association mellom Clinicopathological Kjennetegn, RAD52 SNPs og Survival
Etter å ha justert for pasienter «alder, FIGO stadium, tumor størrelse, bekken LN metastaser, Wire og dybden av stromal invasjon, vi fant ikke en uavhengig sammenslutning av en enkelt variant, alene, med pasientenes overlevelse (data ikke vist). Men når disse tre utvalgte RAD52 SNPs ble kombinert, pasienter med minst én (≥1) variant allelet (dvs. rs10774474T, rs11571378A og rs1051669A) hadde dårligere PFS og OS sammenlignet med de uten at noen av variant alleler (log-rank test
P
= 0,047 og 0,162, henholdsvis. Figur 2A og 2B)
pasientene med minst én (≥1) variant allelet (dvs. rs10774474T, rs11571378A og rs1051669A) hadde dårligere progresjonsfri overlevelse og total overlevelse sammenlignet med de uten at noen av variant alleler (log-rank test,
P
= 0,047 og 0,162, henholdsvis). RAD52 (C) negativt og (D) positive uttrykk med lav cytoplasmatiske bakgrunn ble oppdaget av antistoff sc-8350 (400 ×).
RAD52 SNPs Associated med RAD52 Protein Expression
Å ytterligere evaluere biologisk plausibilitet underliggende observerte foreningen, utførte vi IHC analyse av målet vev og fant at RAD52 ble lokalisert til kjernen (figur 2C og 2D). De gjennomsnittlige score til RAD52 protein uttrykk nivåer var 1,6 ± 1,8 og 4,2 ± 1,8 for livmorhalskreft og normalt vev, henholdsvis. Av de 144 sakene som ble analysert, 109 (75,7%) var RAD52 negativ, 30 (20,8%) var RAD52 positive og fem (3,5%) var RAD52 N /A. Den positive uttrykk rate ( 2+) av RAD52 protein i livmorhalskreft vev var 22% (30/139) sammenlignet med 88% i normalt vev (15/17) (χ
2-test,
P
0,001). Genotypen distribusjoner av rs1051669G A, rs10774474A T og rs11571378T En SNPs i RAD52-negative og positive pasienter er vist i tabell 3. I de dominerende genetiske modellene, de rs1051669 variant AG /AA bærere viste en betydelig redusert uttrykk nivå av RAD52 protein i CSCC pasienter, sammenlignet med variant GG genotype operatører [logistisk regresjonsanalyse, justert odds ratio (OR) = 4,7, 95% konfidensintervall (KI) = 1,4 til 16,1,
P
= 0,013; Tabell 3]. I tillegg ble RAD52-negativ rente signifikant assosiert med dårlig respons av livmorhalskreftceller til karboplatin (
Wilcoxon
test,
P
= 0,028; tabell 2). Men vi fant ikke noen signifikant korrelasjon mellom RAD52 protein uttrykk og pasientenes overlevelse (data ikke vist).
Diskusjoner
Resistance til platina-basert kjemoterapi er et challege i klinisk praksis [5] – [7]. I denne studien, for å evaluere platina motstand, utførte vi MTT analysen som ble mye brukt til kjemisk sensitivitet test, og den samlede nøyaktigheten var ca 81,3% for å forutsi klinisk effekt i gynekologisk kreft [28]. Vi har funnet at inhiberingen frekvensen av nedaplatin og cisplatin til livmorhalskreft celler er mye høyere enn for karboplatin og oksaliplatin, uavhengig av kliniske og patologiske variabler. Dette funnet er i samsvar med gjeldende NCCN veiledende anbefalinger som cisplatin være førstevalget for kjemoterapi av livmorhalskreft. Våre funn angå nedaplatin er også i overensstemmelse med publiserte kliniske data. Økende data har antydet at nedaplatin er like effektiv som cisplatin med mindre fordøyelses og nyretoksisitet og kan være et lovende alternativ valg for livmorhalskreftpasienter [29]. Imidlertid er større randomiserte kliniske studier er nødvendig for å validere disse funnene.
Det er vel kjent at DNA-reparasjon spiller en viktig rolle i platina motstand og hvilken som helst forstyrrelse i DNA-reparasjon, kan føre til en endret følsomhet for behandling [30 ], [31]. DSB sin, den mest dødelige formen for DNA-skade indusert av ioniserende stråling og platinaderivater, blir reparert av to store reparasjons trasé-HRR og ikke-homologe end-sammenføyning [32]. Det har blitt foreslått at en forhøyet frekvens av DSB og kromosomale aberrasjoner er observert 16-24 timer etter eksponering cisplatin, [33] og suppresjon av relaterte proteiner som er involvert i reaksjonsveien HRR kan være ansvarlig for resistens overfor cisplatin [34]. I
Saccharomyces cerevisiae
, gjær
RAD52
spiller en nøkkelrolle i replikering-forbundet HRR [35]. Gjær og pattedyr RAD52 RAD52 viser tilsvarende aminosyresekvens og biokjemiske aktiviteter, noe som antyder dets funksjon konservert [36]. Tidligere data har vist at pattedyr RAD52 kunne svare på DNA DSB sin og replikering drøye uavhengig av BRCA2, som fungerer som en uavhengig og alternativ HRR sti [37]. For eksempel, fravær av RAD52 protein resulterte i omfattende kromosomforstyrrelser, spesielt kromatid type avvikene [37], og platinaderivater kan binde seg direkte til DNA, som fører til forskjellige typer av DNA-lesjoner [38]. I tillegg er nedregulering av
RAD52
mRNA var assosiert med dårlig respons av celler til platina-avledet forbindelser i BRCA1-defekt HCC1937 celler [15]. Konsekvent, i denne studien, fant vi at RAD52-negative protein uttrykk status var assosiert med dårlig respons av livmorhalskreftceller til karboplatin. Derfor
RAD52
kan være involvert i dannelsen av platina motstand. Imidlertid er flere studier for å utforske mekanismene bak de observerte lav RAD52 uttrykk nivåer som vil være medvirkende til livmorhalskreft kjemoterapi.
Så langt vi kjenner til, er dette den første studien som fokuserte på den prediktive verdien av
RAD52
for variasjoner i platina motstand og prognose i CSCC. Interessant, observerte vi at rs11571378 genotype fordeling blant pasientene fravikes HWE men ikke spå noen av kliniske resultater. I motsetning til dette ble de andre to SNP (dvs. rs1051669 og rs10774474), hvis genotype fordelinger blant pasientene fulgt HWE, uavhengig av hverandre forbundet med
in vitro
inhiberingsgraden av karboplatin og nedaplatin i CSCC celler, henholdsvis, noe som indikerer en viktig rolle
RAD52
varianter i platina motstand. Egentlig er disse to SNPs begge spådd som potensielt funksjonell. For eksempel er det rs1051669 SNP som ligger i 3′-UTR av
RAD52
og kan være i en miRNA bindingssete forstyrre miRNA-mRNA interaksjon og påvirker ekspresjonen av gener miRNA målrettede [39]. Likeledes er det rs10774474 SNP lokalisert i oppstrøms av
RAD52
, som kan være en transkripsjonsfaktor bindingssete for å delta i gennettverk, slik som DNA-reparasjonsbaner [40]. Videre ble RAD52 protein uttrykk nivåer forbundet med hemming priser av carboplatin, observerte et lignende resultat for
RAD52
-rs1051669 SNP. Interessant, analyser vår genotype-fenotype korrelasjon også vist at rs1051669 SNP var signifikant assosiert med RAD52 protein ekspresjonsnivåer. Derfor synes det biologisk plausibel at
RAD52
-rs1051669 SNP kan være funksjonelle ved å regulere RAD52 uttrykk og dermed bidra til platina motstand i livmorhalskreftpasienter.
Kaplan-Meier
estimert overlevelse viste videre at pasienter som gjennomførte minst én (≥1) variant allel av tre
RAD52
SNPs hadde en betydelig dårligere PFS enn de som ikke bærer noen av variant lene, noe som indikerer effekten av
RAD52
SNPs på prognosen for CSCC pasienter. Fordi disse variant genotyper kan forutsi protein uttrykk, hypotese vi at RAD52 protein uttrykk nivåer kan forutsi overlevelse i livmorhalskreft. Men i denne studien, hadde vi ikke observere noen sammenhenger mellom enkelt SNPs eller RAD52 protein uttrykk nivåer og overlevelse, som kan være på grunn av den relativt korte oppfølgingstiden med begrensede arrangementer av tilbakefall og dødsfall. Men noen publiserte data på andre kreftformer støtter vår hypotese, selv om ingen studier på livmorhalskreft har blitt publisert hittil. Nylig Jewell et al. rapporterte at overekspresjon av
RAD52
mRNA kunne forutsi fattige PFS med en hasardratio på 4,49 i melanom og at kreftceller med oppregulert gener av DNA-reparasjon trasé var sannsynlig å være mer aggressive [41].
i sammendraget,
RAD52
SNPs, enten individuelt eller kollektivt, kan modifisere gen-funksjon og endre RAD52 protein uttrykk nivåer, og dermed gjengi kreftcelle motstandsdyktig mot platinaderivater. Større prospektive studier med lengre oppfølgingstid er nødvendig for å validere våre funn.
Takk
Vi vil gjerne takke Yunhua Ling, Guangqi Qin og Hongyu Gu av Fudan University i Shanghai Cancer Center for å utføre
in vitro
MTT analysen, vev microarray og immunhistokjemi teknikker, henholdsvis, og takke Prof. Shaokang Zhan av Fudan University School of Public Health for statistisk analyse støtte. Vi takker også professor Mario Leitao fra Memorial Sloan-Kettering Cancer Center for å evaluere dette papiret.
