Abstract
Bakgrunn
Infeksjon med høyrisiko humant papillomavirus (HPV) typer har blitt anerkjent som en årsaksfaktor for utvikling av livmorhalskreft og en rekke andre kreftformer. I dag vaksiner mot HPV, svært effektiv i forebygging av vedvarende infeksjon og forstadier til kreft, er tilgjengelig for rutinemessig klinisk praksis.
Mål
Dataene på utbredelsen og typespesifikke HPV distribusjon i befolkningen i hvert land er avgjørende for overvåking av HPV typespesifikk prevalens på utbruddet av vaksinasjon mot HPV.
Metoder
kvinner som deltar på en forebyggende gynekologisk undersøkelse som ikke hadde noen historie med unormal cytologisk funn og /eller kirurgi for livmorhalskreft ble registrert. Alle prøvene ble testet for tilstedeværelse av HPV av High-Risk Hybrid Capture 2 (HR HC2) og av en modifisert PCR-reverse tråd blot analysen med bredspektret primere (BS-RLB).
Resultater
Cervical smears av 1393 kvinner ble analysert. I 6,5% av kvinnene, ble atypiske cytologiske funn oppdages. Til sammen var 28,3% (394/1393) av kvinnene positivt for noen HPV-type ved BS-RLB, 18,2% (254/1393) av HR HC2, og 22,3% (310/1393) av BS-RLB for HR HPV-typer. Hos kvinner med atypiske funn utbredelsen for HR og eventuelle HPV-typer var signifikant høyere enn hos kvinner med normale cytologiske funn. Total, 36 forskjellige HPV-typer ble påvist, med HPV-16 som den mest fremherskende (4,8%). HPV positivitet redusert med alderen; den høyeste prevalensen var 31,5% i aldersgruppen 21-25 år.
Konklusjoner
Våre forsøkspersonene representerer den virkelige screening befolkningen. HPV prevalens i denne populasjonen i Tsjekkia er høyere enn i andre land i Øst-Europa. Også spekteret av de mest utbredte HPV-typer som skiller seg fra de som er rapportert av andre, men HPV 16 er, concordantly, den hyppigst forekommende form. Landsspesifikke HPV typespesifikke forekomst skaffe grunnlagsinformasjon, noe som vil gjøre det mulig å måle effekten av HPV-vaksinasjon i fremtiden
Citation. Tachezy R, Smahelova J, Kaspirkova J, Salakova M (2013) humant papillomavirus type -spesifikk Prevalens i livmorhalskreft Screening Befolknings av tsjekkiske kvinner. PLoS ONE 8 (11): e79156. doi: 10,1371 /journal.pone.0079156
Redaktør: Daniela Flavia Hozbor, Universidad Nacional de La Plata, Argentina
mottatt:. 21 juni 2013; Godkjent: 26 september 2013; Publisert: 12.11.2013
Copyright: © 2013 Tachezy et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av tilskuddet NS 10 /656-3 /2009 og ved bevilgning NT 12 372 fra Helsedepartementet av Tsjekkia. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser. Biopticka laboratorium er et privat selskap som leverer rutine patologisk, cytologisk og molekylærgenetiske diagnostikk av menneskelig kliniske prøver. Medforfatter, Jana Kaspirkova, er en molekylærgenetikk som er ansvarlig for riktig prøvetaking og som har bidratt til dataanalyse. Det er ingen potensiell interessekonflikt om studien resultatene og hun bekrefter at dette ikke endrer tilslutning til alle PLoS ONE politikk på deling av data og materialer.
Innledning
Menneske papillomavirus (HPV ) er små DNA-virus som infiserer slimhinne og hud epitel. I dag mer enn 170 HPV-typer er kjent, 13 klassifisert som høy-risiko og 7 som trolig høyrisiko HPV-typer. De lav risiko (LR) HPV-typene forårsaker godartede lesjoner mens høy risiko (HR) HPV-typer er etablert som etiologiske agenter for livmorhalskreft (CC) [1,2]. Foruten livmorhalskreft, har HR HPV kreftfremkallende effekter på flere andre anatomiske områder i kvinner og menn [3]. HPV er i dag den vanligste virus seksuelt overførbare infeksjoner over hele verden, men fordelingen av ulike genotyper varierer mellom populasjoner og geografiske regioner [4]. I en meta-analyse av 1 million kvinner med normale cytologiske funn, estimert global HPV prevalensen var 11,7%, og det var store forskjeller mellom kontinenter. Imidlertid fem HPV-typer var konsekvent den mest utbredte: HPV 16, 18, 52, 31, og 58, uavhengig av geografisk lokalisering. I Europa ble den høyeste forekomsten funnet i østlige land [5]. Dataene fra Tsjekkia publisert før [6] ble ikke inkludert i meta-analysen fordi studien ikke oppfyller inklusjonskriteriene på grunn av en upassende utvalg av kvinner med normale cytologiske funn, siden de ble rekruttert på et sykehus basert setting. Forekomsten av HPV i denne gruppen var høy (23%), men i likhet med andre østlige land. Høy HPV prevalens ble rapportert å korrelere med høy forekomst av CC med to unntak, Sør-Asia og Øst-Europa [5]. Men i Tsjekkia forekomsten av CC er gjennomgående svært høy, 16,1 /100 000 kvinner (European standard) i 2010, til tross for at betydelige økonomiske ressurser er rettet mot forebygging av livmorhalskreft. Årsakene er i hovedsak mangel på koordinering og oppfølging som fører til over-screening av et mindretall av kvinner mens flertallet av målgruppen er under-screenet eller ikke vist i det hele tatt [7]. Alderen anbefalt av tsjekkiske gynekologi og obstetriske Society for første undersøkelse av kvinner etter utbruddet av seksuelle liv er 15 år og det er ingen begrensning når det gjelder screening alder angitt i programmet for livmorhalskreft forebygging i Tsjekkia. Men kvinner i alderen 25 til 60 som ikke møter til eksamen i de siste to årene bør inviteres av helse forsikringsselskapet [8].
HPV testing har vist seg som en robust, reproduserbar, og sensitiv test for triage av kvinner med unormal cytologiske funn og for oppfølging av kvinner som behandles for livmorhalskreft. Videre HPV testing har også nylig blitt vist å være en sensitiv og kostnadseffektiv test for identifikasjon av kvinner med risiko i primærlivmorhalsscreeningprogrammer [9,10]. To profylaktiske HPV-vaksiner, bivalent og tetravalent, er tilgjengelige for primærforebygging av HPV-assosierte sykdommer [11]. Evalueringen av HPV typespesifikk prevalens i befolkningen før utbruddet av rutinemessig vaksinasjon og overvåking av mulige endringer i typen distribusjon er viktig både for valg av diagnostiske tester og for estimering av den potensielle lokale effekten av HPV-vaksiner på forebygging av HPV-assosierte sykdommer hos kvinner og menn.
Materialer og metoder
Study befolkningen
I Tsjekkia screeningintervallet er ett år. Kvinner med atypisk cytologisk og /eller colposcopical funn er planlagt for oppfølging eksamen i 3-6 måneder intervall. HPV deteksjon og skrive ble utført på kvinner som hadde sitt forrige gynekologisk undersøkelse mer enn ett år siden, og som ikke hadde noen historie med atypiske eller patologiske funn på livmorhalsen og ingen tidligere behandling for livmorhalskreft.
Til sammen prøver av 1393 kvinner (gjennomsnittsalder 33,5 år, aldersgruppe 14 – 79 år) ble valgt ut fra bredden av prøver av bioptic Laboratory i Pilsen, Tsjekkia. Disse prøvene ble levert av gynekologer som behandler pasienter i 5 av 14 forskjellige distrikter i Tsjekkia i perioden mellom januar 2010 og desember 2011. Dette inkluderer både store byer og på landsbygda. Prøvene i urinprøve transport Medium (STM) (Qiagen, Hilden, Tyskland) ble sendt til Nasjonalt referanselaboratorium for Papillomavirus (NRL PV) under laboratoriet identifikasjonsnummer (lab ID) for å utelukke personlig identifikasjon av forsøkspersonene i NRL PV. Studien var dobbelt blind. Personene som utfører HPV DNA deteksjon og skrive var ikke klar over cytologi resultater og CELLESPESIALIST ble blindet for HPV DNA-resultater. De cytologiske Resultatene var tilgjengelig under lab-ID for den endelige analysen.
Cytologisk klassifisering.
cytologisk klassifiseringen ble gjort i henhold til Bethesda 2001 oppdatering [12]. For hensikten med denne studien ble cytologiske funn gruppert i fire kategorier: normal, mindre (om atypiske plateepitel celler med ukjent betydning /ASC-US /og /eller atypiske kjertelceller, som ikke er spesifisert /AGC-NOS /ble oppdaget) forsiktig (hvis lavgradige plateepitel intraepitelial lesjoner /LSIL /påvist) eller alvorlig (hvis atypiske plateepitel celler, kan ikke utelukke høyverdig plateepitel intraepitelial lesjon /ASC-H /og /eller atypiske kjertelceller, favorisere neoplasi /AGC- NEO /, og /eller høy grad av plateepitel intraepitelial lesjoner /HSIL /) ble påvist).
Etikk uttalelse.
Studiet ble godkjent av etikk komité ved Institutt for Hematologi og blodoverføring. Behovet for samtykkeskjema ble frafalt av etisk komité fordi prøvene ble valgt anonymt fra bredden av prøver av Bioptic Laboratory i Pilsen, Tsjekkia (https://www.biopticka.cz/).
datatilgjengelighet.
studiet kildedata vil bli gjort tilgjengelig på forespørsel, i samsvar med prinsippene fastsatt av US National Research Council of National Academies (National Academies Press, 2003).
HPV påvisning og genotyping
hybrid Capture 2 assay (HC2).
En 200 pl prøve fra hver urinprøve transport Medium (STM) (Qiagen, Hilden) prøven ble lagret ved -20 ° C inntil videre behandlet (se nedenfor). Alle prøver ble testet ved hjelp av hybrid Capture® to høyrisiko HPV DNA test (HR HC2) (Digene Corporation, Gaithersburg, MD). Denne testen gjør det mulig for påvisning av 13 HR HPV-typer (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, og 68). Testingen ble utført i henhold til instruksjon av produsenten. Terskelen for positiv HPV betegnelsen var en relativ lys enhet /cutoff (RLU /CO) forhold på ≥1.0.
PCR og hybridisering.
Celler fra en 200 ul alikvot av hver STM-prøven ble pelletert ved sentrifugering og DNA ble ekstrahert ved hjelp av QIAamp DNA mini-kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) ifølge produsentens protokoll. Den endelige eluering av DNA fra kolonnen ble utført med 100 ul av elueringsbufferen.
Tilstedeværelsen og integriteten av det humane DNA ble bekreftet ved PCR med primerne MS3 /MS10bio spesifikke for beta-globin genet [13].
Amplifikasjonen ble utført i en PCR thermocycler (PTC 200, MJ Research Inc., Waltham, MA, USA) med en blanding av bredspektret BSGP5 + primere og 5′-ende-merket biotin BSGP6 + primere som forsterker 150 bp fragment av L1 genet [13]. Femti mikroliter av PCR-blanding inneholdt 4 pl av det isolerte DNA, 50 mM KCl, 10 mM Tris HCl, pH 8,3 (Roche Applied Biosystems, Mannheim, Tyskland), 200 uM av hver deoxynucleosid trifosfat, 3,5 mM MgCl2, 1 U av DNA AmpliTaq Gold polymerase (Roche Applied Biosystems, Mannheim, Tyskland), 10 pmol av hver av de ni BSGP5 + primere, og 20 pmol av hver av de tre 5′-biotinylerte primere BSGP6 + (MWG-Biotech AG, Ebersberg, Tyskland). Etter innledende denaturering ved 94 ° C i 4 minutter, hver av de 40 sykluser besto av denaturering ved 94 ° C i 20 sekunder, annealing primer ved 38 ° C i 30 sekunder, og kjedeforlengelse ved 71 ° C i 80 sekunder. Ved slutten, ble inkubering ved 71 ° C i 4 minutter utført. Etter amplifikasjon ble 10 pl av PCR-produktet analyseres på et horisontalt 3% agarosegel (NuSieve 3: 1 agarose, FMC Bioproducts, Rockland, ME).
For genotyping, det motsatte linjen blot hybridisering (RLB) ble brukt [14]. Den RLB Fremgangsmåten er i stand til å identifisere 37 forskjellige HPV-typer i en enkelt analyse. Sekvenser av alle sonder, utenom de redesignet ifølge Schmitt [15] (HPV type 16, 39, 59 og 82, og universelle sonder U1 og U2), ble beskrevet før [14]. Alle prober ble kovalent bundet til 5′-terminale amino-gruppe til en aktivert negativt ladet biodyne C membran og hybridisert med den biotinylert PCR-produkt. Etter vasking, ble membranen inkubert med peroksyd-merket streptavidin-konjugat ved 42 ° C i 60 min. For chemiluminiscent deteksjon til å hybridisere DNA, ble membranen inkubert i ECL påvisning væske (Amersham Biosciences, Uppsala, Sverige) og utsatt for LumiFilm (Roche, Indianapolis, IN) i 5 minutter.
Prøvene positive ved HR HC2 men negative ved BS-RLB ble testet ved PCR med konsensus primere MY09 /MY11 og HMB01 som spesifisert før [16]. Positive prøver ble skrevet ved sekvensering som vist nedenfor.
HPV-sekvensering.
De prøver som ikke var hybridisert på RLB men hadde åpenbart et tydelig bånd på agarosegel ble underkastet DNA-sekvensering nukleotid for å bestemme den eksakte HPV genotype. Førti mikroliter av PCR-produktet ble kuttet ut fra 2% agarosegel (NuSieve GTG agarose, FMC Bioproducts, Rockland, ME, USA), renset ved anvendelse av MinElute Gel Extraction Kit (Qiagene, Hilden, Tyskland), og sekvensert med » BigDye Terminator Primer Cycle Sequencing kit «(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Analysen ble utført på en automatisk ABI PRISM 3500 sekvenseringssystem (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) og sekvensene som ble analysert ved den Chromas programvare og evaluert av BLAST-programvaren (http: //www.ncbi.nlm.nih gov /BLAST /).
Linear Array HPV genotyping test (LA).
Prøver med avvikende funn av HR HC2 og PCR metoder (se ovenfor) ble testet med LA (Roche). Denne testen gjør det mulig for påvisning av 37 HR og LR HPV-typer (HPV 6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 40, 42, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56 , 58, 59, 61, 62, 64, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73 (MM9), 81, 82 (MM4), 83 (MM7), 84 (MM8), IS39, og CP6108). Testingen ble utført i henhold til instruksjon av produsenten. Fra det ekstraherte DNA, ble den samme mengde som for BS-RLB metode (4 mL) anvendt.
Statistiske analyser
Multiply infiserte prøver var de der to eller flere HPV-typer hadde blitt oppdaget. Slike prøver ble regnet som positive for én type HPV og også inkludert blant positive for de andre. Typespesifikke HPV prevalens er uttrykt i prosent av alle fag testet for HPV, og dermed representerer HPV prevalensen i enten én eller flere infeksjoner. For å uttrykke representasjon av hver type i enkle og multiple infeksjoner, ble hver prøve tilordnet i proporsjonal fraksjoner til bestemte genotyper men telles bare en gang i [17]. Forskjellen i forekomsten HPV i gruppen av kvinner med normale cytologiske funn ble sammenlignet med de kvinnene med atypiske funn (ASC-US /AGC-NOS, AGC-NEO /LSIL, ASC-H /HSIL) med 95% konfidensintervall ( CI) ved hjelp GraphPad INSTAT (versjon 3.00) (GraphPad Software, San Diego, California). For krysstabeller, ble standard chi-kvadrat test og Fisher eksakt test brukes. Alle testene var tosidig og signifikansnivået var a = 0,05. For å utelukke forskjeller i aldersstruktur mellom populasjoner brukte vi direkte standardisering (WHO Verdens standard). Kappa statistikken ble anvendt for å måle avtalen for HPV positivitet status mellom de to testene som brukes.
De detekterte HPV-typer ble klassifisert i lav-risiko (LR) (HPV 6, 11, 32, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 72, 74, 81, 90, og 114), høy-risiko (HR) (HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, og 68), og sannsynligvis høy risiko (phr) (HPV 26 , 53, 66, 67, 70, 73, og 82) typer av slekten Alpha som inneholder de mucosale typer HPV [18-20]. I våre analyser har vi definert (basert på den fylogenetiske slektskap) HPV-31 som er nært knyttet til HPV 16 og HPV 45 som er nært knyttet til HPV-18 HPV 33, 52 og 58 som mer fjernt beslektet til HPV 16.
laboratoriet er akkreditert til CSN EN ISO 15 189 og deltar regelmessig i eksterne kvalitetskontrollprogrammer organisert av instand (Tyskland) og Mendel Senter for Biomedical Sciences (Kypros). Videre laboratoriet deltatt to ganger i WHO HPV LabNet Kunnskaper Study of HPV DNA Typing organisert av WHO HPV Global Reference Laboratory [21,22].
Resultater
Ut av 1393 kvinner i vår studie, 25,6% (357/1393) var yngre enn 25 år, og 2,2% var eldre (32/1393) enn 60 år, det vil si 72% var innenfor den anbefalte aldersgruppe for screening. Majoriteten av kvinnene – 93,5% (1302/1393) – hadde normale cytologiske funn. Til sammen 6,5% (91/1393) av kvinnene hadde unormale cytologiske funn, 4,4% (61/1393) hadde ASC-US eller AGC-NOS, 2,0% (28/1393) hadde AGC-NEO eller LSIL og 0,1% ( 2/1393) hadde ASC-H eller HSIL. Færre kvinner – 18,2% (254/1393) – var positive for HR HPV ved HR HC2 metoden i forhold til BS-RLB som oppdaget 22,3% (310/1393) HR HPV eller HR og LR HPV positive kvinner og 28,3% (394 /1393) var positive med BS-RLB for noen HPV-type. De tilsvarende forekomst, alder-standardisert til verdens befolkning, var 14,7%, 19,5% og 24,6%, henholdsvis. Ved BS-RLB, 70,6% (278/394) av pasientene var HPV positive for en enkelt HPV-type, mens 29,4% var positive for flere typer (18,3% for to, 6,9% for tre, 2,8% for fire, 1,3% for fem og 0,3% for seks HPV-typer). LR HPV-typer, som en enkelt infeksjon, var til stede i 6,0% (84/1396) av kvinnene (tabell 1).
cytologisk FUNN
Alle
normal
ASC-US /AGC-NOS
AGC-NEO /LSIL
ASC-H /HSIL
p-verdi
N [%] N [%] N [%] N [%] N [%] HR HC2254 (18,2) 203 (15,6) 23 (37,7) 27 ( 96,4) 1 (50,0) 0.0001PCR, HR HPV * 310 (22,3) 256 (19,7) 27 (44,3) 26 (92,9) 1 (50,0) 0.0001PCR, noe HPV394 (28,3) 333 (25,6) 33 ( 54,1) 27 (96,4) 1 (50,0) 0.0001PCR, LR HPV ** 84 (6,0) 77 (5,9) 6 (9,8) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.4912HPV 6/11
*** 20 (1,4) 19 (1,5) 0 (0,0) 1 (3,6) 0 (0,0) 0.7503HPV 16/18
# 104 (7,5) 86 (6,6) 9 (14,8) 9 (32,1) 0 (0,0) 0.0001HPV 31/45
*** 43 (3,1) 37 (2,8) 3 (4,9) 3 (10,7) 0 (0,0) 0.0565HPV 33/52/58
48 (3,4) 38 (2,9) 6 (9,8) 3 (10,7) 1 (50,0) 0.0007Table 1. HPV prevalens av cytologiske funn og av HPV DNA deteksjonsmetode
p-verdi for sammenligning av utbredelsen HPV hos pasienter med normale og atypiske (ASC-US /AGC-NOS, AGC-NEO /LSIL, ASC-H /HSIL) cytologiske funn, HR HC2 = Hybrid Capture HR test, PCR = polymerase chain reaksjon, ASC-US = atypiske plateepitel celler med ukjent betydning, AGC-NOS = atypiske kjertelceller, ikke annet er spesifisert, AGC-NEO = atypiske kjertelceller, favorisere neoplasi, LSIL = lavgradig plateepitel intraepitelial lesjon, ASC-H = atypisk plateepitel celler, kan ikke utelukke høyverdig plateepitel intraepitelial lesjon (HSIL), HSIL = høyverdig plateepitel intraepitelial lesjon * nærvær av HR HPV og også HR HPV i flere infeksjon med LR HPV-typer, ** nærvær av LR HPV-typene bare i enkle eller multiple infeksjoner med andre typer LR *** prøver som ikke inneholder HPV 16 og /eller 18,
# prøver HPV 16 og /eller 18 positive,
prøver som ikke inneholder HPV 16 og /eller 18 og /eller 31 og /eller 45 CSV ned CSV
cytologisk normale kvinner var positive for HR HPV-typer i 15,6% (203/1302) av HC2 test. Ved hjelp av BS-RLB, var 19,7% (256/1302) av cytologisk normale kvinner positive for HPV-typene HR, og 25,6% (333/1302) for en hvilken som helst HPV-type (tabell 1). De respektive prevalens, alders standardisert til verdens befolkning, var 12,5%, 16,3% og 21,4%. Av studien kvinner, ble 5,9% (77/1393) infisert med LR HPV-typer.
Utbredelsen av flere infeksjon økte med økende grad av cytologiske funn (P for trend = 0,0003) (tabell 2). Multiple infeksjon var mer vanlig i yngre alder og var fraværende hos kvinner eldre enn 55 år (figur 1).
HPV DNA PREVALENS (%)
Aldersgruppe
N
HR HC2
PCR HR HPV
PCR NOEN HPV
PCR LR HPV
HPV 6/11
HPV 16/18
≤2015334 (22,2) 43 (28,1) 54 (35,3) 11 (7,2) 4 (1,3) 13 (9,2) 21-2521367 (31,5) 73 (34,3) 87 (40,8) 14 (6,6) 7 (3,3) 26 (12,2) 26-3020229 (14,4) 43 (21,3) 56 (27,7) 13 (6,4) 4 (2,0) 18 (8,9) 31-3521634 (15.7) 42 (19.4 ) 54 (25,0) 12 (5,6) 3 (1,4) 12 (5,6) 36-4019218 (9,4) 24 (12,5) 36 (18,8) 12 (6,3) 2 (1,0) 6 (3,1) 41-4511410 (8,8) 13 (11,4) 17 (14,9) 4 (3,5) 0 (0,0) 3 (2,6) 46-50905 (5,6) 9 (10,0) 17 (18,9) 8 (8.9) 0 (0,0) 7 (7.8) 51-55555 (9,1 ) 4 (7,3) 5 (9,1) 1 (1,8) 0 (0,0) 3 (3,6) 56-60371 (2,7) 3 (8,1) 4 (10,8) 1 (2,7) 0 (0,0) 0 (0,0) 61-65210 (0,0) 2 (9,5) 3 (14,3) 1 (4,8) 1 (4,8) 0 (0,0) 6590 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) 0 (0,0) Tabell 2. Age spesifikk HPV utbredelsen av metoden for HPV DNA testing hos kvinner med normale cytologiske funn.
CSV ned CSV
Uansett hvilken metode som brukes for HPV deteksjon, utbredelsen av HR HPV økte med økende grad av cytologiske funn mens utbredelsen av LR HPV-typer i én eller flere infeksjoner forblir mer eller mindre stabil (tabell 1). I vår studie var det bare to kvinner oppdaget med alvorlige cytologiske funn, ett med HSIL var positiv med både HR HC2 og BS-RLB (HPV 33) og en pasient med ASC-H ble negativt med begge metodene.
Prevalensen av HR HPV var aldersavhengig. Den høyeste forekomsten av HR HPV ble observert i aldersgruppen 21-25 år, etter både HR HC2 og BS-RLB, 34,2% (78/228) og 36,8% (84/228), henholdsvis, og raskt redusert hos eldre kvinner . I alderskategorien 61-65 år, BS-RLB oppdaget 9,1% (2/22) av HR HPV positive og HR HC2 ga negative resultater (figur 2).
Hos kvinner med normale cytologiske funn, utbredelsen av HR HPV var noe lavere i forhold til hele kullet, og nådde det høyeste på 31,5% (67/213) og 34,3% (73/213) i en alder av 21-25 år, som vurdert av HR HC2 og BS-RLB henholdsvis (tabell 2).
Påvisning av HR HPV DNA ved HR HC2 og BS-RLB ga samstemmige resultater i 91,4% (1273/1393) av prøvene. Korrelasjonen var betydelig (Kappa verdi = 0,7339).
Av 120 uoverensstemmende prøvene, 88 var BS-RLB positiv, men HR HC2 negative for HR HPV. Ut av disse, 76,1% (67/88) inneholdt HR HPV-typer som er rettet av HR HC2 sett. I 32,8% (22/67) av disse prøvene, ble flere HPV-infeksjon påvises. De vaksine HR HPV type 16 og /eller 18 ble påvist i 31,8% (28/88) av disse prøvene: i 60,7% (17/28) som en enkel infeksjon og i 39,3% (11/28) som en del av en fler infeksjon. Tre av disse 28 pasienter (10,7%) med multippel infeksjon hadde mistenkelige cytologiske funn (ASC-US), mens de resterende 89,3% av pasientene hadde normal cytologi.
Det var 32 prøver positive på HR HC2 men negative for HR HPV ved BS-RLB. I 56,3% (18/32) av disse prøvene, BS-RLB detektert LR HPV-typer bare (HPV 6, 32, 42, 43, 44, 54, 61, 62, 74, og 81); de resterende 43,8% (14/32) av prøvene ble BS-RLB negativ for alle HPV type. Middelverdien av RLU /CO i disse 14 prøver var ganske lav (12,3 RLU /CO) som tilsvarer grensen til svak positivitet av prøven på HR HC2. I 10/18 prøver, positive ved BS-RLB for LR HPV-typene bare, LA også oppdaget HR HPV-typer, for det meste som en del av flere infeksjon. I 6/14 prøvene negative ved BS-RLB for enhver type, LA også oppdaget HR HPV-typer (tabell 3).
HPV TYPE
PRØVE
cytologisk FUNN
HR HC2 [RLU /CO]
BS-RLB
LA
1Normal8.144242,662Normal1.2342423ASC-US14.334242,514Normal3.2005Normal1.742426LSIL35.944,81*31,62,81,52**7Normal1.2008Normal14.34435*9Normal132.70010Normal1.60011Normal1.10012ASC-US2.5424213Normal11.960014Normal6.2740**15Normal1.984242,66,8416Normal2.27616117Normal4.70018Normal1.8035,5919Normal5.9003120Normal1.4344,54*0**21Normal6.1754*31,5422Normal1.470*54,6223Normal1.46425924***Normal5.22623125Normal1.213283,84**26Normal1.8703527Normal10.126161,8128Normal1.1405229Normal5.244359**30Normal3.9005231Normal1.50059,8132Normal23.7766,31Table 3. Resultater av HPV-type-spesifikk påvisning ved hjelp av Linear Array (LA) i prøvene negative for HR HPV på BS-RLB men positive på HR HC2. Product: * BS-RLB ikke oppdager HPV 62, gjør ** LA ikke påvise HPV 32, 43, 44, 74; *** HPV 66 påvises ved hjelp av årsmodell 09/11 PCR og sekvensering CSV ned CSV
Til sammen ble 35 ulike HPV-typene oppdaget: 20 HR og PHR HPV-typer og 15 LR HPV-typer. Forekomsten av HPV-type og cytologiske funn er vist i tabell 4. De mest utbredte HR-typer ble HPV-16 (5,4%), etterfulgt av HPV 56, 39, 53, og 18, mens av LR typer, HPV 42, 54, 44 , 6 og 61 ble oftest påvist. De forekomst av vaksinale, nært og fjernt beslektede HPV typer i alle kvinner så vel som i kvinner med normal cytologi var nesten identiske og er oppsummert i tabell 1. HPV 6 og /eller 11 ble bare funnet i 1.4% (20/1393) av prøvene mens HPV 16 og /eller 18 i 7,5% (104/1393) av prøvene. Nær beslektede typer HPV-31 og /eller 45 var til stede i 3,1% (42/1393) og fjernt beslektet type HPV 33 og /eller 52 og /eller 58 i 3.4% (48/1393) av prøvene.
cytologisk funn
TYPER
alle NORMAL
ASC-US /AGC-NOS
AGC-NEO /LSIL
ASC-H /HSIL
N
%
N
%
N
%
N
%
N
%
1393100.0130293.5614.4282.020.1N+%N+%N+%N+%N+%HPV ALL39428.333325.63354.12796.4150.0HR HPV31022.325619.72744.32692.9150.0HPV single27870.624774.21751.51348.11100.0HPV multiple11629.48625.81648.51451.900.06201.4191.500.013.600.01120.120.200.000.000.016755.4634.8711.5517.900.018322.3241.846.6414.300.02610.110.100.000.000.031221.6161.234.9310.700.03210.110.100.000.000.033191.4171.311.600.0150.03550.450.400.000.000.039332.4262.023.3517.900.04050.450.400.000.000.042433.1362.846.6310.700.04330.220.211.600.000.044191.4161.211.627.100.045292.1262.034.900.000.051312.2211.646.6621.400.052241.7171.334.9414.300.053332.4251.9711.513.600.054271.9201.569.813.600.056392.8312.446.6414.300.058141.0110.834.900.000.059130.990.734.913.600.06190.690.700.000.000.06220.120.200.000.000.06670.560.500.013.600.06730.230.200.000.000.068201.4161.211.6310.700.070130.9120.900.013.600.07210.100.000.013.600.07370.570.500.000.000.07450.440.311.600.000.08160.440.311.613.600.082120.990.711.627.100.09020.120.200.000.000.011410.110.100.000.000.0Table 4. Forekomsten av HPV-typene i screening befolkningen i tsjekkiske kvinner ved cytologiske funn som avslørt av BS-RLB.
CSV ned CSV
Diskusjoner
Denne studien gir grunnleggende informasjon om HPV type spesifikk utbredelse i Tsjekkia før utbruddet av rutinemessig vaksinasjon og åpner for videre overvåking av endringer i utbredelsen av en rekke HPV genotyper. Forekomsten har vært studert i screening befolkningen i tsjekkiske kvinner. To metoder for HPV testing ble brukt. For å tilveiebringe internasjonalt sammenlignbare data, var den mest brukte kommersielt tilgjengelig sett HR HC2 valgt. Den andre metoden, på den annen side, gjør det mulig for en meget følsom påvisning av et bredt spektrum av HPV-typer og også av flere infeksjoner. De to metodene ga samstemmige resultater i 91% av prøvene. HPV og HR HPV er svært utbredt i den tsjekkiske befolkningen. Den høyeste forekomsten ble observert i aldersgruppen 21-25 år. Hos kvinner som er eldre enn 55 år, ble ingen flere infeksjon og nesten ingen LR typer oppdages. Majoriteten av kvinnene hadde normale cytologiske funn, bare 6,5% av kvinnene hadde unormale cytologiske funn. Dette er i samsvar med de årlige dataene i den tsjekkiske største cytologisk laboratorium som utfører om lag 600 000 cytologiske undersøkelser av screening cytologi per år. Omtrent 7,5% av kvinnene fra screening befolkningen ble smittet med vaksine HR typer og 6,5% av nært og fjernt beslektede HR typer mens LR vaksinetypene var mye mindre hyppig (1,4%). I likhet med andre land, den mest utbredte HR typen var HPV 16, men andre HR HPV-typer (HPV 56, 39/45, 18 og 51) som var den hyppigst påvist i den tsjekkiske befolkningen ble annerledes enn de som er rapportert for europeiske land etter Bruni et al. (HPV 16, 31, 18, 39, 33, og 66) [5].
Meta-analyser, samt en samlet analyse av HPV typespesifikk prevalens hos kvinner med normale cytologiske funn over hele verden har vært gjennomført [4,5,23] men de tidligere publiserte data fra Tsjekkia [6] ble ikke tatt med på grunn av deres uegnet. Data om HPV utbredelsen typespesifikk i screening befolkningen fra Øst-Europa er fortsatt begrenset. Ingen av de østeuropeiske landene ble inkludert i de første sammenslåtte analyser [23]. I meta-analyse av de sanjose et al. bare data fra Russland ble analysert mens Bruni et al. inkluderte også data fra Polen, Ungarn, Hviterussland og Latvia [4,4,5]. Men for enkelte land, f.eks Ungarn, bare den totale forekomsten av HR og LR typer ble vurdert, for andre land, ble et begrenset antall HPV-typer analysert eller bare en del av HPV positive prøvene ble skrevet. Nylig data fra Slovenia har også blitt publisert [24].
Den verdensomspennende HPV prevalens hos kvinner med normal cytologi i den samlede analysen var 10,4%, HPV-utbredelsen i Europa var 8,1%, og fordelingen variert betydelig mellom kontinenter. Øst-Europa var representert ved bare én studie fra Russland med 309 kvinner registrert. HPV prevalens i denne studien var mye høyere enn i andre europeiske regioner (29,1%). HPV 16 var den mest utbredte typen over hele verden (2,5%), samt i Øst-Europa (7,4%), men dette resultatet må vurderes med forsiktighet ettersom bare 100 HPV positive prøvene ble skrevet i den russiske studien. Forekomsten av HPV 16 i andre europeiske regioner var mye lavere (1,6% til 3,0%) [4].
Den meta-analyse av en million kvinner med normale cytologiske funn [5] funnet en samlet prevalens av HPV på 11,7%, sammenlignbare over hele verden. Denne meta-analysen inkluderte data fra fem østeuropeiske land og bekreftet en betydelig høyere forekomst av HPV i disse fem landene i sammenligning med andre europeiske regioner (21,4% vs. 8,8% -10%). I vår studie, utbredelsen av noen HPV-type hos kvinner med normale cytologiske funn var 25,6% og var høyere enn i Polen (16,6%). De forekomst av HR HPV-typer hos kvinner med normale cytologiske funn var lavere i Polen og Slovenia (9,6% og 10,7%, henholdsvis) enn i Tsjekkia (19,7% og. Henholdsvis 15,6% av BS-RLB og HR HC2,). I screening befolkningen fra Russland, Hviterussland og Latvia, utbredelsen av HR HPV-typer var 27,2%. Siden i de fire studiene, kvinner fra screening befolkningen ble registrert, kan forskjellene i utbredelsen reflekterer de reelle forskjeller mellom bestander av de fire østeuropeiske land eller kan tilskrives det faktum at ulike metoder ble brukt for HPV deteksjon som vist før [5]. Den polske studie benyttet GP5 + /6 + PCR system som er mindre følsom enn den modifiserte systemet som brukes i vårt studium. Lignende system til våre ble brukt av Schmitt et al. [25] til screening befolkningen i belgiske kvinner og forekomsten oppnådd i sin studie var sammenlignbare med våre data. I den slovenske studien ble et system som retter seg mot mindre HPV-typer utnyttet. I studiet av Kulmala et al. [26], et system som oppdager bare ni HR HPV-typer ble brukt og den rapporterte forekomsten var forholdsvis høy som i den tsjekkiske befolkningen. En annen kilde til variasjon er skillet mellom HR og LR HPV-typer. I analysene har vi inkludert både HR og PHR HPV-typer som HR-typer (se materialer og metoder). Hvis vi brukt samme definisjon av HR typer som den polske studien [27], ville HR HPV forekomst i den tsjekkiske befolkningen være fortsatt mye høyere, 20,4% for hele kohorten og 17,9% for kvinner med normale cytologiske funn. Våre data bekrefter eksepsjonelt høy forekomst av HPV i screening befolkningen i øst-europeiske land, og er også sammenlignes med resultatene fra en rekke andre studier utført rundt om i verden med den mest anvendte sett HC2 (for oversikt se 5).
I screening befolkningen i den tsjekkiske kvinner, den høyeste forekomsten av HPV ble funnet i aldersgruppen 21-25 år. Den høyeste forekomsten i samme aldersgruppe ble funnet i både mindre og mer utviklede land. I østeuropeiske land, ble toppen observert i aldersgruppen 25-34 år [5].
