Abstract
Mål
For å undersøke effekten av CCL21 /CCR7 på spredning, migrasjon og invasjon av T24 celler og mulige tilhørende mekanismer:. uttrykk av MMP-2 og MMP-9, og regulering av BCL-2 og BAX proteiner
Metoder
T24 celler mottatt tilsvarende behandlinger herunder bærerkontroll,-antistoff (20 ng /ml CCR7 antistoff og 50 ng /ml CCL21), og 50, 100 og 200 ng /ml CCL21. Proliferasjon ble bedømt ved MTT-assay; celle migrasjon og invasjon ble analysert ved hjelp av en transwell kammer. Celle apoptose ble indusert ved adriamycin (ADM). Frekvensen av celle apoptose ble undersøkt ved strømningscytometri ved bruk av annexin V-FITC /PI farging. Western-blot ble brukt til å analysere MMP-2 og MMP-9 og BCL-2 og BAX proteiner.
Resultater
CCL21 fremmet T24 celleproliferasjon i konsentrasjonsavhengig måte med at 200 ng /ml indusert den største mengden av spredning. Betydelige forskjeller i cellemigrasjon ble funnet mellom CCL21treatment grupper og kontrollgruppen i både migrasjon og invasjon studier (P 0,001 for alle). Uttrykkene av MMP-2 og MMP-9-proteinene ble signifikant økt etter CCL21 behandling (p 0,05 for alle). Protein ekspresjon av Bcl-21 følger en stigende tendens, mens ekspresjonen av Bax følger en nedadgående trend som konsentrasjonen av CCL21 øker. Ingen forskjell ble funnet mellom kontrollgruppen og antistoff gruppe for alle vurderinger.
Konklusjon
CCL21 /CCR7 fremmet T24 celleproliferasjon og forbedret sin migrasjon og invasjon via økt uttrykk av MMP-2 og MMP-9. CCL21 /CCR7 hadde antiapoptotic aktiviteter på T24 celler via regulering av Bcl-2 og Bax proteiner. CCL21 /CCR7 kan fremme blærekreft utvikling og metastase
Citation. Mo M, Zhou M, Wang L, Qi L, Zhou K, Liu L-F, et al. (2015) CCL21 /CCR7 Forbedrer spredning, migrasjon og invasjon av menneskelige blærekreft T24 celler. PLoS ONE 10 (3): e0119506. doi: 10,1371 /journal.pone.0119506
Academic Redaktør: Rajesh Mohanraj, Det medisinske fakultet Helsefag, Forente Arabiske Emirater
mottatt: 14 oktober 2014; Godkjent: 13 januar 2015; Publisert: 23 mars 2015
Copyright: © 2015 Mo et al. Dette er en åpen tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Data Tilgjengelighet: All relevant data er innenfor papir
finansiering:.. forfatterne fikk ingen spesifikke midler til dette arbeidet
konkurrerende interesser:. forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
Blærekreft er en av de mest vanlige typer voksen kreft. I 2008 alene, ble 386,000 pasienter diagnostisert med blærekreft som resulterte i 150,200 dødsfall i verden basert på global statistikk [1]. Metastase er ikke bare et kjennetegn på blærekreft, men også årsaken til dødelighet [1]. Men patofysiologien av blærekreft metastaser er fortsatt uklart. Kjemokiner, en superfamilie av små utskilt peptider som kjennetegnes ved deres evne til å indusere leukocyttmigrering, sammen med deres reseptorer har blitt funnet å være involvert i migrasjon av celler av lymfoid-systemet, og således kan påvirke kreftutvikling og progresjon [2-4]. CCL21, en viktig chemokine av CCL-familien, er en av bare to ligander (den andre er CCL19) for CCR7. [5] CCL21 er produsert av fibrinoblast retikulære celler av T-celle-rikt område i human og høye endoteliale venyler i mus. [6] CCR7 uttrykkes ved hjelp av forskjellige typer av lymfocytter, inkludert naive B og T-celler, semimature og modne dendrittiske celler og T regulatoriske celler [5]. I tillegg har uttrykk for CCR7 blitt rapportert å fremme kreftcelle spredning til lymfeknuter i nonsmall celle lungekreft [7], brystkreft [8], plateepitelkarsinom i hode og hals kreft [9], tykktarmskreft [10] , prostata kreft [11], esophageal plateepitelkreft [12] og magekreft [13]. Derfor kan CCR7 og dets ligand (er) deltar i proliferasjon, progresjon, og metastase av kreftceller av forskjellige organ opprinnelse [7-13]. Vi fant også at CCR7 var involvert i utvikling og progresjon av blærekreft (upubliserte data).
Fysiologisk CCL21 /CCR7 spiller viktige roller i homing av immunceller, lymfe-node homing og posisjonering, immunitet og perifer toleranse, utvikling og funksjon av T-regulatoriske celler, og autoimmunitet og lymfoid neogensis [5]. Ulike studier har bekreftet roller CCL21 /CCR7 i tumor utvikling og progresjon [14-17]. For eksempel, CCL21 /CCR7 fremmer G2 /M fase progresjon og forhindrer apoptose via ERK-reaksjonsveien i human ikke-småcellet lungekreft [15, 16], muliggjør utviklingen av kreft i bukspyttkjertelen via induksjon av angiogenese og lymphangiogenesis [14], regulerer matrise-metalloproteinase-9 (MMP-9) i human kolonkreft metastase [18], og oppregulerer MMP-9 i B-celle kronisk lymfatisk leukemi cellemigrering og invasjon [17]. Videre CCL21 /CCR7 ble også funnet å fremme kreftcellemigrering inn i microlymphatic fartøy i brystkreft [19], bukspyttkjerteltumor [20], lunge adenokarsinom [21], og spiserøret squamous cell carcinoma [22]. Men hvilken rolle CCL21 /CCR7 i blærekreft utvikling og progresjon er fortsatt uklart. T24 celler er hentet fra overgangsordning celle carcinoma av menneskelig urinblæren og har vært mye benyttet for studiet av blærekreft [23].
Formålet med denne studien var å undersøke effekten av CCL21 /CCR7 på spredning, migrasjon og invasjon av T24 celler og mulige tilhørende mekanismer. uttrykk av MMP-2 og MMP-9, og regulering av BCL-2 og BAX proteiner
Materialer og metoder
denne studien innhentet etikk godkjenning fra etisk komité ved Xiangya Hospital, Central South University, Changsha, Hunan-provinsen i Kina.
Reagenser og cellelinje
CCL21 rekombinant humant protein ble kjøpt fra Perprotech (Rocky Hill, NJ, USA) og polyklonale kanin anti-human CCR7 antistoff ble kjøpt fra Wuhan BOOSTER Biological Engineering Co Ltd (Wuhan, Kina). Proteasehemmer fenylmetylsulfonylfluorid (PMSF) ble kjøpt fra Roche Diagnostics (Indianapolis, Indiana, USA). MTT og Dimetylsulfoksid (DMSO) ble kjøpt fra Hufeng Chemical Co., Ltd (Shanghai, Kina). Annexin V-FITC apoptose deteksjon kit ble kjøpt fra Beyotime Bioteknologi (Shanghai, Kina).
Den menneskelige blærekreft T24 cellelinje ble kjøpt fra Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina ). Cellene ble dyrket ved 37 ° C, 5% CO
2, i medium DMEM (Gibco, USA) inneholdende 10% føtalt bovint serum, 100 U /mL penicillin og 100 U /mL streptomycin.
Cellekultur kultur~~POS=HEADCOMP og behandling
T24-celler ble behandlet i 48 timer før MTT-analysen, migrering og invasjon analyser, og Western blot-analyse, og 24 timer før flowcytometri studien. For hvert forsøk var det fem grupper bestående av gruppe 1 (kontrollgruppe), som ble behandlet med serumfritt DMEM-medium, Gruppe 2 (antistoff-gruppen) som først mottok forbehandling med 20 ng /ml polyklonalt kanin anti-humant CCR7 antistoff for fire h etterfulgt av 50 ng /ml CCL21, gruppe 3 som mottok 50 ng /ml CCL21, gruppe 4 som mottok 100 ng /ml av CCL21, og gruppe 5 som mottok 200 ng /ml CCL21. Forsøkene av MTT-analysen, flowcytometri, og Western blot ble gjentatt tre ganger (n = 3), og cellevandring og invasjon ble gjentatt fire ganger (n = 4).
MTT-analysen for spredning av T24 celler
spredning av T24 celler ble evaluert av MTT-analyse. I korte trekk ble celler behandlet tilsvarende i hver gruppe i 48 timer. Etter behandling, ble mediet fjernet og cellene ble inkubert med 5 mg /ml MTT-oppløsning (20 ul). Etter inkubering i 4 timer ved 37 ° C og 5% CO2, ble supernatanten fjernet og dannelse av formazan ble målt ved 490 nm med gel Dokumentasjon bety celle nummer ble beregnet for hver gruppe.
Flowcytometri for apoptose
Cell apoptose ble indusert av Adiamycin (ADM). Frekvensen av apoptose av T24-celler ble undersøkt ved hjelp av strømningscytometri annexin V-FITC /PI farging. I korthet, T24 cellene behandlet som ovenfor i hver gruppe i 24 timer; Cellene ble deretter inkubert med ADM (0,1 mg /ml) i ytterligere 48 timer. Deretter ble cellene høstet, vasket og resuspendert i PBS. Apoptotisk celledød ble målt ved å dobbeltfarging annexin V-FITC og PI bruker annexin V-FITC apoptose deteksjon kit (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Kina) i henhold til produsentens instruksjoner. Strømningscytometrisk analyse ble utført umiddelbart etter farging. Datainnsamling og analyse ble utført ved strømningscytometri ved å bruke Cell quest programvaren.
Western blot-analyse
T24-celler ble anbrakt i 75 ml kulturampuller og ble inkubert ved 37 ° C i 24 timer og deretter behandlet tilsvarende i hver gruppe i 48 timer inkubasjon. Suspensjoner ble vasket med kald PBS. Cellene ble deretter inkubert i is-kald RIPA-buffer [1 M Tris (pH 7,4), 5 M NaCl, 0,5 M EDTA (pH 8,0), 10% SDS, 10% DOS, og 10% NP40] med frisk proteasehemmer PMSF over is i 20 min. Cellene ble skrapet og lysatet ble oppsamlet i en Eppendorff rør og sentrifugert ved 10000 rpm ved 4 ° C i 10 minutter, og supernatantene ble samlet opp, alikvotert og lagret ved -20 ° C for fremtidig bruk.
Fortynninger av BCL-2 /BAX (12%) og MMP-2 /MMP-9 (7,5%) ble anvendt for undersøkelsen. Proteiner (20 ug) ble lastet inn i 5-15% SDS-PAGE-geler og overført på en nitrocellulosemembran (Amersham Biosciences, USA). Membranene ble fuktet i blokkeringsbuffer (5% skummet melk) ved romtemperatur i 2 timer. Blottene ble vasket med PBS (med 0,1% BSA). For å undersøke med hensyn til MMP-2, MMP-9, BCL-2, Bax, og β-aktin, ble membranene inkubert i 2 timer ved romtemperatur med relevante antistoffer, etterfulgt av HRP-konjugert egnede sekundære antistoffer og ECL påvisning. Gel Dokumentasjon Analysis System satt (Liuyi Factory, Beijing, Kina) ble brukt for bildefangst og analyse av optisk tetthet (OD) verdier (490 nm).
Statistisk analyse
Statistisk analyse ble utført ved hjelp av SPSS 18,0 statistisk programvare. Kvantitative data ble uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Én-veis analyse av varians med Fishers LSD test ble anvendt for gruppesammenligninger. Signifikansnivået ble satt til p-verdi mindre enn 0,05.
Resultater
Effekter av CCL21 /CCR7 på spredning av T24 celler
Effektene av CCL21 /CCR7 på T24-celler som representert ved OD-verdier er presentert i Tabell 1. OD-verdier var 0,211 ± 0,013 i kontrollgruppen, 0,216 ± 0,011 i antistoffgruppen (p 0,05 sammenlignet med kontroll), 0,248 ± 0,006 i 50 ng /ml CCRL21 (P 0,05 sammenlignet med kontroll), 0,290 ± 0,004 til 100 ng /ml CCRL21 (P 0,01 sammenlignet med kontroll), og 0,341 ± 0,012 til 200 ng /ml av CCRL21 (P 0,001 så sammenlignet med kontrollgruppen). CCL21 fremmet T24 celleproliferasjon i konsentrasjonsavhengig måte med 200 ng /ml indusert den største mengden av spredning.
Effekter av CCL21 /CCR7 på migrasjon og invasjon av T24 celler
resultatene av CCL21 /CCR7 på migrering og invasjon av T24-celler er presentert i fig. 1. Celletall for migrering og invasjon studier er som følgende: 45,5 ± 11,6 og 28,6 ± 15,0 for kontrollgruppen, 42,5 ± 13,6 og 30,5 ± 15,2 for antistoffet gruppen, 72,9 ± 22,4 og 55,5 ± 13,6 til 100 ng CCRL21 /ml-gruppen, 115,7 ± 18,8 og 102,1 ± 18,0 for CCRL21 150 ng /ml-gruppen, og 178,9 ± 8,4 og 143,7 ± 24,4 for CCRL21 200 ng /ml-gruppen. Signifikante forskjeller i cellemigrering ble funnet mellom hver av de tre gruppene CCL21treatment og kontrollgruppen i både migrasjon og invasjons studier (P 0,001 for alle); men ingen forskjell ble funnet mellom kontrollgruppen og antistoffet gruppe i enten migrasjonsstudie eller invasjon studien (P 0,05 for begge). Effekten av CCL21 /CCR7 behandling på T24 cellemigrering er konsentrasjonsavhengig med den høyeste konsentrasjon av CCL21 (200 ng /ml) ga det største antall av celler av migrasjon /invasjon. Generelt ble mindre antall T24 celler funnet i invasjonen studie enn den for den tilsvarende migrasjonsstudie.
Analysen ble utført ved anvendelse av et transwell kammer belagt med 30 ul av Matrigel blanding oppløsning med fem forskjellige grupper bestående av bærerkontroll, CCR7 antistoff 20 ng /ml pluss CCL21 50 ng /ml, CCL21 50 ng /ml, CCL21 100 ng /ml, og CCL21 200 ng /ml. Dataene nåværende Mean ± SD fra fire uavhengige forsøk.
Effekter av CCL21 /CCR7 på uttrykk for MMP-2 og MMP-9 i T24 celler
Western blot resultatene er presentert i fig. 2; kvantitative målinger av MMP-2 og MMP-9 er vist i tabell 2. Betydelige forskjeller ble funnet i uttrykket av MMP-2 og MMP-9 blant de fem gruppene (p 0,05). Sammenlignet med kontrollgruppen, ble uttrykk for MMP-2 og MMP-9-proteiner signifikant økt etter tre forskjellige konsentrasjoner av CCL21 behandling (p 0,05 for alle). Imidlertid, ingen forskjell ble funnet i MMP-2 eller MMP-9 mellom kontrollgruppen og den antistoff-gruppen (p 0,05 for begge)
Felt 1:. T24 celler behandlet med vehikkel-kontroll; Felt 2: T24 celler behandlet med CCR7 antistoffer 20 ng /ml pluss CCL21 50 ng /ml; Felt 3: T24 celler behandlet med 50 ng /ml CCL21; Felt 4: T24-celler behandlet med 100 ng /ml CCL21; og felt 5: T24-celler behandlet med 200 ng /ml CCL21. Cellelysater ble fremstilt og kjørt på 5-15% SDS-PAGE-geler etter av en Western blot-analyse. Beta-aktin ble benyttet som en kontroll lasting. Blottene som vises er representative for tre uavhengige eksperimenter.
Effekter av CCL21 /CCR7 på apoptose i T24 celler
Effekter av CCL21 /CCR7 på uttrykk for BCL-2 og Bax ved Western blot er presentert i fig. 2 og OD-verdiene er presentert i fig. 3. Protein ekspresjon av Bcl-21 følger en stigende tendens, mens ekspresjonen av Bax følger en nedadgående trend som konsentrasjonen av CCL21 øker. Signifikante forskjeller ble funnet i uttrykket av Bcl-2 og Bax mellom CCL21 50 ng /ml-gruppen og CCL21 100 ng /ml (p 0,05 for begge), og mellom CCL21 50 ng /ml-gruppen og CCL21 200 ng /ml (p 0,05 for begge).
T24-celler ble behandlet med bærerkontroll, CCR7 antistoff 20 ng /ml pluss CCL21 50 ng /ml, CCL21 50 ng /ml, CCL21 100 ng /ml, og CCL21 200 ng /ml. Verdiene (OD) til stede Mean ± SD fra tre uavhengige eksperimenter.
Tidlig og sent apoptose priser og totale celle dødelighet etter behandlinger er presentert i tabell 3. Satsene for tidlig apoptose, sent apoptose og totalt celle dødelighet i kontrollgruppen er 26,4 ± 5,0%, 37,5 ± 2,4%, og 63,9 ± 7,1%, henholdsvis; mens i antistoffgruppen er 25,2 ± 3,8%, 35,6 ± 5,5% og 60,8 ± 9,3%, henholdsvis. Ingen forskjell i apoptose priser ble funnet i hvert trinn mellom de to gruppene (p 0,05 for alle). Satsene for tidlig apoptose, sent apoptose og total celledød droppet etter CCL21 behandlinger på 50, 100 og 200 ng /ml. Sammenlignet med kontrollgruppen, ble betydelig nedgang i total celle apoptose funnet i CCL21 behandlingsgruppene (p 0,001 for alle tre behandlingsgruppene); Det ble imidlertid ikke funnet signifikant forskjell mellom de tre behandlingsgruppene CCL21 i total celle apoptose (p 0,05 for alle). Sammenlignet med kontrollgruppen, ble signifikante reduksjoner også funnet i tidlig celle apoptose i CCL21 behandlingsgrupper (p = 0,008 til 200 ng /ml, 0,001 til 100 ng /ml, og 0,027 til 50 ng /ml); Men, igjen, ingen signifikant forskjell ble funnet mellom de tre CCL21 behandlingsgruppene i tidlig apoptose (p 0,05 for alle).
Diskusjoner
Den potensielle kreftceller til metastaserer avhenger av dets interaksjon med homeostatiske faktorer, inkludert chemokiner som ikke bare fremmer kreft celle vekst og overlevelse, men også migrasjon og invasjon eller metastase. Tidligere studier har vist at kjemokiner som er involvert i utviklingen og metastasering av ulike kreftformer [2, 4, 5]. CCR7 er involvert i kreftmetastaser til lymfeknuter i ulike kreftformer [7-13]. CCL21 deltar i proliferasjon av CD4 T-celler, nyre mesangialceller og forskjellige kreftceller [19, 24-27]. Vår undersøkelse demonstrerte for første som CCL21 /CCR7 kunne øke T24 celleformering (tabell 1), migrering og invasjon (fig. 1).
kjemokin konsentrasjon kan være i det minste delvis ansvarlig for kreftutvikling og metastase [ ,,,0],19, 26]. Som et resultat har vi brukt tre forskjellige konsentrasjoner av CCL21 i den foreliggende undersøkelse, og funnet en konsentrasjonsavhengig måte i CCL21 virkninger på T24 celleformering, migrering og invasjon. CCL21 kan sterkt øke T24 celle migrasjon og invasjon ved høye konsentrasjoner, og dermed legge til rette for blærekreft metastasering. Våre funn er i samsvar med disse tidligere rapporter.
Samspillet av kjemokiner og deres reseptorer tjene som grunnlag for svulst cellemotilitet og migrasjon via utløser intracellulær aktin polymerisasjon å skape pseudopodia [28, 29]. Muller et al fant at CCL21 AT100 nM induserte en transient 1,6-gangers økning i intracellulært flamentous aktin (F-aktin) i humane brystcancerceller i løpet av 20 sekunder og observert tydelig pseudopodia dannelse etter 20 min på stimulering med CCL21 [19]. Resultatene av denne studien med T24 celle migrasjon og invasjon er consistent0020with disse tidligere rapporter. Det ble ikke observert signifikant reduksjon i celletall T24 da CCR7 antistoff ble anvendt sammen med CCL21, og det indikerer at effekten av CCL21, avhenger av aktiviteten til CCR7. På den andre ord, kan CCL21 aktivere CCR7 først og deretter påvirke T24 celle migrasjon og invasjon.
Molekyler som chemokine CCL21 er involvert i metastasering av kreft ikke bare via medier migrasjon og invasjon av kreftceller i vev, men også gi de nødvendige støttende microenvironments. In vivo, blir migrering av kreftceller ofte bremset med mange motstander, slik som basalmembran og omgivende bindevev [29, 30]. Derfor, for å etterligne virkelige in vivo tilstand, benyttet vi transwell kammeret belagt med matrigel som en fysisk barriere for denne studien. MMP-2 og MMP-9 er to proteiner som er nært forbundet med blærekreft metastase [31-33]. Kreftcelle invasjon kan kreve utskillelsen av MMP’er slik som MMP-2 og MMP-9 for å nedbryte den matrigel. I foreliggende studie har vi funnet at CCL21 kan øke ekspresjonen av MMP-2 og MMP-9 og således forbedre celle invasjon (fig. 2 og tabell 2). MMP spiller viktige roller i kreftcelle invasjon; men andre faktorer som interleukiner og E-cadherin kan også bidra til tumorprogresjon og invasjon [34-37]. Ikke desto mindre, CCL21 /CCR7 kan lette kreftcelle invasjon via økende MMP sekresjon og styrke cellemotilitet.
Ved hjelp av radiomerket teknikker, har forskere funnet bare en liten del av radiomerket kreftceller i microcirculations har potensial til å metastasere [38] . Overlevelse av kreftceller avhenger av deres antiapoptotic evner. Når kreftceller forlate sine opprinnelige vev, vil de miste noen hvis ikke alle de homeostatiske faktorer som inkluderer chemokiner for heft og støtte; således at cellene er utsatt for apoptose. I denne studien ble det antiapoptotic evne CCL21 inT24 celler undersøkt ved hjelp av flowcytometri ved annexin V-FITC /PI farging via ADM indusert apoptose. Fosfatidylserin (PS), kan spesifikt binde annexin-V. PI, en nukleær farging middel, ikke kan krysse normal cellemembran. I den tidlige fase av apoptose, kan PI nukleær farging ikke bli detektert som cellemembranen er intakt. Men som celle gjennomgår apoptose i midten sene faser, cellemembran blebs og ikke lenger er intakt; således kjerne kan oppdages gjennom PI farging
Resultatet av flowcytometri kan deles inn i fire kvadranter. den nedre venstre kvadrant med normale levende celler [Annexin V-(-), PI (-)], den øvre høyre kvadrant [Annexin-V (+), PI (+)] med sen apoptotiske eller nekrotiske celler, den nedre høyre kvadrant [Annexin-V (+), PI (-)] med begynnelsen av apoptotiske celler, og det øvre venstre kvadrant [Annexin V-(-), PI (+)] med små porsjoner av celleavfall på grunn av mekanisk skade og apoptose. Således analyse av apoptose avhenger hovedsakelig av tidlig apoptose (nedre høyre kvadrant) og total celledød (øverst til høyre + nedre høyre kvadranter) i den foreliggende undersøkelse. Våre resultater viste betydelig reduksjon av apoptose og celledød med CCL21 behandling sammenlignet med kontrollgruppen (p 0,01); Det ble imidlertid ikke forskjellen mellom CCR7 antistoff pluss CCL21 behandling og kontroll funnet (p 0,05). Resultatene indikerer at CCR7 antistoff kunne motvirke effekten av CCL21 på apoptose og celledød og således bekrefte antiapoptotic funksjon av CCL21 /CCR7. Imidlertid ble ingen forskjell av apoptose detektert mellom de tre behandlingsgrupper (p 0,05). Mulig årsak kan være at CCL21 på 50 ng /ml nådd mettet tilstand og dermed høyere konsentrasjoner kan ikke øke den effekten.
BCL-2 familie er funnet å være nært knyttet til celle apoptose [39-41]. Bcl-2 og Bax er de to mest viktige proteiner i Bcl-2-familie med Bcl-2-inhiberende apoptose mens Bax fremme apoptose. Disse to proteinene er tilstede i dimerer, slik som Bcl-2 /Bcl-2 og Bax /Bax. Oppregulering av Bcl-2-ekspresjon kan føre til ytterligere Bcl-2 til å kombinere med Bax danner BCL2 /Bax således inhibere celle apoptose; mens med nedregulering av ekspresjonen av Bcl-2, vil mengden av den kombinerte form av BCL2 /Bax minske og således fremme celle apoptose. I den foreliggende studien undersøkte vi ekspresjonen av Bcl-2 og Bax proteiner i T24-celler i alle forsøksgrupper, inkludert kontrollen. CCL21 kunne øke Bcl-2-protein ekspresjon men avta Bax proteinekspresjon og virkningene oppviste en CCL21 konsentrasjonsavhengig måte mellom 50 ng /ml og 100 ng /ml. Interessant nok var ingen signifikant forskjell som finnes i Bcl-2 og Bax uttrykk mellom CCL21 ved 100 ng /mL og 200 ng /ml CCL21 (Bcl-2: p = 0,545; Bax: p = 0,191); årsaken kan være at CCL21 nådd til en viss konsentrasjon som ikke er høyere enn 100 ng /ml for sin maksimale anti-apoptotiske virkninger (fig. 3). Forbehandling av CCR7 antistoff kan nesten fullstendig reversere effekten av CCL21 på uttrykkene for Bcl-2 og Bax og apoptose (Fig. 3 og Tabell 3). Dette bekrefter videre den viktige rollen CCR7 om effekten av CCL21 på T24 celler
Konklusjon
CCL21 /CCR7 fremmet T24 celleproliferasjon i en konsentrasjonsavhengig mønster og forbedret sin migrasjon og invasjon.; Disse effektene kan være knyttet til den økte ekspresjon av MMP-2 og MMP-9. CCL21 /CCR7 hadde antiapoptotic aktiviteter på T24 celler; Disse funksjonene kan være relatert til regulering av Bcl-2 og Bax proteiner. Våre resultater indikerer at CCL21 /CCR7 kan fremme blærekreft utvikling og metastasering.
