Abstract
Bakgrunn
For å undersøke den prediktive betydning av
KRAS
,
BRAF, PIK3CA
mutasjonsstatus,
AREG- EREG
mRNA uttrykk, PTEN protein uttrykk og hudutslett i metastatisk kolorektal kreft (mCRC) pasienter behandlet med cetuximab inneholder berging kjemoterapi.
Metoder
Primære svulster fra 112 mCRC pasienter ble analysert. Det verste hud toksisitet under behandling ble registrert.
Resultater
KRAS
,
BRAF Hotell og
PIK3CA
mutasjoner var til stede i 37 (33%), 8 (7,2%) og 11 (9,8%) tilfeller, henholdsvis PTEN gikk tapt i 21 (19,8%) tilfeller,
AREG Hotell og
EREG
ble overuttrykt i 48 (45%) og 51 (49%) tilfeller. I hele studiepopulasjonen, tid til tumorprogresjon (TTP) og total overlevelse (OS) var signifikant lavere hos pasienter med
KRAS product: (
p
= 0,001 og
p
= 0,026, henholdsvis) eller
BRAF product: (
p
= 0,001 og
p
0,0001, henholdsvis) mutante svulster, nedregulering av
AREG product: (
p
= 0,018 og
p
= 0,013, henholdsvis) eller
EREG product: (
p
= 0,002 og
p
= 0,004 henholdsvis) og klasse 0-1 hudutslett (
p
0,0001 og
p
0,0001, henholdsvis). I
KRAS
wt pasienter TTP og OS var signifikant lavere hos pasienter med
BRAF product: (
p
= 0,0001 og
p
0,0001, henholdsvis) mutant svulster, nedregulering av
AREG product: (
p
= 0,021 og
p
= 0,004, henholdsvis) eller
EREG product: (
p
= 0,0001 og
p
0,0001, henholdsvis) og klasse 0-1 hudutslett (
p
0,0001 og
p
0,0001, henholdsvis). TTP var signifikant lavere hos pasienter med
PIK3CA
mutasjoner (
p
= 0,01) eller tapt PTEN (
p
= 0,002). Multivariat analyse viste
KRAS plakater (Hazard Ratio [HR] 4.3,
p
0,0001),
BRAF
mutasjon (HR: 5.1,
p
0,0001),
EREG
lav uttrykk (HR: 1.6,
p
= 0,021) og fravær av alvorlig /moderat utslett (HR: 4.0,
p
0,0001) som uavhengige prognostiske faktorer for redusert TTP. Tilsvarende
KRAS plakater (HR 2.9,
p
= 0,01),
BRAF
mutasjon (HR: 3.0,
p
= 0,001),
EREG
lav uttrykk (HR: 1.7,
p
= 0,021), absecence alvorlig /moderat utslett (HR: 3.7,
p
0,0001) og tilstedeværelsen av undifferantited svulster (HR: 2.2,
p
= 0,001) ble avslørt som uavhengige prognostiske faktorer for redusert OS
Konklusjoner
Disse resultatene understreker at
KRAS-BRAF.
mutasjoner og
EREG
uttrykket kan brukes som biomarkører for ytterligere å velge pasienter som gjennomgår anti-EGFR behandling
Citation. Saridaki Z, Tzardi M, Papadaki C, Sfakianaki M, Pega F , Kalikaki A, et al. (2011) Effekt av
KRAS, BRAF, PIK3CA
Mutasjoner, PTEN,
AREG, EREG
Expression og hudutslett i ≥2
nd Linje Cetuximab Basert terapi av pasienter med kolorektal kreft. PLoS ONE 6 (1): e15980. doi: 10,1371 /journal.pone.0015980
Redaktør: Meenhard Herlyn, Wistar Institute Program, USA
mottatt: 23 september 2010; Godkjent: 01.12.2010; Publisert: 20 januar 2011
Copyright: © 2011 Saridaki et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dr. Z. Saridaki er en mottaker av en kretisk Association for Biomedical Research (CABR) stipend. Ingen nåværende eksterne finansieringskilder for denne studien
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Til tross for framgangen i forvaltningen av metastatisk kolorektalkreft (mCRC) i løpet av de siste årene, er fortsatt den sykdommen et stort folkehelseproblem i den vestlige verden med anslagsvis 146,970 nye CRC tilfeller og 49,920 dødsfall for 2009 i USA [1].
To monoklonale antistoffer målrettet mot EGFR (anti-EGFR-MoAb), begge ved binding til ekstracellulære domene, og dermed fører til hemming av sin nedstrøms signalering, har det kimære IgG1 moAb cetuximab, og den fullt ut humanisert IgG2 moAb panitumumabs, angitt klinisk praksis i mCRC innstillingen og har vist seg å gi en beskjeden klinisk nytte i tidligere behandlede pasienter, enten brukt alene eller i kombinasjon med kjemoterapi [2] – [5]. Ikke desto mindre, fra begynnelsen ble det klart at ikke alle pasienter utlede en nytte av inkorporeringen av disse midler i behandlingskombinasjoner; ja, ikke-randomiserte retrospektive studier [6] – [11] samt retrospektiv analyse av prospektive randomiserte studier [12] – [16] viste at tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjoner var prediktiv av resistens mot anti- EGFR MoAb terapi og var forbundet med en dårligere prognose og en kortere overlevelse. Basert på denne kunnskapen, en primær svulst er
KRAS
mutasjonsstatus er nå obligatorisk for behandling av metastatisk sykdom med en anti-EGFR moAb (Det europeiske legemiddelbyrå – EMEA-HC-741 og HC-558 og US Food and Drug Administration – FDA søknad (BLA) 125 084 og nr (BLA) 125147)
Men ikke alle pasienter med
KRAS
WT svulster nytte av anti-EGFR MoAb behandling, mening. at ytterligere genetiske faktorer som bestemmer motstand eksisterer [7], [9], [17] – [19]. Faktisk fra tre sporadiske mCRC retrospektive studier [20] – [22],
BRAF
V600E mutasjon har vist seg å identifisere en undergruppe ( 10%) av pasientene som ikke bare tilstede motstand mot anti-EGFR MoAbs terapi, men er også kjennetegnet ved spesielt ugunstig prognose uavhengig av behandlingen administrering [20] – [22]. Videre, selv om ikke helt klart ennå,
PIK3CA
-mutant svulster synes å utlede ingen eller liten nytte av anti-EGFR MoAb behandling [20], [23] -. [26]
I tillegg
KRAS-BRAF-PIK3CA
mutasjonsstatus, EGFR epiregulin (
EREG
) og ampiregulin (
AREG
) ligander «uttrykk i primær CRC svulster har blitt vist til en betydelig forutsi klinisk utfall i
KRAS
WT mCRC pasienter behandlet med cetuximab, indikerer ligand-drevet autokrint onkogene EGFR signaliserer [27], [28]. I tillegg, PTEN (fosfatase og tensin homolog) proteinekspresjon, og spesielt dens tap, ser ut til å være forbundet i en rekke studier med resistens overfor behandling med anti-EGFR-MoAb behandling [21], [29] – [31]. Videre, fra et klinisk synspunkt, den eneste parameter som har blitt stadig forbundet med en høy sannsynlighet for respons, forlenget progresjonsfri overlevelse (PFS) og median total overlevelse (MOS) til anti-EGFR MoAb behandling er utvikling av hud utslett [2], [5], [32].
kliniske parametere synes å være utilstrekkelig for pasientens valg, men, biomarkører analyser har allerede blitt innarbeidet i behandling av CRC pasienter. Hensikten med denne studien var å samtidig undersøke og etterforske den kliniske relevansen av alle kjente biomarkører,
KRAS
ekson 2,
BRAF
V600E,
PIK3CA
ekson 9 og 20 mutasjonsstatus i forbindelse med
AREG
,
EREG
mRNA uttrykk, PTEN immunhistokjemiske protein uttrykk, samt, hudutslett utvikling, i mCRC pasienter behandlet med cetuximab inneholder berging kombinasjonskjemoterapi.
materialer og metoder
pasient~~POS=TRUNC befolkningen og studiedesign
Ett hundre og tolv sammenhengende pasienter med histologisk bekreftet mCRC og tilgjengelig svulst materiale for molekylær analyse, som ble behandlet med cetuximab inneholder berging kjemoterapi ved Institutt for medisinsk onkologi, Universitetssykehuset i Heraklion (Kreta, Hellas) mellom 1/2005 – 12/2008, ble inkludert. Studien ble godkjent av etikk og vitenskapskomiteer ved Universitetet General Hospital i Heraklion og alle pasienter ga sin skriftlig informert samtykke til bruk av vevet materiale for translasjonell forskning.
Pasient Evalueringen ble utført ved baseline og hver fjerde sykluser med kjemoterapi. Sykdomsstatus ble kodet, uten kjennskap til laboratorieanalyse.
Tissue utvalg, DNA og RNA ekstraksjon
Formalin fiksert, ble parafininnstøpte (FFPE) tumorsnitt anmeldt av en patolog ( MT) for å bekrefte diagnosen og definere tumor beriket områder for disseksjon. Ti seriesnitt av fem mikrometer tykkelse ble farget med atom rask rødt (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og skrape disseksjon under en kikkert mikroskop ble utført for prøver med ≥80% tumorceller; for prøver med 80% maligne celler, mikrodisseksjon med det piezoelektriske Eppendorf microdissector (Eppendorf, Hamburg, Tyskland) ble utført. DNA-ekstraksjon ble utført med bruk av den Epicentre® Biotechnologies MasterPure ™ Fullstendig DNA og RNA Purification Kit ifølge produsentens instruksjoner (Epicentre, Madison, WI, USA) etter at de isolerte kreftceller ble lysert i buffer inneholdende proteinase K ved 60 ° C i 72 timer. For RNA-ekstraksjon, kreft celler ble resuspendert i 400 ul RNA lysis buffer supplementert med 300 mg proteinase K (Qiagen, Valencia, CA, USA) og inkubert ved 60 ° C i 16 timer inntil vevet var fullstendig oppløst. RNA ble renset ved Trizol LS (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) og, deretter, behandlet med DNase (DNΑ- fri, Ambion, Austin, TX, USA) for å unngå genomisk DNA-forurensning og lagret ved -80 ° C inntil brukt.
KRAS Hotell og PIK3CA mutasjonsanalyse
KRAS Hotell og PIK3CA mutasjonsanalyse ble utført av Sanger-sekvensering etter PCR oppformering av KRAS ekson 2 og PIK3CA eksoner 9 og 20. PCR-forhold med grunning sett som tidligere har blitt rapportert [22].
BRAF
mutasjonsanalyse
V600E
BRAF
mutasjon ble påvist ved sanntids-PCR ved anvendelse av alleliske diskrimineringsmetode som tidligere er beskrevet [33], [34]. I korthet ble DNA ekstrahert fra tumorceller amplifisert ved bruk av et sett av primere og to hydrolyse sonder i ABI PRISM 7900T Sequence Detection System (AB; Applied Biosystems, Forest City, CA, USA). De to hydrolyse prober ble merket ved 5 med VIC og FAM fluoroforer journalister for vekt og mutant allel, henholdsvis. SDS 2.3 programmet ble brukt for analyse av resultatene.
AREG Hotell og
EREG
mRNA uttrykk
Super III revers transkriptase (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ble anvendt for å fremstille cDNA fra 50 ng av total RNA for hvert gen analysert som tidligere beskrevet [35]. Relativ cDNA kvantifisering for
AREG, EREG Hotell og begge
β-aktin Hotell og
PGK
som interne referanse gener ble gjort ved hjelp av ABI Prism 7900HT Sequence Detection System (AB), som tidligere beskrevet [35]. De primere og probe sett ble utformet ved hjelp Primer Express 2.0-programvare (AB), i henhold til Ref Seq NM_001657.2 for
AREG Hotell og NM 001432,2 for
EREG product: (http: //www. ncbi.nlm.nih.gov/LocusLink). Sekvensen av primerne og 5 «, fluorescerende fargestoff reporter (6FAM) prober for alle referanse- og mål-genene er vist i tabell 1.
Relativ genekspresjon kvantifisering ble utført i henhold til sammenlignings Ct-metoden ved hjelp
β-aktin Hotell og
PGK
som endogene kontroller og kommersielt RNA-kontroller (Stratagene, La Jolla, CA, USA) som kalibratorer. Endelige resultater ble bestemt som følger: 2
– (ΔCt sample-ΔCt kalibrator), hvor A C
T verdier av kalibratoren og prøven ble bestemt ved å subtrahere C
T verdi av målgenet fra middelverdien verdien av både referanse gener. I alle forsøkene, triplikater bare med et standardavvik (SD) av Ct-verdien 0,25 ble akseptert. I tillegg har genomisk DNA-forurensning av hver prøve ble ekskludert av ikke-revers transkripsjon av RNA [35].
PTEN proteinekspresjon
tre- til 4-
μ
m tumorvev deler av parafininnstøpte prøver fra hver pasient ble valgt for PTEN IHC-farging ved hjelp av 17.A mus monoklonalt antistoff (1:25 fortynning, Neomarkers; ThermoFisher Scientific Inc, Fremont, CA), som beskrevet tidligere [28], [36]. Etter deparaffinization og hydrering av seksjoner, ble antigener avslørt med varme i EDTA buffer. Farging ble utført ved hjelp av Ultravision LP Large Volume Detection System AP Polymer (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Negative kontrollglass ble fremstilt ved å utelate det primære antistoff. Prostata kreft og endotelceller ble brukt som eksterne og interne positive kontroller, henholdsvis.
PTEN flekker var hovedsakelig cytoplasmatic. Som tidligere beskrevet [28], intensitet ble scoret i henhold til en fire-lags system: 0, ingen farging; 1, svak; 2, moderat; og 3 = sterk. Én, to eller tre ekstra Punkter ble tilskrevet hvis prosentandelen av positive var mindre enn 25%, 25-50% eller henholdsvis 50%,. Prøvene med en kumulativ score på ≥4 ble karakterisert som positive [28].
Studiedesign og statistisk analyse
Denne studien var en retrospektiv analyse tar sikte på å utforske den prediktive verdien av omfattende biomarkører analyse i utfallet av pasienter med mCRC behandlet med cetuximab pluss kjemoterapi som berging behandling. Alle tilgjengelige biopsier av den primære tumor med mer enn 100 celler per seksjon ble inkludert i analysen. RT-qPCR analyse ga verdier som ble uttrykt som forholdstall mellom to absolutte målinger (genet av interesse: gjennomsnitt for interne referanse gener). har vært brukt KJØP analyse for estimering av cut-off interessante
AREG Hotell og
EREG
mRNA uttrykk, for å klassifisere tilfeller inn i grupper på en avhengig (TTP og MOS) variabel. Prøver med mRNA uttrykk over eller lik cut-off point ble ansett som prøver med høyt uttrykk, mens de med verdi under medianen som prøver med lav uttrykk. Sammenhenger mellom
KRAS, BRAF
,
PIK3CA
mutasjonsstatus,
AREG Hotell og
EREG
mRNA uttrykk og PTEN IHC uttrykk med baseline ble vurdert ved hjelp av Fishers eksakte test for kategoriske variabler eller logistisk regresjon for kontinuerlige variabler. Spearman eksakte test ble brukt for å vurdere sammenhengen mellom
AREG Hotell og
EREG
mRNA uttrykk. Tid til tumorprogresjon (TTP) og total overlevelse (OS) ble målt fra tidspunktet for cetuximab som inneholder behandlingslinje innvielse til den første radiografisk dokumentasjon av sykdomsprogresjon eller død, henholdsvis. Kaplan-Meier-kurver ble brukt for å beskrive hvor stor andel av pasientene som forble fri for arrangementer over hele oppfølgingsperioden. Assosiasjoner mellom prognostiske faktorer og TTP eller OS ble undersøkt ved hjelp av Cox regresjonsmodeller. Alle rapporterte
p
-verdier er tosidig og ikke justert for multiple testing.
Resultater
Pasient demografi
mutasjonsstatus for
KRAS
ekson 2,
BRAF
ekson 15, og
PIK3CA
eksoner 9 og 20 ble bestemt i alle 112 pasienter fortløpende med mCRC mens.
AREG Hotell og
EREG
mRNA ble bestemt i 106 og 105 pasienter hvor tumormateriale var tilgjengelig henholdsvis, mens PTEN uttrykk ble evaluert i 106 pasienter. Alle pasientene ble behandlet med cetuximab i kombinasjon med kjemoterapi (73% i kombinasjon med Irinotecan, 27% med oksaliplatin) som berging behandling (Tabell 2). Sekstiseks (59%) av pasientene hadde mottatt behandling i 2
nd innstilling linje og den gjenværende 46 (41%) som 3
rd behandling. Det var ingen pasienter som fikk anti-EGFR MoAb i en
st linjeinnstilling. Sykdomskarakteristikk var typisk for mCRC i den vestlige verden; pasientenes median alder var 66 år og 60% av dem var menn (tabell 2). Median PFS fra en
st behandling var 8,9 måneder (95% CI 8.1 til 9.9) og median tid fra tilbakefall til tidligere behandling linjen til cetuximab administrasjonen var 1,1 måneder (95% KI 0,7-1,8).
mutasjonsstatus og uttrykk verdier resultater
KRAS
mutasjoner ble oppdaget i 37 (33%),
BRAF
mutasjoner i åtte (7,2%) og
PIK3CA
mutasjoner i 11 (9,8%, 8 i ekson 9 og 3 i ekson 20) primære svulster, henholdsvis.
KRAS Hotell og
BRAF
mutasjoner var gjensidig utelukkende, mens tre svulster gjennomført både
KRAS Hotell og
PIK3CA
mutasjoner.
AREG Hotell og
EREG
ble overuttrykt i 48 (45%) og 51 (49%) pasienter, henholdsvis, mens PTEN ble scoret som negativ (dvs. tap av funksjon) i 21 (19,8 %) pasienter (figurene 1A og 1B). Når
PIK3CA
mutasjoner og PTEN uttrykk ble analysert sammen, aktivering av veien (definert som tap av PTEN eller
PIKECA
mutasjon) ble påvist i 25 (23,5%) pasienter. En trend for redusert forekomst av
KRAS
mutasjoner i endetarmssvulster ble observert (
p
= 0,097) siden 31 av de 83 (37%) svulster som ligger på tykktarmen og seks av de 29 ( 20%) svulster lokalisert ved endetarmen næret en
KRAS
mutasjon. Det var ingen sammenheng mellom tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjoner med pasientenes kjønn, alder ( 70 år versus ≤70 år), scene ved diagnose, histologisk grad, mucinous status, PTEN tap og
AREG Z –
EREG
uttrykk (alle
p
-verdier 0,05). Dessuten ble det observert en statistisk signifikant sammenheng mellom forekomsten av
BRAF
mutasjoner og histologisk Karakter (brønn /moderat versus udifferensiert) (
p
= 0,049) og
EREG
mRNA downregulation (
p
= 0,013). Det var ingen sammenheng mellom tilstedeværelsen av
BRAF Hotell og
PIK3CA
mutasjoner med pasientenes kjønn, alder ( 70 år versus ≤70 år), stadium ved diagnose, svulst plassering , mucinous status, PTEN tap og
AREG
uttrykk (i begge tilfeller er alt
p
-verdier 0,05)
Panel A:. Eksempel på et moderat differensiert adenokarsinom kolon scoret som PTEN positive (x100) Panel A:. Eksempel på et moderat differensiert adenokarsinom i tykktarmen scoret som PTEN negative (x100)
Effekt av mutasjonsstatus og uttrykk verdier på utfallet av berging cetuximab terapi
Resultater i hele pasientpopulasjonen (Tabell 3).
Tabell 3 og 4 oppsummere effekten av genetiske endringer på utfallet av cetuximab holdig berging behandling. Median TTP av hele gruppen av pasienter var 4,9 måneder (95% KI 4.1 til 5.7) og de tilsvarende median total overlevelse (OS) 14,5 måneder (95% KI 10,0 til 18,9). TTP og OS var betydelig lavere blant pasienter med tumorer gjennomført
KRAS
mutasjoner (3,1 vs. 6,4 måneder,
p
= 0,001 og 10,6 vs. 16,3 måneder,
p
= 0,026, henholdsvis) (figur 2A og 2B). Tilsvarende TTP og OS var betydelig lavere blant pasienter med tumorer gjennomført
BRAF
mutasjoner (2,1 vs. 5,2 måneder,
p
= 0,001 og 4,3 vs. 15,1 måneder,
p
0,0001, henholdsvis) (figur 3 og 4). Det var ingen signifikant korrelasjon i form av TTP henhold til
PIK3CA
mutasjonsstatus eller PTEN uttrykk i alle behandlede pasienter (4,9 vs. 5. 7 måneder,
p
= 0,427 og 5,2 vs. 6,03 . måneder,
p
= 0,102, henholdsvis) (figur 4A og 4B); Tilsvarende var det ingen forskjell i forhold til median OS mellom pasienter med
PIK3CA
mutant (13,6 måneder) og vekt (15,0 måneder) primære svulster (
p
= 0,44, figur 5A), som samt mellom pasienter med tapt (14,3 måneder) eller normal (15,1 måneder) PTEN-funksjonen (p = 0,82, figur 5B). Likevel, når
PIK3CA
mutasjonsstatus og PTEN uttrykk ble tatt i betraktning sammen, aktivering av veien gjennom
PIK3CA
mutasjoner og /eller PTEN tap ble korrelert med en trend for redusert TTP hos alle pasienter (3,8 vs. 5,0 måneder,
p
= 0,051) (figur 4E), mens ingen forskjell ble observert i median OS (13,9 vs. 14,5 måneder,
p
= 0,878) (figur 5E)
Panel A:. tid til tumorprogresjon (TTP) Panel B: Median total overlevelse (OS)
Panel A:. tid til tumorprogresjon (TTP) i hele pasientenes befolkningen. Panel B: Median total overlevelse (OS) i hele pasientenes befolkningen Panel C: tid til tumorprogresjon (TTP) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster. Panel D: Median total overlevelse (OS) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster
Panel A:. Henhold til
PIK3CA
mutasjoner status i hele pasienter « befolkning. Panel B: i henhold til PTEN uttrykk i hele pasientpopulasjonen. Panel C: i henhold til PIK3-PTEN aksen aktiveringsstatusen (
PIK3CA
mutasjoner status og PTEN uttrykk) i hele pasientpopulasjonen. Panel D: i henhold til
PIK3CA
mutasjoner status hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster. Panel E: i henhold til PTEN uttrykk hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster. Panel F: i henhold til PIK3-PTEN aksen aktiveringsstatusen (
PIK3CA
mutasjoner status og PTEN uttrykk) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster
Panel A. : i henhold til
PIK3CA
mutasjoner status i hele pasientpopulasjonen. Panel B: i henhold til PTEN uttrykk i hele pasientpopulasjonen. Panel C: i henhold til PIK3-PTEN aksen aktiveringsstatusen (
PIK3CA
mutasjoner status og PTEN uttrykk) i hele pasientpopulasjonen. Panel D: i henhold til
PIK3CA
mutasjoner status hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster. Panel E: i henhold til PTEN uttrykk hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster. Panel F: i henhold til PIK3-PTEN aksen aktiveringsstatusen (
PIK3CA
mutasjoner status og PTEN uttrykk) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster
En meget signifikant korrelasjon mellom
AREG Hotell og
EREG
mRNA uttrykk ble observert (Spearman ρ
2 = 0,736,
p 0,001
). I hele gruppen av pasienter,
AREG
mRNA overekspresjon var signifikant korrelert med økt TTP og OS (5,0 vs. 3,8 måneder,
p
= 0,018 og 20,2 vs. 10,7 måneder,
p
= 0,013, henholdsvis]) (6A og 6B). Videre
EREG
mRNA overekspresjon ble også korrelerte signifikant med økt TTP og OS (6.1 vs. 3.6 måneder,
p
= 0,002 og 17,6 vs. 10,7 måneder,
p
= 0,004, henholdsvis) (7A og 7B)
Panel A:. tid til tumorprogresjon (TTP) i hele pasientpopulasjonen. Panel B: Median total overlevelse (OS) i hele pasientenes befolkningen Panel C: tid til tumorprogresjon (TTP) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster. Panel D: Median total overlevelse (OS) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster
Panel A:. Tid til tumorprogresjon (TTP) i hele pasientpopulasjonen. Panel B: Median total overlevelse (OS) i hele pasientenes befolkningen Panel C: tid til tumorprogresjon (TTP) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster. Panel D: Median total overlevelse (OS) hos pasienter med
KRAS
wt primære svulster
Tabell 3 og figur 8A og 8B viser forskjellene i TTP og OS henhold til
KRAS-BRAF
mutasjonsstatus og
AREG
uttrykk. Det er vist at
KRAS-BRAF
WT og
AREG
overekspresjon profilen ble korrelerte signifikant med økt TTP og OS sammenlignet med andre kombinasjoner. Tilsvarende figur 8C og 8D og Tabell 3 illustrerer forskjellene i TTP og OS henhold til
KRAS-BRAF
mutasjonsstatus og
EREG
uttrykk; igjen, ble
KRAS-BRAF
WT og EREG overekspresjon profil korrelerte signifikant med økt TTP og OS sammenlignet med en annen kombinasjon
Panel A:. tid til tumorprogresjon (TTP) i henhold til
KRAS-BRAF
mutasjoner status og
AREG
mRNA uttrykk. Panel B: Median total overlevelse (OS) i henhold til
KRAS-BRAF
mutasjoner status og
AREG
mRNA uttrykk. Panel C: tid til tumorprogresjon (TTP) i henhold til
KRAS-BRAF
mutasjoner status og
EREG
mRNA. Panel D Median total overlevelse (OS) i henhold til
KRAS-BRAF
mutasjoner status og
EREG
mRNA.
Til slutt, vi korrelert effekten av cetuximab indusert hud utslett med behandlingsresultat. Pasienter med alvorlig eller moderat (grad 2-3) hudutslett presenteres betydelig høyere TTP (7,5 måneder) sammenlignet med de med mild (grad 1) (4,5 måneder;
p
0,0001) og ingen utslett (2,3 måneder,
p
0,0001), samt økt OS (24,1 vs. 13,2 måneder,
p
0,0001, og versus 4,9 måneder,
p
0,0001) (tabell 3 og figur 9A og 9B)
Panel A: tid til tumorprogresjon (TTP) i henhold til den verste hudutslett klasse utviklet under behandling med cetuximab + kjemoterapi.. Panel B: Median total overlevelse (OS) i henhold til den verste hudutslett klasse utviklet under behandling med cetuximab + kjemoterapi
Resultater i
KRAS
WT pasientenes befolkningen (tabell. 4)
Når bare
KRAS
WT saker ble analysert pasienter med tumorer gjennomført
BRAF
mutasjon hadde enda mer betydelig lavere TTP og OS (TTP. 2.1 vs. 6.4 måneder,
p
0,0001, OS: 4,3 vs. 16,3 måneder,
p
0,0001) (Figur 3C og 3D) sammenlignet med resultatene i hele befolkningen. I tillegg, når bare den
KRAS
WT saker ble vurdert, redusert TTP var signifikant assosiert med tilstedeværelse av
PIK3CA
mutasjon (4,3 vs. 6,4 måneder,
p
= 0,01) (figur 4C) og PTEN downregulation (3,7 vs. 5,0 måneder,
p
= 0,002) (figur 4D). Likevel, i denne spesielle pasientgruppen med
KRAS
WT tumorer, ble ingen signifikant korrelasjon funnet i median OS mellom pasienter med og uten
PIK3CA
mutasjoner (13,5 vs. 16,3 måneder, henholdsvis; p = 0,345) eller de med downregulated eller funksjonell PTEN (15,3 vs. 14,5 måneder, henholdsvis; p = 0,862) (Tall 5C og 5D). Men, i
KRAS
WT pasienter når
PIK3CA
mutasjonsstatus og PTEN uttrykk ble tatt i betraktning sammen, en betydelig redusert TTP ble observert med aktivering av veien gjennom
PIK3CA
mutasjoner og /eller PTEN tap, sammenlignet med sin inaktivert tilstedeværelse med vekt
PIK3CA Hotell og /eller funksjonell PTEN (3,8 vs. 6,4 måneder,
p
= 0,001) (figur 4F); omvendt, slik sammenheng kunne ikke bli avslørt i form av median OS (13,9 vs. 16,2 måneder;
p
= 0,987). (figur 5F)
I
KRAS
WT pasienter,
AREG
mRNA overekspresjon var signifikant korrelert med økt TTP og OS (5,8 vs. 4,3 måneder,
p
= 0,021 og 23,2 vs. 10,7 måneder,
p
= 0,004, henholdsvis) (Tall 6C og 6D), samt,
EREG
mRNA overekspresjon (7,0 vs. 3,8 måneder,
p
= 0,0001 og 20,2 vs. 10,5 måneder,
p
. 0,0001, henholdsvis) (Tall 7C og 7D)
univariat og multivariat analyse
så vidt TTP var bekymret, univariate analysen (tabell 3 og 4) signifikante assosiasjoner med: i)
KRAS
mutasjoner (
p
= 0,001); ii)
BRAF
mutasjoner (
p
= 0,001); iii)
AREG
mRNA uttrykk (
p
= 0,018); iv)
EREG
mRNA uttrykk (
p
= 0,002) og v) utvikling av moderat alvorlig hudutslett (
p
0,0001). I tillegg TTP i
KRAS
wt pasienter ble signifikant korrelert med
PIK3CA
mutasjon (
p
= 0,01), PTEN uttrykk (
p
= 0,002 ) og
PIK3CA
-PTEN aksen aktivering (
p
= 0,001). Såvidt OS ble bekymret univariate analysen (tabell 3 og 4) viste signifikant sammenheng med: i)
KRAS
mutasjoner (
p
= 0,026); ii)
BRAF
mutasjoner (
p
0,0001); iii)
AREG
mRNA uttrykk (
p
= 0,013); iv)
EREG
mRNA uttrykk (
p
= 0,004) og v) utvikling av moderat alvorlig hudutslett (
p
0,0001). Til slutt, tumor differensiering (udifferensierte svulster) var signifikant korrelert med redusert median OS (Hazard Ratio: 1,9;
p
= 0,003)
I multivariat analyse,
KRAS
(HR 4.3,
p
0,0001),
BRAF plakater (HR 5.1,
p
0,0001) mutasjon og lav
EREG
mRNA uttrykk (HR 1.6,
p
= 0,021) dukket opp som uavhengige faktorer assosiert med redusert TTP. Videre fravær av alvorlige og moderat (grad 2-3) hudutslett dukket opp, så vel som en uavhengig prognostisk faktor for redusert TTP (HR 4.0,
p
0,0001) (tabell 5). I tillegg
KRAS plakater (HR 2.9,
p
= 0,01),
BRAF plakater (HR 3.0,
p
= 0,001) mutasjon og lav
EREG
mRNA uttrykk (HR 1.7,
p
= 0,021) dukket opp som uavhengige faktorer assosiert med redusert OS. I tillegg tumor differensiering grad 3 dukket opp, så vel som en uavhengig prognostiske faktorer for redusert OS (HR 2.2,
p
= 0,001). Videre fravær av alvorlige og moderat (grad 2-3) hudutslett dukket opp som en uavhengig prognostisk faktor for redusert OS (HR 3.7,
p
0,0001, henholdsvis). (Tabell 5)
Diskusjons
Etter oppdagelsen av
KRAS
mutasjoner i forbindelse med anti-EGFR MoAb motstand,
KRAS
mutasjons karakterisering av mCRC svulster er, tiden , preformed i rutinemessig før noen behandling beslutning. Selv om tilstedeværelsen av
KRAS
mutasjoner er en bestemt prediktiv biomarkør for mangel på anti-EGFR MoAb effekt [6] – [9], [14], [37] det er overbevisende bevis for at flere genetiske hendelser er involvert i denne prosess, ettersom omtrent halvparten av
KRAS
wt pasienter som er motstandsdyktige mot en slik behandling [38]. I tillegg har flere biomarkører blitt foreslått i forbindelse med
KRAS
mutasjoner som prediktive markører for effekten av anti-EGFR MoAb inkludert
BRAF product: [19], [22] eller
PIK3CA
mutasjoner [21], EGFR ligander overekspresjon [23], [27], PTEN proteinekspresjon [28] og EGFR kopitall [10], [11]. I denne studien evaluerte vi prediktiv betydningen av andre vanlige mutasjoner observert i CRC i forbindelse med PTEN protein expression og EGFR-ligander (
EREG Hotell og
AREG)
mRNA uttrykk, samt effekten av hudutslett i en kohort av pasienter med mCRC behandlet med anti-EGFR pluss kjemoterapi som berging behandling. Så langt vi kjenner til er dette den første studien som kombinerer alle disse parametrene sammen.
