Abstract
Bakgrunn
Anaplastisk lymfom kinase product: (
ALK
) rearrangements definere en undergruppe av lungekreft som er kvalifisert til målrettet kinase hemming. Målet med denne studien er å observere forekomsten av ALK fusjon i en stor kohort av kinesiske fordøyelseskanalen kreftpasienter.
Pasienter og metoder
Tissue microarray (TMA) ble konstruert fra 808 fordøyelses kanalen krefttilfeller, inkludert 169 esophageal plateepitelkarsinom, 182 magekreft og 457 kolorektal kreft (CRC) tilfeller. Vi testet alle tilfeller for ALK uttrykk via et helautomatisk immunhistokjemi (IHC) analyse. De IHC-positive saker ble utsatt for fluorescens
in situ
hybridisering (FISH), real-time polymerase chain reaction (QRT-PCR), målrette genet berikelse og sekvensering for bekreftelse av
ALK
genet omorganisering og oppdagelse av nye fusjonspartneren.
Resultater
Blant de testede tilfeller 2 (0,44%) CRC tilfeller viste positiv både ved IHC og FISH. Ved QRT-PCR,
EML4-ALK
fusjon ble funnet i en IHC-positiv CRC saken. I en annen IHC-positive CRC fall målrette genet berikelse og sekvensering avslørt
ALK
ble smeltet til en ny partner,
spektrin beta non-erythrocytisk en product: (
SPTBN1
). En magekreft tilfellet viste delvis positive IHC resultat, men ingen fusjon ble funnet av fisk og gensekvensering.
Konklusjoner
Forekomsten av
ALK
genet fusjon i kinesisk CRC pasienter var 0,44%, men ikke påvises i mage og esophageal kreft. Romanen
SPTBN1 -Alk
fusjon, sammen med andre
ALK
fusion gener, kan bli et potensielt mål for anti-ALK terapi
Citation. Ying J, Lin C Wu J, Guo L, Qiu T, Ling Y, et al. (2015)
Anaplastisk lymfom Kinase
Omorganisering i fordøyelseskanalen kreft: Implikasjon for målrettet terapi i kinesiske befolkningen. PLoS ONE 10 (12): e0144731. doi: 10,1371 /journal.pone.0144731
Redaktør: Chandan Kumar-Sinha, University of Michigan, USA
mottatt: 6 oktober 2014; Godkjent: 23 november 2015; Publisert: 17.12.2015
Copyright: © 2015 Ying et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er i avisen og dens saksdokumenter filer
Finansiering:. Denne studien ble støttet med tilskudd fra Natural Basic Research program of China (973 program 2014CB542002) og Foundation National Natural Science of China (31470073), National Foundation Natural Science of China (81201967), Beijing Natural Science Foundation (7144238) og Beijing Nova Program (No. 2009A69). MyGenostics Inc., gitt støtte i form av lønn for forfatteren Jian Wu, men ikke har noen ekstra rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet. De spesifikke roller i denne forfatteren er formulert i § «forfatter bidrag «
Konkurrerende interesser. Jian Wu er ansatt i MyGenostics Inc. Det er ingen patenter, produkter under utvikling eller markedsført produkter å erklære. Dette endrer ikke forfatternes tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Anaplastisk lymfom kinase (ALK) ble først oppdaget som en fusjon genet med nucleophosmin i ikke -Hodgkin lymfom [1]. Dette genet koder for en reseptortyrosinkinase som hører til insulinreseptoren superfamilien. Siden den opprinnelige beskrivelsen i 1994, andre
ALK
gen forandringer har blitt videre rapportert i litteraturen, og dette genet har blitt funnet å omgjøres, mutert, eller forsterkes i flere typer av faste tumorer, så som inflammatorisk myofibroblastic svulst, lungekreft og tykktarmskreft (CRC) [2-4].
ALK
genet rearrangements er de vanligste genetiske endringer og vanligvis føre til overekspresjon av fusjonsproteiner [1-4]. I året 2006 ble fusjonsproteinet TPM4-ALK funnet å være uttrykt i esophageal plateepitelkarsinom [5]. Hittil har mer enn 20 forskjellige gener blitt beskrevet som translocated med
ALK plakater (S1 tabell). Til tross for forskjellen i krefttyper og fusjonspartnere,
ALK
rearrangements ofte føre til konstitutiv aktivering av ALK. JAK-Stat3, PI3K-AKT og RAS-MAPK trasé, som alle er involvert i celle spredning og overlevelse, kan aktiveres ved å
ALK
genet rearrangements gjennom ALK aktivering [6-8]. En preklinisk analyse av mer enn 600 cellelinjer viste at ALK-inhibitorer kunne redusere proliferasjonen av celler som bærer genetiske endringer i
ALK
, noe som tyder på rollen til ALK som et medikament target [9]. Klinisk ble ALK aktivering funnet å modulere respons til målrettede terapimidler og
ALK
rearrangements kan definere en undergruppe av solide svulster som er utsatt for målrettede kinase hemming. Et økende antall studier fokuserer på
ALK
rearrangements og crizotinib, en hemmer av ALK, c-Met og c-ros onkogen 1 (ROS1). I lungekreft, har crizotinib vist kliniske fordeler hos pasienter med
ALK
rearrangementer [10, 11]. Og det har blitt godkjent i USA, Korea og andre land for behandling av ALK-positive ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) [12].
CRC, magekreft (GC) og spiserøret plateepitelkarsinom (ESCC) er alle blant de viktigste årsakene til kreft-relaterte dødsfall på verdensbasis [13]. Individuell terapi blir stadig viktigere i disse fordøyelseskanalen svulster. Prediktive biomarkører påvirke valg av behandlingsstrategier.
KRAS Hotell og
BRAF
er to ofte oppdages gener for å lage individuell terapi i CRC. Cetuximab og panitumumab er to monoklonale antistoffer (MOAB) rettet mot epidermal vekstfaktor reseptor, og Bevacizumab er et MoAb rettet mot vaskulær endotelial vekstfaktor. I avansert esophagogastric kreft, kan trastuzumab forbedre den generelle overlevelsen av HER2-overuttrykk tilfeller [14]. For å identifisere ALK endringer i fordøyelseskanalen svulster, brukte vi en automatisert immunhistokjemi (IHC) analyse for å påvise ALK endringer. Det vil gi nye bevis til den potensielle rolle
ALK
genet trans i målrettet behandling for andre solide tumorer, i tillegg til lungekreft.
Materialer og metoder
Pasienter
Vi har registrert 169 ESCC, 182 GC og 457 CRC pasienter fra Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences (CAMS), Beijing, Kina, fra april 2006 til juli 2010. for alle tilfeller ESCC /GC /CRC diagnosen ble histologisk bekreftet. Tumor prøvene var formalinfiksert parafin-embedded (FFPE). Tissue microarray (TMA) blokkene ble bygget for å utføre IHC og fluorescens in situ hybridisering (FISH) som beskrevet tidligere [3]. For DNA /RNA-ekstraksjon fra FFPE-seksjoner, hematoxylin og eosin-farget (HE) deler av FFPE vev ble gjennomgått for hver prøve for å identifisere den delen med den høyeste tetthet tumor (minst 50% tumor-innhold). Denne studien ble godkjent av etikkomiteen, Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences Independent. Godkjenningsnummeret var NCC2012G-034. Alle fag hadde gitt skriftlig informert samtykke før undersøkelsen i samsvar med tilsyn med den lokale etikkutvalg.
Immunohistochemistry
Vi utførte IHC ved bruk av en helautomatisk IHC analyse som beskrevet før [3] . I korthet pre-utvannet Ventana anti-ALK (D5F3) Rabbit monoklonalt primært antistoff ble brukt sammen med Optiview DAB IHC deteksjon kit og Optiview Amplification kit på Benchmark XT Stainer. En matchet kanin monoklonalt negativ kontroll Ig antistoff ble også farget i hvert enkelt tilfelle. For å vurdere fargingsresultater, ble en binær scoring system vedtatt i henhold til produsentens scoring algoritme. Til tross for den prosentandelen av positive tumorceller, tilstedeværelse av sterke granulært, cytoplasmatisk farge i tumorceller viste seg å være positiv alk, mens fravær av sterk granulært, cytoplasmatisk farge var ALK negativ.
FISH
FISH-analyse ble utført med Vysis LSI ALK Dual farge, Break Apart Omorganisering Probe (Vysis /Abbott, Abbott Park, IL) i henhold til produsentens instruksjoner.
ALK sanntid polymerase chain reaction
Total RNA ble ekstrahert fra tumorvev til å gjenkjenne
EML4-ALK
fusion av real-time polymerase chain reaction (QRT-PCR) med AmoyDx
EML4-ALK
Fusion Gene Detection Kit (Amoy Diagnostics, Xiamen, Kina), i henhold til produsentens instruksjoner [3]. Det amplifiserte PCR-produktet ble underkastet direkte sekvensering, ved hjelp av AB3500xl DNA Sequencer (Applied Biosystems).
DNA og RNA isolering
Vi ekstraherte DNA og total RNA fra formalin-fiksert paraffin innleiret vev ved hjelp av QIAamp
® DNA Mini kit (Qiagen) og RNeasy FFPE kit (Qiagen) etter produsentens instruksjoner, henholdsvis.
DNA Bibliotek Forberedelse
Hver DNA-prøve er kvantifisert ved agarosegelelektroforese og Nanodrop (Thermo). Bibliotekene ble utarbeidet etter Illumina standard protokoll. I korte trekk, ble 3 mikrogram av genomisk DNA fragmentert ved forstøvning av det fragmenterte DNA blir reparert, er en «A» ligert til 3′-enden er Illumina adaptere deretter ligert til fragmentene, og prøven størrelsen valgt sikte på en 350 -400 basepar produkt. Størrelsen valgte produktet er PCR forsterket (hver prøve er merket med en entydig indeks under denne prosedyren), og det endelige produktet er godkjent for bruk av Agilent Bioanalyzer.
Målrettet gener berikelse og sekvense
amplifiserte DNA ble tatt med biotinylerte oligo-prober (MyGenostics GenCap berikelse teknologi). Probene ble utformet for å flis langs de ikke-gjentatte regioner av ALK-genet inneholdende alle eksoner og introner (chr2: 29.415.590 til 30.144.025). Fangst Forsøket ble utført i henhold til produsentens protokoll. I korte trekk, ble 1 ug DNA-bibliotek blandet med buffer BL og GenCap gen panel probe (MyGenostics, MD, USA), oppvarmet ved 95 ° C i 7 minutter og 65 ° C i 2 min på en PCR-maskin; 23μl av 65 ° C forvarmet buffer HY (MyGenostics, MD, USA) ble deretter tilsatt til blandingen, og blandingen ble holdt ved 65 ° C med PCR lokk varmes i 22 timer for hybridisering. 50 ul MyOne perler (Life Technology) ble vasket i 500 ul 1 x bindingsbuffer til 3 ganger og resuspendert i 80μl 1X bindingsbuffer. 64 ul 2X bindingsbuffer ble tilsatt til hybrid blanding, og overført til rør med 80μl MyOne perler. Blandingen ble rotert i en time på en rotator. Perlene ble deretter vasket med WB1 buffer ved romtemperatur i 15 minutter og en gang WB3-buffer ved 65 ° C i 15 minutter tre ganger. Den bundne DNA ble deretter eluert med buffer Elute. Den eluerte DNA ble endelig amplifisert i 15 sykluser ved bruk av følgende program: 98 ° C i 30 s (1 syklus); 98 ° C i 25 s, 65 ° C i 30 s, 72 ° C i 30 sekunder (15 sykluser); 72 ° C i 5 minutter (1 syklus). PCR-produktet ble renset ved anvendelse av SPRI kuler (Beckman Coulter) i henhold til produsentens protokoll. De berikelse bibliotekene ble sekvensert på Illumina HiSeq 2000 sequencer for paret lese 100bp.
Omvendt transcription- PCR (RT-PCR).
RT-PCR ble utført for å undersøke uttrykk for SPTBN1- ALK fusjonsgenet ved å bruke primere som følger, Forward: GTAAAACGACGGCCAGTTGCTCAGCTTGTACTCAGGG og bakover: GCACACTACAACCTGCAGAA. PCR-produktet ble ytterligere sekvensert av Sanger-sekvensering.
Bioinformatikk analyse
Vi utførte SV deteksjon ved hjelp parvise end sekvensdata. Sett størrelsesfordelingen ble hentet fra kartleggingsresultater med unimodale innsats størrelsesfordeling. Lese parene var nødvendig å ha en kartlegging kvalitet som er større enn 30 med et separasjonsavstanden overstiger 4 folder av standardavvik, eller være i en uventet orientering. Vi utførte de novo sammenstilling for alle spådd slettinger, innsettinger, inversjoner og trans bruker Phrap (https://www.phrap.org). SAMtools ble brukt til å trekke ut alle kartlagt leser innenfor 500-1000 bp av hver spådd stoppunkt. Kartlagt leser med vennene kartlegging til SV-regionen ble også inkludert. For Phrap forsamlingen, ble en Kmer størrelse på 25 og en minimal dekning av to brukes til å fjerne tips forårsaket av potensielle sekvense feil. I tillegg kunne en lese ikke har 5 eller flere bp av unaligned baser på sine ender. Leser støttet SV hvis lese krysset stoppunkt med minst 2 ekstra baser og lese ikke justere til referansesekvensen.
Resultater
ALK IHC og FISH
totalt 808 kreftpasienter ble inkludert i denne studien, inkludert 169 ESCC, 182 GC og 457 CRC pasienter. For ESCC, GC og CRC pasienter var gjennomsnittlig alder var 58 (range 33-78), 58 (range 24-79) og 61 (range 23-85), henholdsvis, og den mannlige i forhold til kvinner var 4,1: 1, 3,7 : 1 og 1,4: 1, respektivt. Alle tilfellene hadde resultatene evaluerbare IHC (S1 Fig). Ved hjelp av en Ventana IHC analysen ble ALK protein funnet å bli uttrykt i 2 (0,44%) pasienter med CRC. En GC pasienten var delvis IHC-positive, viser ALK cytoplasma immunoreaktivitets i en andel av kreftceller (tabell 1).
Case var en 56 år gammel kvinne med forhøyet carcinomaoppfinnelse-embryonale antigen (CEA) og karbohydrat antigen 19-9 (CA19-9). Hun ble diagnostisert med stigende tykktarmskreft og høyre colectomy ble utført. Den histologiske type av denne pasient var dårlig differensiert adenokarsinom. Svulsten invaderte gjennom muskularis propria inn pericolorectal fettvev. Regionale lymfeknuter var observert 5/21 positiv og vaskulær invasjon. Den pTNM scenen var pT3N2M0. Hun gikk bort 7 måneder etter operasjonen. IHC resultater for denne pasienten var positive (figur 1A, 1B og 1C), som viser cytoplasma immunoreaktivitets for ALK protein uttrykk
AB, Immunohistochemistry viste cytoplasma immunoreaktivitets for ALK protein uttrykk (A, 20 x, b., 200 ×). C, No immunoreaktivitets ble funnet i normalt vev (200 ×). D, fluorescens in situ hybridisering (FISH) utført med Vysis LSI ALK tofarget Break-Apart FISH prober oppdaget
ALK
fusjon som splittet røde og grønne signaler (piler) (1000 ×).
case to var en 62 år gammel mann med normal CEA og CA19-9 nivå. Han ble også diagnostisert med stigende tykktarmskreft og gjennomgikk en riktig colectomy. Patologisk resultat viste moderat differensiert karsinom uten regional lymfeknutemetastase og vaskulær invasjon. Den pTNM scenen var pT3N0M0. Han fikk 10 runder med kjemoterapi (fluorouracil pluss leukovorin og oksaliplatin). Ingen gjentakelse av tykktarmskreft ble observert i 5 års oppfølging. IHC resultatene var positive for ALK protein uttrykk (Fig 2A og 2B)
A-B, Immunohistochemistry viste cytoplasma immunoreaktivitets for ALK protein uttrykk. (A, 20 ×, B, 200 ×). C, fluorescens in situ hybridisering (FISH) utført med Vysis LSI ALK tofarget Break-Apart FISH prober oppdaget
ALK
fusjon som splittet røde og grønne signaler (piler) (1000 ×). D, Real-time PCR påvisning av
EML4 Anmeldelser –
ALK
fusjoner. Graf fra sanntids-PCR viste endring i den normaliserte rapportørsignalet (delta Rn) mot PCR-syklusnummer. Den grå kurven står for intern kontroll og den blå kurven står for EML4-ALK fusjon.
Case tre var en 72 år gammel kvinne. Hun ble diagnostisert med magekreft. Postoperativ histologisk diagnose var dårlig differensiert adenokarsinom med nevroendokrin differensiering. Regionale lymfeknuter var involvert. Hun gikk bort 4 måneder etter operasjonen. IHC resultat av denne pasient var delvis positive (figur 3A, 3B og 3C), som viser cytoplasmatisk immunreaktivitet for ALK protein ekspresjon i kreftceller med neuroendokrin differensiering.
A, Immunhistokjemi viste cytoplasmatisk immunoreaktivitet for ALK protein ekspresjon i en andel av kreft celler (20 ×). B-C, ALK protein ble bare uttrykt i tumorceller med nevroendokrine differensiering, men ikke uttrykt i adenokarsinom-celler, noe som indikerer heterogenitet intratumoral (A, 20 x; B, 200 x). D, fluorescens in situ hybridisering (FISH) utført med Vysis LSI ALK Dual farge Break-Apart FISH prober viste FISH-negative resultat som intakte smeltet signaler. (1000 ×).
Av de tre IHC-positive tilfeller, de to CRC tilfeller demonstrert FISH mønstre av
ALK
omorganisering, med hovedsakelig isolert 3 «og 5» ALK-signaler ( figurene 1D og 2C). GC saken viste en FISH-negativt resultat, med intakte smeltet signaler (Fig 3D).
QRT-PCR
Vi hentet total RNA fra alle tre tilfellene. AmoyDx EML4-ALK Fusion Gene Detection Kit ble brukt til å utføre QRT-PCR. Resultatene viste at bare én CRC saken (Sak to) hadde
EML4-ALK
genet omorganisering (variant 1) (figur 2D). RT-PCR produktene ble bekreftet av Sanger-sekvensering (data ikke vist).
Målrettet gensekvensering
Vi isolert genomisk DNA fra IHC-positive CRC tilfelle en og GC tilfelle for målrettet genet berikelse og sekvensering. I CRC fall en som er både IHC og FISH positiv, identifiserte vi en roman
ALK
fusjonspartner,
spektrin beta non-erythrocytisk en product: (
SPTBN1
). Det ble smeltet i 18-19 intron av
ALK Hotell og 6-7 intron av
SPTBN1 plakater (figur 4). Uttrykk for
SPTBN1-ALK
fusjon ble oppdaget av RT-PCR, og bekreftet ved direkte sekvensering (figur 4). I GC sak som er delvis IHC-positive og FISH-negativ, viste gensekvensering resultat ingen
ALK
omorganisering. Ingen mutasjon ble funnet i alle eksoner og introner av
ALK
i begge tilfeller.
A, målrettet sekvensering analyse viste en roman fusjonsgenet
SPTBN1-ALK
som skapt av invertion mellom to svake punktene i intron 7 av
SPTBN1
genet og intron 19 av
ALK
genet. Sanger-sekvensering av revers transkripsjon-PCR produkt bekreftet fusjon av
SPTBN1-ALK
genet, som viste i nedre panel. B, Funksjonell domene analyse av SPTBN1, ALK, og SPTBN1-ALK fusjonsproteinsekvenser. ALK, anaplastisk lymfom kinase; SPTBN1, spektrin, beta, ikke-erythrocytisk 1; CH, calponin homologi domene; PH, pleckstrin homologi domene; TM, transmembrane domene.
Diskusjoner
I vår forrige undersøkelse, utførte vi en ny helautomatisk IHC analyse ved hjelp av en pre-utvannet Ventana anti-ALK (D5F3) Rabbit monoklonalt primært antistoff sammen med Optiview DAB deteksjon og forsterkning kit. Denne metoden viste høy sensitivitet og spesifisitet på 100% og 98% henholdsvis, for å detektere
ALK
omleiring i primær lunge adenokarsinom [3]. Å observere forekomsten av ALK fusjon i andre typer solide tumorer, som kan være kvalifisert til målrettede kinase hemming, brukte vi den automatiserte IHC-analysen og kombinert det med fisk, QRT-PCR, målrettet genet berikelse og sekvensering for påvisning av
ALK
omorganisering i fordøyelseskanalen svulster. Resultatene av IHC var ofte i samsvar med de av fisk og gensekvensering. De to IHC-positive tilfeller av CRC ble også FISH-positiv. For tilfellet en,
ALK
omorganisering ble bekreftet av genet sekvensering og en roman fusjonspartner,
SPTBN1
, ble oppdaget. For tilfellet to, QRT-PCR resultatet viste
EML4-ALK
genet fusjon. GC sak som var delvis positive ved IHC var FISH negativ. Den positive signal ble plassert bare i den neuroendokrine tumorceller som finnes i denne GC prøven. Focal ALK IHC positivitet med heterogen intensitet har blitt observert uten
ALK
genet endring i lunge nevroendokrin kreft [15]. Den avvikende uttrykk er mest sannsynlig forårsaket av en villtype ALK.
Stransky et al beskrev landskapet kinase fusjoner i kreft, inkludert ALK endringer. Nesten 1% lungekreft næret kjente ALK fusjoner, mens i fordøyelseskanalen kreft, fusjon hastigheten var relativt lav (0,15%, 1/662). En ALK fusjonsgenet ble funnet i endetarmskreft, med SMEK2 som en ny fusjonspartner [16]. Ved hjelp av FISH eller gensekvensering har nyere studier også rapportert Genfusjonene involverer
ALK
i CRC, men med en svært lav forekomst av 0,8% og 2,5% [2, 17]. Hyppigheten av
ALK
fusjoner er lavere i CRC fra kinesiske befolkningen. Det er kjent at forskjeller i genetiske og miljømessige faktorer er assosiert med ulike tilfeller av gastrointestinale kreftformer, inkludert magekreft, spiserørskreft og tykktarmskreft. Mutagen eksponering fører til ulike mutasjonsmønstre enkle basis erstatninger. Det er mulig at
ALK
fusion frekvens er også assosiert med mat spekteret og potensielle mutagener i ulike populasjoner. I NSCLC,
ALK
Genfusjonene har en relativt høy forekomst, med echinoderm microtubule-assosiert protein-lignende 4 (EML4) som en dominerende fusjonspartner; Dermed er det rimelig å bruke RT-PCR og FISH som rutinemessig screening metoder for genetisk diagnose. I kontrast, ALK genet fusjonspartnere er mangfoldig i CRC; derfor, er RT-PCR ikke egnet for screening, som nye ALK fusjonspartnere ikke ville bli oppdaget. På den annen side, på grunn av den lave forekomsten, ved hjelp av FISH som en rutinediagnostikk metode ikke er økonomisk rasjonell. Motsatt er IHC økonomisk og effektiv for å avdekke
ALK
genet fusjon i CRC. Det viste seg å være en potensiell screening-metoden, som er etterfulgt av FISH, QRT-PCR og sekvensering genet verifisering. CRC er en av de vanligste kreftformene verden over, utnytte denne prosessen for å definere
ALK
gen-endret undergruppe vil dra et stort antall pasienter med CRC.
Fordi molekylær målrettet terapi er effektiv og godt tolerert, blir det stadig viktigere [18-20]. Samler studier har vært fokusert på diagnostiske metoder for genetisk definere undergrupper av pasienter som er egnet for målrettet terapi. I CRC,
KRAS
mutasjonsstatus er ansatt for å utelukke en undergruppe av pasienter fra anti-epitelial vekstfaktor reseptor (anti-EGFR) terapi [21]. Med hensyn til
ALK
genet, kan dens endring forutsi en god respons på crizotinib terapi hos NSCLC [11]. Hos pasienter som ALK rearrangementer, ble crizotinib funnet å være overlegne i forhold til standard kjemoterapi [22]. Selv crizotinib er i utgangspunktet godkjent som en målrettet terapi for NSCLC, en studie med fokus på inflammatoriske myofibroblastic svulster rapporterte et delvis svar på det hos en pasient med
ALK
trans, mens det var ingen observert aktivitet i en annen pasient uten trans [23]. Det er også en fase 1b enarmet studie om crizotinib terapi hos pasienter med ALK-positive ikke-NSCLC tumorer (NCT01121588). Crizotinib var også i stand til å hemme proliferasjon og ALK-mediert signalisering i en neuroblastom-cellelinje [9]. Disse funnene alle tyder på at crizotinib er en potensiell behandling for genetisk identifisert pasienter med
ALK
endringer i andre solide svulster enn NSCLC.
Vi identifiserte en roman
ALK
fusjonspartner
SPTBN1
. I likhet med
ALK
genet,
SPTBN1
ligger også på menneskets kromosom 2 [24]. Dette genet koder for et 247-kDa cytoskeletal protein [25]. Den danner heterodimerer betegnes spectrins med a-spectrins via antispiral forening [26]. SPTBN1 kan binde seg til membranfosfolipider [27]. I faste tumorer, spiller SPTBN1 en viktig rolle i å stabilisere celle-til-celle og celle-til-matrise-adhesjon [28]. Spektrin dimerer knytte plasmamembranen til aktin cytoskjelettet, for derved å bestemme celleform og organisering av organeller.
SPTBN1
Genfusjonene er rapportert hos atypiske myeloproliferative sykdommer (MPDS) og atypisk kronisk myelogen leukemi [29, 30]. I ett tilfelle MPDS,
SPTBN1
ble fusjonert til blodplate-avledet vekstfaktor-reseptor-beta-genet (PDGFRB), et medlem av den type III reseptor-tyrosin-kinase-familien. Pasientens beinmargsTestResultatene viste morfologisk og molekylær remisjon etter 6 måneder med imatinib mesylate terapi [29].
Så vidt vi vet,
SPTBN1-ALK
fusjonsgenet har ikke blitt rapportert i kreft tidligere. Denne blanding kan føre til konstitutiv aktivering av ALK som i det MPDS tilfelle som er nevnt ovenfor, noe som kan føre til pasientens nytte av crizotinib terapi, selv om ytterligere funksjonelle undersøkelser av dette nye fusjons er warrented.
SPTBN1-ALK
, sammen med andre
ALK
fusion gener, kan bli et potensielt mål for crizotinib terapi. Fremtidige studier bør betale mer oppmerksomhet til
ALK
genet endringer i solide svulster i tillegg til lungekreft.
Hjelpemiddel informasjon
S1 Fig. Immunhistokjemi (IHC) påvisning av avvikende Anaplastisk lymfom kinase (ALK) uttrykk
doi:. 10,1371 /journal.pone.0144731.s001 plakater (TIF)
S1 Table. ALK fusjoner i annen krefttype
doi:. 10,1371 /journal.pone.0144731.s002 plakater (DOC)
Takk
Denne studien ble støttet med tilskudd fra Natural Basic Research program of China (973 program 2014CB542002) og Natural Science Foundation National of China (31470073), National Natural Science Foundation of China (81201967), Beijing Natural Science Foundation (7.144.238) og Beijing Nova program (No. 2009A69).
