Abstract
Formål
tumor suppressor p53 er kjent for å bli inaktivert ofte i ulike kreft . I tillegg til kimlinje-polymorfismer i
TP53
er kjent for å påvirke protein funksjon og påvirkning risiko for utvikling av forskjellige typer kreft. I denne studien analyserte vi foreningen av
TP53
Pro72Arg polymorfisme med plateepitelkarsinom oral tungen (SCCOT) og spiserør (ESCC) i India.
Metoder
vurdert fordelingen av
TP53
Pro72Arg polymorfisme i ett hundre og femten og åtti to SCCOT og ESCC pasienter, henholdsvis, med hensyn til ett hundre og ti friske kontroller fra den samme populasjonen. I tillegg analyserte vi sammenslutning av polymorfisme med flere klinisk-patologiske og molekylære parametre.
Resultater
Pro72 allel ble betydelig anriket i SCCOT pasienter sammenlignet med den friske kontrollgruppen, men verken allel ble beriket i ESCC. Interessant, Pro72 allel ble fortrinnsvis mutert i ESCC som ble bekreftet ved analyse av prøver heterozygote for Pro72Arg.
Konklusjoner
Vår studie viste foreningen av Pro72 allel med SCCOT tyder effekten av denne polymorfisme på SCCOT risiko. Fortrinnsrett mutasjon av Pro72 allel utelukkende i ESCC indikerer behovet for ytterligere studier for å forstå vev spesifikk effekt av p53 polymorfisme
Citation. Adduri RSR, Katamoni R, Pandilla R, Madana SN, Paripati AK, Kotapalli V, et al. (2014)
TP53
Pro72 allelet er beriket i Oral Tongue Kreft og ofte mutert hos Esophageal Cancer i India. PLoS ONE 9 (12): e114002. doi: 10,1371 /journal.pone.0114002
Redaktør: Xin Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kina
mottatt: 7 august 2014; Godkjent: 31 oktober 2014; Publisert: 01.12.2014
Copyright: © 2014 Adduri et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet:. Den forfatterne bekrefter at alle data som underbygger funnene er fullt tilgjengelig uten restriksjoner. Alle relevante data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. MDB fikk indiske rådet for medisinsk forskning (ICMR), Govt. av India (Grant No. 5/13/129/2009-NCD-III), Rådet for industriell og teknisk forskning (CSIR), Govt. av India (Grant No. 27 (265) /12 /EPJ-II), Institutt for bioteknologi, Govt. av India (Grant No. BT /PR11873 /MED /30/173/2009) og en kjerne stipend fra Institutt for bioteknologi, Govt. fra India til Senter for DNA fingerprinting og Diagnostics (CDFD). Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
plateepitelkarsinom Oral Tongue (SCCOT) er en vanlig form for hode og hals plateepitelkarsinom (HNSCC) og forekomsten er stadig økende over hele verden [1]. Økningen i forekomsten har blitt bemerket hovedsakelig hos yngre pasienter [2], [3] som det ser ut til å stille lavere tilknytning til vanlige risikofaktorer som alkohol og tobakk som tyder på mulig genetisk disposisjon [3]. SCCOT er kjent for å være aggressive og er assosiert med høyere forekomst av okkult og nodal metastaser sammenlignet med andre HNSCC subtyper [4]. Det er ofte forbundet med dårlig overlevelse som ikke har bedret seg betydelig i løpet av de siste fire tiårene [5], [6]. Spiserørskreft (EF) er den sjette og åttende vanligste kreftformen hos menn og kvinner i henholdsvis India (https://www.icmr.nic.in/ncrp/report_pop_2001-04/cancer_p_based.htm). Plateepitel (ESCC; oppstår vanligvis i proksimale og midten spiserøret) og adeno (EAC, forekommer hovedsakelig i distal spiserøret) carcinoma er de to store EU-subtyper [7]. Selv ESCC var mer vanlig for noen tiår siden, har en rask økning i EAC blitt notert siden 1980-tallet i Vesten [8], parallelt med en økt forekomst av gastrointestinale refleks sykdom (GERD). GERD forårsaker en betennelse indusert patologisk tilstand som kalles «Barretts øsofagus», som predisponerer for EAC [9]. Skjønt, har en lignende trend i økning av GERD blitt bemerket i asiatiske land i de siste tiårene, ESCC fortsatt den dominerende EF subtype [10], noe som tyder på muligheten for å rolle genetiske faktorer. På grunn av sin nærmere plassering til halsen og likheter i tumorigenesis trasé, er ESCC noen ganger klassifisert med HNSCC.
Somatisk inaktivering av
TP53
er en hyppig hendelse i de fleste kreftformer, mens bakterie linje avvik er knyttet til Li-Fraumeni [11], en arvelig kreft predisposisjon syndrom. Vanlige former for p53-inaktivering er punktmutasjoner, allelisk tap [12] og inaktivering mediert av oncoviral proteiner [13]. I tillegg en rekke polymorfismer oppstå i
TP53
hvorav noen er foreslått å forurolige protein funksjon og kan påvirke kreft mottakelighet [14]. Blant disse, kodon 72 Pro /Arg polymorfisme (rs1042522) er den mest vanlige og godt studert. De to p53-alleler codon72 koder for prolin (Pro72) eller arginin (Arg72), som ligger i en poly-region til stede mellom transaktivering og den DNA-bindende domener, og kan påvirke strukturen i det antatte SH3-bindende domene [15]. Den Pro72 allelet er kjent for å være assosiert med koronar hjertesykdom [16], høyere følsomhet for endometriose [17], primært åpenvinkelglaukom [18], systemisk lupus erythematosus (spesielt i asiater) [19] og ulcerøs kolitt [20], mens den Arg72 allelet er assosiert med progresjon av diabetisk nefropati [21]. Enda viktigere, polymorfi utstillinger varierende tilknytning til risiko [22], [23], overlevelse [24], [25] og behandlingsrespons [25] i flere kreftformer i ulike populasjoner.
I denne studien , vurderte vi hyppigheten av Pro72Arg polymorfisme i SCCOT og ESCC. Pro72 allelet syntes å være signifikant assosiert med SCCOT mens ingen sammenheng med enten allel ble oppdaget i ESCC. Men i ESCC,
TP53
DNA-bindende domene mutasjoner oppsto på et vesentlig høyere frekvens i Pro72 allel.
Materialer og Metoder
Pasient og kontrollprøver
Ett hundre og femten og åtti to tidligere ubehandlede og kirurgisk resected SCCOT og ESCC prøver henholdsvis ble samlet inn i perioden 2007-2013 fra tre sykehus i Hyderabad, India, etter informert samtykke. Sytti to og sytti fem SCCOT og ESCC pasientene var henholdsvis fra våre tidligere studier [26], [27]. Klinisk-patologisk detaljer om pasientene er gitt i tabell S1. Median alder og mann til kvinne ratio var 49 og 50; og 1,94 og 1 for henholdsvis SCCOT og ESCC. Perifert blod fra ett hundre og ti alder og kjønn matchet kreft gratis friske personer som tilhører samme geografiske region ble samlet.
Etikk uttalelse
Studiet ble godkjent av etikkomiteer av Apollo sykehus (14 /05/2005), MNJ Institute of Oncology og Regional Cancer Centre (23/09/2006 og 20/10/2008) og Indo-American Cancer Institute og Research Centre (08/08/2007) samt institusjonelle bioetikk komité Senter for DNA fingerprinting og Diagnostics (CDFD) (20/12/2009) som per modifisert Helsinki deklarasjonen 2005. Alle prøver ble samlet etter skriftlig informert samtykke.
Genotyping
DNA ble isolert fra histologisk bekreftet normalt vev ved siden av svulsten for hver prøve som beskrevet i dokument S1. Genotyping av kodon 72 ble utført ved anvendelse av en todelt tilnærming inkludert PCR-RFLP (figur 1A) [28] og allel-spesifikk PCR (figur 1A) [29] som tidligere beskrevet. Resultatene ble uavhengig bekreftet i tjue og henholdsvis femten SCCOT og ESCC prøver ved hjelp av toveis Sanger-sekvensering på en 3100 Genetic Analyzer (ABI Inc., Foster City, CA, USA) (figur 1B). Primersekvenser er oppført i Tabell S2.
Panel A, PCR-RFLP-analyse bekreftet ved allel-spesifikk PCR utført som beskrevet i materialer og metoder delen. M, stige 50 bp DNA; 1, Pro /Pro; 2, Pro /Arg; 3, Arg /Arg; og C, ingen mal kontroll. Panel B, Sanger-sekvensering. Pro /Pro (til venstre), Pro /Arg (i midten) og Arg /Arg (til høyre).
TP53
mutasjon screening
TP53
mutasjon screening ble utført som beskrevet tidligere [26]. For å finne ut om Pro72 eller Arg72 allelet ble husing p53 mutasjoner i prøver heterozygote for Pro72Arg polymorfisme, en lang amplicon (~2700 bp) spenner eksoner 4-8 av
TP53 plakater (som inkluderer kodon 72, så vel som regionen som koder for den DNA-bindende domene) ble amplifisert (Primerpar Arg
+ og Exon 8R, Tabell S2) fra genomisk DNA og klonet i TA-vektoren (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). De rekombinante plasmider ble screenet for mutasjon, så vel som for kodonet 72 polymorfisme ved hjelp av toveis Sanger-sekvensering.
Molekylær analyse
Status of p53 kjerne stabilisering,
TP53
mutasjon (bare for SCCOT), EGFR løpet uttrykk, mikro ustabilitet, β-catenin kjernefysiske lokalisering status (kun for ESCC), HPV infeksjon og LOH og klinisk-patologisk variabler som alder, kjønn, røyking, alkoholforbruk, klasse og patologisk stadium ble rapportert i vår tidligere studier [26], [27].
Statistisk analyse
Avvik fra Hardy-Weinberg likevekt for genotype frekvens for saker og kontroller, ble analysert ved hjelp av χ
2 test. Odds ratio og tilsvarende 95% konfidensintervall for sykdomsrisiko ble beregnet. Dominant, codominant, recessiv, over dominerende og log additiv arve modeller ble testet for å finne ut om SNP ble assosiert med sykdom. Akaike (AIC) og bayesiansk (BIC) informasjon kriterium i tillegg til χ
2 p-verdiene ble brukt til å velge den beste modellen av arv. Sammenheng mellom ulike genotyper og klinisk-patologiske variabler ble vurdert ved hjelp χ
2 eller Fisher eksakt test som passer.
Resultater
TP53
Pro72 allel er beriket i SCCOT men ikke i ESCC pasienter
Vi analyserte fordelingen av p53 kodon 72 genotyper i SCCOT og ESCC i forhold til friske kontroller (figur 1) som beskrevet i materialer og metoder delen. 26 (23,6%), 53 (48,2%) og 31 (28,2%) Kontrollprøvene næret Pro /Pro, Pro /Arg og Arg /Arg genotyper, henholdsvis, oppviser dermed ingen betydelig anrikning av en allel over den andre (tabell 1) . Imidlertid Pro72 allele syntes å være vesentlig anriket på SCCOT sammenlignet med kontroller (tabell 1), mens ingen betydelig anrikning ble observert i ESCC (tabell 1). Genotypen distribusjoner av SCCOT og ESCC prøver samt kontroller ble ikke avvike fra Hardy-Weinberg likevekt (tabell 1). Co-dominant, recessiv og log-additiv genetiske modeller ble funnet å være passende for arv SCCOT for SNP (tabell S3A). Men laveste verdi av AIC (310,7) og BIC (317) for recessive Modellen tilsier at det skal være den beste modellen (tabell S3A). I motsetning til dette ble ESCC ikke oppviser assosiasjon med en hvilken som helst genetisk modell (tabell S3b) som forventet. Ingen av flere molekylære og klinisk-patologiske variabler viste signifikant sammenheng med kodon 72 allelfrekvenser i SCCOT og ESCC (tabell S1).
TP53
mutasjoner er utelukkende observert i ESCC svulster med p53 atom stabilisering
TP53
mutasjonsstatus ble rapportert tidligere for alle SCCOT analyserte prøvene i forrige undersøkelse [26]; mutasjoner ble assosiert med dårlig sykdomsspesifikk overlevelse [26], men ikke med flere klinisk-patologisk parametre er oppregnet i materialer og metoder delen. Vi screenet ESCC prøver for somatiske mutasjoner i eksoner 5-8 av
TP53 Hotell som koder DNA-bindende domene og er kjent for å huse fleste kreftassosierte mutasjoner [30]. Mutasjoner ble påvist i tjueni av førti fem prøver som viser atom stabilisering, og ingen av tretti sju prøver som ikke gjorde det, noe som tyder på at fravær av kjernefysisk stabilisering kan være en pålitelig indikator på fravær av
TP53
DNA bindende domene mutasjon i ESCC . I alt tjue syv (nitten missense, tre tull og fem indels) mutasjoner (alle heterozygote) ble identifisert. To mutasjoner (c.610G . T (p.E204X) og c.566delC (p P190Lfs * 57)) ble påvist i to prøver hver (tabell S4). Vi identifiserte tre nye somatiske mutasjoner
nemlig.
, C.621_639del19, c.454_466dupCCGCCCGGCACCC og c.428_432delTGCAG + 440delG (tabell S4). Detaljert beskrivelse av de nye mutasjoner er gitt i dokumentet S2. Mutasjoner i ESCC var ikke forbundet med noen av de klinisk-patologisk variabler analysert (tabell S5). Andel av overganger og transversions (Figur S1 A) samt rammeskifte, missense og nonsense mutasjoner (Figur S1B) var lik tidligere rapporter for ESCC som per International Agency for Research on Cancer (IARC)
TP53
database [ ,,,0],15]. Interessant, andelen slettinger var høyere enn rapportert i
TP53
database (figur S1B). G: C A: T overganger utgjorde den store
TP53
mutasjon type (9/29, 34,48%) i ESCC prøver i denne studien ligner databasen [15]. Men frekvensen av C T overganger ved CpG dinukleotider var lavere (10,34%), mens hyppigheten av slettinger (5/29, 17,24%) var høyere enn rapportert i databasen [15]
Pro72 allel næret inaktivere. mutasjoner ofte i ESCC
P53 DNA-bindende mutasjoner var ikke forbundet med kodon 72 genotype i SCCOT (p = 0,917) (tabell 2). I kontrast, ESCC prøver med Pro /Pro (10/20; 50%) genotype var mer sannsynlig til båtplass mutasjon enn prøver med Arg /Arg genotype (5/16; 31,3%) (p = 0,289) (tabell 2). Derfor fortsatte vi å finne ut om Pro72 allel ble oftere mutert ved å analysere prøvene heterozygot for Pro72Arg polymorfisme. En enkelt PCR-produkt som inkluderte mutasjonen, så vel som polymorfisme ble generert og klonet inn i en passende plasmid vektor og sekvensert for å bestemme om mutasjonen var til stede i den Pro72 eller Arg72-allelet. Som vist i figur 2, ble mutasjonen fortrinnsvis plassert i den Pro72-allelet (p = 0,0001) (tabell 2), for således å støtte resultatet oppnådd for prøver som er homozygote for kodon 72 og gjør oss i stand til å sammenligne Pro72Arg polymorfisme og p53-mutasjonstatus for alle 75 ESCC prøver som viste at mutasjonen var signifikant assosiert med Pro72-allelen (p = 0,0018) (tabell 2).
Electrophoretograms viser mutasjon (til venstre) og kodon 72 polymorfisme (høyre) for hver av de fjorten prøvene er vist. Plassering av missense og delesjonsmutasjoner er indikert med piler og barer, respektivt. Proline (CCC) eller Arginine (CGC) kodoner er angitt med en bar.
Interessant, mutasjoner kan påregnes å medføre p53 trunkering (tull og rammeskifte) ble utelukkende identifisert i Pro72 allelet (8 /8, 100%) i ESCC prøver. Skjønt, ble en sletting og en kompleks mutasjon (av totalt seks mutasjoner) identifisert i Arg72 allel, ble begge forventes ikke å endre leseramme, og dermed kan ikke forårsake protein avkutting. Kun 16,67% av
TP53
mutasjoner i SCCOT [26] (sammenlignet med 27,59% i ESCC) var ventet å resultere i p53 trunkering, videre tyder på forskjeller i biologi SCCOT og ESCC med hensyn til p53-funksjon.
Diskusjoner
Flere studier utført på blanding av Head and Neck plateepitelkarsinom (HNSCC) prøver ikke oppdage noen signifikant sammenheng med
TP53
kodon 72 polymorphism [31] – [ ,,,0],33] kanskje på grunn av heterogeniteten for tumor subtyper. Studier på svulster bestemt HNSCC nettstedet og /eller molekylær subtype gjorde imidlertid avsløre tilknytning polymorfisme i ulike etniske grupper [34] – [37]. Så langt vi kjenner til, er dette den første spesifikke kasus-kontrollstudie gjennomført for å finne sammenhengen mellom
TP53
Pro72Arg polymorfisme og SCCOT. Det er motstridende rapporter om sammenslutning av Pro72Arg polymorfisme med ESCC risiko med studier rapporterer signifikant sammenheng med Pro72 [22], [23], [38], [39], Arg72 [40] eller verken [41], [42]. Interessant, kan effekten variere innenfor den samme populasjonen [22], [40]. Vår analyse viser at Pro72 allel var signifikant assosiert med SCCOT men ikke med ESCC, kanskje gjenspeiler forskjeller i biologi SCCOT og ESCC blant indianere. Av notatet, en fersk undersøkelse foreslått betydelig forskjell i p53-funksjon mellom Arg72 og Pro72 allel. Men denne forskjellen var vevsspesifikk [43]. Det ble også foreslått at Pro72-allel kan være mer effektivt i å forårsake cellesyklus-stans [44], mens Arg72 allelet ble vist å være mer effektiv i å indusere apoptose og lokalisering til mitokondriene [45]. Selv om det har vist seg at Arg72 allel kunne være mer effektivt målrettet av HPV protein E6 [29], vi gjorde ikke oppdage noen signifikant sammenheng i denne studien.
I likhet med våre resultater, en annen studie fra India også rapportert fravær av
TP53
mutasjoner i ESCC svulster uten atom stabilisering [46], i motsetning til rapporter fra andre land (54-55) kanskje indikerer en funksjon utelukkende forbundet med indiske befolkningen. I tillegg ESCC
TP53
somatisk mutasjon spekteret påvist i denne studien ligner på observasjoner gjort tidligere fra India [47]. Lavere andel av G: C A: T overganger ved CpG dinukleotider (tilskrevet spontan deaminering av cytosin) identifisert i ESCC prøver i denne studien er i tråd med tidligere studier fra India [47]. Høyere frekvens av G: C A: T overganger på ikke-CpG nettsider kan tilskrives alkylerende agenter i mat og miljø [48]. Av notatet, er nitrosaminer i alkoholholdige drikker [49] og behandlet kjøtt [50] kjent for å øke risikoen for esophageal og magekreft, henholdsvis. ESCC studier fra Iran [51] samt sørlige Brasil [52] rapporterte en sammenslutning av vane å drikke varm te med G: C A:. T overganger
Så langt vi kjenner til, er dette bare studere for å evaluere status for
TP53
mutasjon i Pro /Arg heterozygoter, som forventes å gi mer nøyaktig informasjon om omfanget av foreningen siden begge allelene er til stede i samme genetisk bakgrunn. Vi observerte at p53 DNA-bindende domene mutasjoner ble hovedsakelig påvist i Pro72 allel (sammenlignet med Arg72 allel) i ESCC mens verken allel ble fortrinnsvis mutert i SCCOT. Flere studier på ulike kreftformer rapporterte mulig sammenheng mellom p53 DNA bindende domene mutasjon med Arg72 allel [53], [54] mens noen få rapporterte ellers [24], [55]. Kanskje kan foreningen variere avhengig av etnisitet [24]. Mutert p53 Arg72 er foreslått å være mer effektive i forhold til p53 Pro72 i binding og inaktivering av p73, en p53 homolog som kan transactivate p53 mål [56]. I tillegg har tidligere studier viste også at mutert allel Pro72 kan ha høyere potensiale til å inaktivere p53 i seg selv [57]. Av notatet, ESCC viser hyppig inaktivering av p73 gjennom tap av heterozygositet [58], og dermed kanskje forklare høyere frekvens av mutasjon i Pro72 allel forårsaker inaktivering av p53.
Interessant, vi observerte protein avkorting mutasjoner assosiert utelukkende med Pro72 allel i ESCC. Av notatet, er trunkeringstegn mutasjoner forventet å helt oppheve p53-funksjon mens missense mutasjoner kan forventes å beholde delvis /endret aktivitet. I tillegg, i motsetning trunkering mutasjon, kan missense mutasjoner i p53-DNA-bindende domene endrer evnen til p53 til å binde til DNA og transactivate målgener, men kan ikke påvirke p53 funksjoner eksklusive til andre områder av protein [59]. Dermed fullstendig inaktivering av Pro72 kan være mer tumorigent enn Arg72 i ESCC.
Konklusjon
Denne studien har avdekket effekt av
TP53
Pro72 allel i å øke risikoen for SCCOT og foreslo at SCCOT kan ha biologisk forskjell med andre former for HNSCC. En unik funksjon i denne studien var å bestemme mutasjonsstatus i prøver heterozygote for p53 Pro72Arg polymorfisme, som gjorde oss i stand til å konkludere med at Pro72 allel ble faktisk fortrinnsvis mutert i ESCC. Våre resultater støtter tidligere observasjoner tyder på ulik atferd av p53 Pro72Arg lene i ulike krefttyper og etnisiteter og foreslå tydelig molekylære funksjon av p53 Arg72 og p53 Pro72 med hensyn til assosiert mutasjon i ESCC. Videre studier på andre kreftformer bør gjennomføres for å analysere sammenslutningen av polymorfisme og mutasjon. Våre resultater kan utvides til å analysere effekten av polymorfisme og mutasjon på pasientens overlevelse og respons på chemo /radiotherapies. Molekylære og funksjonelle studier på mutant p53 i Pro72 og Arg72 bakgrunn kan muligens belyse differensial aktivitet av p53. Til slutt, for å belyse effekten av polymorfisme på mutasjon, kan studier med dyremodeller hjelp til å forstå rollen som denne polymorfisme i tumorigenesis.
Hjelpemiddel Informasjon
Figur S1.
komparativ analyse av fordelingen av ESCC
TP53
mutasjoner i India med IARC
TP53
database ved nukleotid nivå (panel A), DNA-nivå (panel B) og proteinnivå (Panel C ). Uklassifiserte og tause mutasjoner rapportert i databasen ble utelatt fra denne analysen. Den p.V143_W146delinAV mutasjonen ble ikke tatt med i analysen (i Panel C) på grunn av kompleksiteten i dens effekt på proteinnivå
doi:. 10,1371 /journal.pone.0114002.s001 plakater (EPS)
Table S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0114002.s002 plakater (docx)
Tabell S2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0114002.s003 plakater (DOC)
tabell S3.
doi: 10,1371 /journal.pone.0114002.s004 plakater (docx)
Tabell S4.
doi: 10,1371 /journal.pone.0114002.s005 plakater (DOC)
Tabell S5.
doi: 10,1371 /journal.pone.0114002.s006 plakater (docx)
Document S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0114002.s007 plakater (docx)
Document S2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0114002.s008 plakater (docx)
Takk
Vi takker Dr. Mukta Srinivasulu, av MNJ Institute of Oncology Regional Cancer Centre, Hyderabad, Dr. MohanaVamsy Chigurupati, Drs. Sujith Patnaik, Subramanyeshwar Rao og NarasimhaRaju Kalidindi av Indo-American Cancer Hospital Research Institute, Hyderabad, Drs. Swarnalata Gowrishankar og Umanath K Nayak av Apollo sykehus, Hyderabad, for deres hjelp i prøvetakingen. Vi takker Dr. Kumarasamy Thangaraj, Centre for Cellular Molecular Biology, Hyderabad, for innsamling av DNA-prøver av friske individer. RSRA og RP er registrerte doktorgradsstudenter fra Manipal University, Karnataka, India og University of Hyderabad, henholdsvis. RSRA og RP er takknemlig Universitetet Grants Commission (UGC), Govt. av India og indiske rådet for medisinsk forskning (ICMR), Govt. fra India, henholdsvis for junior og senior stipendiatstillinger.
