Protein metylering er en posttranslational modifikasjon som forekommer oftest på arginin og lysin rester. Når metyltransferaser blir slått ut i mus, kan det resultere i embryonale letalitet eller tidlig død, som indikerer den viktige biologiske rolle denne gruppen av enzymer. Rekorden for metylert peptid nummer identifisert i et enkelt eksperiment er 249 arginin metylering nettsider.
Her har vi utviklet svært spesifikke antistoffer mot arginin og lysin metylering. Etter immunoaffinitetskolonnerensing berikelse og massespektrometri analyse, vi identifisert over 1000 arginin metylering steder i human cellelinje og mus vev, og 160 lysin metylering steder i human cellelinje HCT116.
Det første vi utviklet antistoffer mot denaturert lysin, ved hjelp et peptid bibliotek som hadde en enkel modifisert lysin i et peptid bibliotek som inneholder aminosyrer på omkringliggende posisjoner.
Neste, vi trekker ned denaturert peptid og analyse dem med LC /MS /MS. Og så har vi klassifisert arginin metylering mønster skjema mus hjernen og embryo.
I det siste, har vi merket det totale protein med dimetylering in vitro. Bruk denne kunstige prøven, identifiserte vi mer enn tusen metylerte peptid, har imidlertid den normale prøve færre enn 100 lysin metylering områder, noe som tyder på at denne modifikasjon er begrenset til en liten del av proteiner.
Metylering av arginin og lysin proteinrester har vært kjent for i mange år, er utfordringen for feltet mangler av verktøy og metoder for å studere disse endringene. Denne studien gir et kraftig verktøy for å få innsikt i feltet av protein metylering.
MC4R er en G-proteinkoblet reseptor som binder? -melanocyte Stimulerende hormon (? -MSH). I murine modeller MC4-reseptorer har blitt funnet å være involvert i å mate adferd, regulering av metabolisme, seksuell adferd, og mannlig erektil funksjon. Både hos gnagere og mennesker, melanokortinreseptorer-4 reseptorer (MC4Rs) undertrykke appetitt og forebygge fedme. Aktivering av melanocortin-4 reseptorer (MC4Rs) begrenser fôring og forebygger fedme.
Vi har slettet og re-uttrykt MC4Rs fra Cre-uttrykke nevroner og observert fenotype. Som de viktigste MC4R-uttrykke nevroner er glutamatergic, er det nesten sikkert at de slipper glutamat og begeistre sine nedstrøms mål nerveceller.
Deretter viser vi at MC4Rs på glutamatergic nevroner er nødvendig for å hindre hyperphagia og fedme. Da har vi gjenoppbygge MC4Rs bare i Sim1 nevroner reddet? 60% av fedme og 100% av hyperphagia av MC4R-null mus. Dette resultatet indikerer at MC4Rs på Sim1 nevroner regulerer fôring. Fordi transkripsjonsfaktor SIM1 er nødvendig for PVH utvikling.
For å oppsummere, viser vi at MC4R-uttrykke nevroner regulerer fôring er SIM1 +, som ligger i PVH, glutamatergic og ikke GABAergic, og uttrykker ikke oxytocin, Corticotrophin -releasing hormon og vasopressin. Vi identifiserer nedstrøms anslag fra disse glutamaterge nevroner til den laterale parabrachial kjernen, noe som kan mekle appetitt undertrykke effekter.
