Abstract
RECEPTEUR d’origine nantais (Ron) er overuttrykt i et panel av kreft i bukspyttkjertelen celler og vevsprøver fra bukspyttkjertelen kreftpasienter. Ron kan aktiveres ved dets ligand macrophage stimulerende protein (MSP), for derved å aktivere onkogene signaliseringsreaksjonsveier. Crosstalk mellom Ron og EGFR, c-Met, eller IGF-1R kan gi en underliggende mekanismen legemiddelresistens. Dermed rettet mot Ron kan representere en roman terapeutisk strategi. IMC-RON8 er den første Ron monoklonalt antistoff (mAb) går inn klinisk studie for målretting Ron overekspresjon. Våre studier viser IMC-RON8 downmodulated Ron uttrykk i kreft i bukspyttkjertelen celler og betydelig blokkert MSP-stimulert Ron aktivering, nedstrøms Akt og ERK-fosforylering, og Survivin mRNA uttrykk. IMC-RON8 hindret MSP-indusert cellemigrasjon og redusert celle transformasjon. Histondeacetylase hemmere (HDACi) er rapportert å målrette uttrykket av ulike gener gjennom modifisering av nucleosome histoner og ikke-histonproteinene. Vårt arbeid viser HDACi TSA og Panobinostat (PS) falt Ron mRNA og protein uttrykk i kreft i bukspyttkjertelen celler. PS også redusert nedstrøms signalering av Pakt, Survivin, og XIAP, samt forbedret celle apoptose. Interessant, PS redusert kolonidannelse i Ron knockdown-celler i en større grad enn Ron krafse kontrollceller i kolonidannelse og myk agarose analyser. IMC-RON8 kan også bevisst kreft i bukspyttkjertelen celler til PS, noe som reflekteres av reduserte koloni tall og størrelser i kombinasjonsbehandling med IMC-RON8 og PS i forhold til enkel behandling alene. Samtidig behandling ytterligere redusert Ron uttrykk og Pakt, og økt PARP cleavage forhold til hver behandling alene. Denne studien indikerer muligheten for en ny kombinasjon metode og som kan være av verdi i behandlingen av kreft i bukspyttkjertelen
relasjon:. Zou Y, Howell GM, Humphrey LE, Wang J, Brattain MG (2013) Ron knockdown og Ron monoklonalt antistoff IMC-RON8 bevisst kreft i bukspyttkjertelen til histondeacetylase hemmere (HDACi). PLoS ONE 8 (7): e69992. doi: 10,1371 /journal.pone.0069992
Redaktør: Lu-Zhe Sun, University of Texas Health Science Center, USA
mottatt: 29 mars 2013; Akseptert: 13. juni 2013, Publisert: 29.07.2013
Copyright: © 2013 Zou et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres
Finansiering:. Denne studien ble støttet av National Institutes of Health for finansiering: CA34432, CA38173, CA72001 og CA54807, tildelt MG Brattain. Finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet
Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer
Innledning
kreft i bukspyttkjertelen er en svært ondartet sykdom, med ca 40 000 nye tilfeller diagnostisert i USA i 2012 [1]. De fem års overlevelse er svært lav (mindre enn 5%) [2]. Foreløpig mindre enn 10% av pasientene er kvalifisert for kurativ kirurgi, mens mer enn 90% med lokalavansert eller metastaserende sykdommer blir behandlet med strålebehandling og /eller kjemoterapi [3]. Kreft i bukspyttkjertelen til slutt utvikler resistens mot disse behandlingene. Molekylære studier viste at genetiske og epigenetiske forandringer kjøre bukspyttkjertelkreft [4]. En bedre forståelse av det molekylære grunnlaget for kreft i bukspyttkjertelen vil gagne utvikling av nye terapeutiske strategier.
Nylig har Ron blitt identifisert til å være overuttrykt i en undergruppe av bukspyttkjertelen kreftpasienter og etablerte kreftcellelinjer [5], [ ,,,0],6]. Ron tilhører MET reseptortyrosinkinasehemming (RTK) familie. Tidligere studier viste at Ron nivåer er forhøyet i mange epiteliale cancere så som bryst [7], tykktarm [8], lunge [9], og blære [10] kreft. Ron overekspresjon var prognostisk av dårlig overlevelse og korreleres med utvikling av sykdommen [11].
Funksjonelle studier viste at Ron kan aktiveres ved dets ligand MSP å initiere en kaskade av molekylsignalering, inkludert PI3K /Akt, MAPK, β -catenin, JNK og FAK veier for å regulere ulike cellulære funksjoner [12]. MSP /ron akse har vist seg å påvirke cellemigrering og invasjon, og potensielt fremme tumormetastase [12], [13]. Nedregulering av Ron ved knockdown resulterte i redusert celleproliferasjon, transformasjon, tumorvekst, metastase og øket celle apoptose, i kolon kreftceller [14], [15]; og sensitive kreft i bukspyttkjertelen celler til gemcitabin [16]. Derfor spiller Ron en viktig rolle i å opprettholde ondartede fenotyper i kreft hos mennesker. IMC-41A10 var den eneste humane anti-ron mAb som er blitt rapportert å ha anticancer aktivitet [17]. IMC-41A10 hemmet MSP binding til Ron, redusert MSP-mediert Ron fosforylering, PI3K /Akt og MAPK aktivisering, og cellemigrasjon
in vitro
. Nylig ble et nytt humant mAb IMC-RON8 generert og angitt fase I klinisk studie som første Ron mAb.
Drug motstand er et stort hinder i kreftbehandling. Crosstalk mellom RTK kan representere en av mekanismene for resistens. Ron har blitt rapportert å hetero dimerisere med c-Met [18], og cross-talk med EGFR [19], [20] for å aktivere RTK på en gjensidig måte. Inte og IGF1-R kan også aktivere Ron gjennom en MSP-uavhengig måte [21], [22]. Overekspresjon av Ron økt resistens til IGF1-R inhibitor BMS-536924 i barndommen sarkom [23]; mens knockdown av Ron sensitivisert de resistente celler til BMS-536924 [23]. Disse funnene understreker en potensiell fordel for rasjonelle kombinasjonsbehandlinger basert på Ron tyrosinkinase-nettverk.
epigenetiske endringer, for eksempel acetylering og metylering, er de viktigste posttranslasjonelle modifikasjoner av de høyt lysin rester av kjerne nukleosomale histoner. Endringer i histone acetylering er under kontroll av opposisjonelle aktiviteter histone acetytransferases (hatt) og histone deacetylases (HDACs) [24], som avgjør transkripsjonen aktivering eller undertrykkelse av genuttrykk. Hatter og HDACs spiller også en viktig rolle i acetylering og deacetylering av ikke-histonproteinene [25], [26].
Overuttrykte HDACs har blitt funnet i tykktarm, bryst, bukspyttkjertel, og andre kreftformer [27] – [31], noe som tyder på at de kan være attraktive kreft mål. HDAC-inhibitorer er rapportert å målrette ekspresjon av forskjellige gener ved modifisering av nucleosome histoner og ikke-histonproteinene. Den pan-HDACi TSA, Vorinostat, Belinostat og Panobinostat (PS) har vært mye undersøkt. PS utøves robuste kreft effekter i leukemicellene gjennom hyperacetylation av nucleosome histoner og transcriptional oppregulering av p21 og p27 uttrykk [32]. PS redusert bukspyttkjertelkreft vekst gjennom hemming av celleproliferasjon og induksjon av celle apoptose [33]. TSA forsterket responsen av kreft i bukspyttkjertelen celler til konvensjonell kjemoterapi, inkludert 5-FU og gemcitabin [2], [34]. Men de nøyaktige mekanismene bak HDACi behandling er i stor grad ukjent. Vårt laboratorium har vist at HDACi Belinostat indusert ekspresjon av epigenetiske stille TGFp RII og derfor gjenopprettet TGFp signale-formidlet hemming av cellevekst i Smad4 villtype (wt) kreft i bukspyttkjertelen celler (f.eks Miapaca-2), [35]. Ron er sterkt uttrykt i Smad4 mutante kreft i bukspyttkjertelen celler. Villtype Smad4 uttrykk ble rapportert å undertrykke Ron uttrykk [36]. Knockdown av Smad4 eller inhibering av TGFp signalering resulterte i induksjon av Ron uttrykk. Undersøkelsene her viser at HDACi PS og TSA downregulated Ron og dens nedstrøms signalering i kreft i bukspyttkjertelen celler. Ron KD eller Ron mAb lysfølsomt kreft i bukspyttkjertelen celler til PS. Oral PS har vært brukt i klinisk fase II studie hos voksne pasienter med refraktær /tilbakefall Hodgkins lymfom og fase I-studie for avansert solid tumor [32]. Våre studier har utforsket en mulig mekanisme underliggende PS behandling av kreft i bukspyttkjertelen og gitt et viktig bevis for potensialet for en rasjonell kombinasjonsbehandling for Ron-uttrykke kreft i bukspyttkjertelen celler.
Materialer og metoder
cellekulturer
Menneskelige bukspyttkjertelkreft cellelinjer CAPAN-1 og CFPAC-1 ble erholdt fra American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD), og cellene ble L3.6pl stammer fra Dr. IJ Fidler [37]. Celler ble dyrket i SM-medium (McCoys 5A serumfritt medium med pyruvat, vitaminer, aminosyrer og antibiotika), supplert med 10% FBS. Alle celler ble opprettholdt i en fuktig atmosfære og 5% CO
2 ved 37 ° C.
Antistoffer og reagenser
Antistoffer for Ron C-20, Survivin, MAPK og pErk1 /2 ble kjøpt fra Santa Cruz Biotechnology Inc. Poly- (ADP-ribose) polymerase (PARP), Pakt (Ser
473), Akt, ble caspase 9 antistoffer hentet fra Cell Signaling Technology. XIAP antistoff var fra Abcam. Anti-pTry klone 4G10 ble kjøpt fra Millipore. Antistoff for aktin ble innkjøpt fra Sigma
Rekombinant human MSP ble innkjøpt fra R
0,05. Alle forsøk ble gjentatt tre ganger uavhengig av hverandre.
Resultater
IMC-RON8 Downmodulated Ron Expression og hemmet MSP-avhengige Ron Fosforylering og Nedstrøms signale
For å evaluere effekten av IMC- RON8 på Ron uttrykk i Ron-overekspresjon kreft i bukspyttkjertelen celler, CAPAN-1 og CFPAC-1 celler ble behandlet med 100 nM av IMC-RON8 for ulike tidsintervaller etterfulgt av western blot analyse. Figur 1A viser at Ron reduksjon ble observert etter 4 timer behandling med IMC-RON8 og varte opptil 48 timer i begge cellelinjer. IMC-RON8 ble så evaluert for sin evne til å blokkere Ron aktivering og nedstrøms effektorer, MAPK og Akt. CFPAC-1-celler ble serum-sultet natten over og behandlet med IMC-RON8 fulgt av MSP stimulering i 30 minutter. Resultater fra IP (Fig. 1B) viste at IMC-RON8 seg ikke overtale Ron fosforylering, som indikerer at IMC-RON8 ikke har agonisteffekter. Tyrosinfosforylering av Ron var signifikant økt med MSP stimulering, men i stor grad opphevet ved IMC-RON8 behandling. En tidligere studie rapporterte at MSP stimulering aktiverer Ron nedstrøms signale PI3K /Akt og MAPK i kreft i bukspyttkjertelen celler [6]. Følgelig, undersøkte vi rollen til IMC-RON8 på MAPK fosforylering og Akt i CAPAN-1, L3.6pl og CFPAC-1-celler. Våre resultater viste at alle de pankreatiske cancercellelinjer vi undersøkt viste en sterk MSP-avhengig fosforylering av Akt og MAPK, og at IMC-RON8 behandling blokkert MSP-indusert Akt og MAPK-aktivering i alle cellelinjer (Fig. 1C). For å avgjøre om Ron aktivering kan øke survivin og XIAP uttrykk, behandlet vi CAPAN-1 og CFPAC-1 celler med IMC-RON8 fulgt av MSP stimulering i 12 timer etter serum sult for natten. Resultatene viste at MSP stimulering øket Survivin mRNA-ekspresjon (Fig. 1D), men ikke XIAP mRNA nivå (data ikke vist). IMC-RON8 kan blokkere denne økte survivin mRNA uttrykk. Vi observerte ikke signifikant økning av XIAP og survivin protein uttrykk etter MSP stimulering på western blotting.
A) Effekt av IMC-RON8 (100 nM) på Ron uttrykk. Western blot for Ron. β-actin fungert som en lasting kontroll. B) Effekt av IMC-RON8 på MSP-indusert Ron aktivering. Celler ble serumsultede over natten og behandlet med IMC-RON8 i 1 time etterfulgt av MSP stimulering i en halv time. Cellelysater ble utsatt for IP, og IB for Pron. C) Virkning av IMC-RON8 på nedstrøms signalering. Samme behandling som B). Western blot for Perk og Pakt. D) Ron aktivering og survivin mRNA uttrykk. CAPAN-1 og CFPAC-1-cellene ble behandlet med IMC-RON8 fulgt av MSP stimulering i 12 timer etter serum sult for over natten. RT- qPCR ble utført på total RNA for å bestemme nivået av mRNA Survivin. GAPDH mRNA ble brukt som en intern kontroll.
IMC-RON8 hemmet signifikant MSP-drevet cellemotilitet
For å vurdere effekten av IMC-RON8 på cellemotilitet, en transwell migrasjon analyse ble utført i CAPAN-1-celler med IMC-RON8 behandling i nærvær eller fravær av MSP. IMC-RON8 betydelig redusert MSP- indusert cellemigrering in CAPAN-1-celler med 80~90% (fig. 2A).
In vitro
sårheling analyser ytterligere bekreftet evnen til IMC-RON8 å blokkere celle migrasjon. CAPAN-1-celler stimulert med MSP begynte å migrere til sårområdet 24 timer etter at bunnen (fig. 2B). Såret ble nesten helbredet av migrerende celler på 48 timer etter MSP behandling, mens IMC-RON8 betydelig redusert celle mobilitet.
CAPAN-1 celler ble serum sultet over natten. Cellemigrering ble vurdert ved å transwell-analyse med MSP som en kjemoattraktant i bunnkammeret. A) Bilder fra celler migrert til den nedre side av transwell membranen. B) Kvantifisering av migrerte celler. C.
In vitro
sårbehandling analysen.
HDACi downregulated Ron mRNA og protein uttrykk og Nedstrøms Signa
For å bestemme effekten av HDACi på Ron uttrykk, CAPAN -1, L3.6pl og CFPAC-1 celler ble behandlet med pan-HDACi PS for 8, 24 og 48 timer. Resultatene viste at PS utarmet Ron ekspresjon i alle Ron-uttrykkende cellelinjer som ble undersøkt (fig. 3A). Reduksjon av Ron ble notert i løpet av 8 timer med økende uttømming finner sted i løpet av 48 timer perioder (Fig. 3A). Det uttales nedregulering av Ron ble også sett i kreft i bukspyttkjertelen celler behandlet med en annen pan-HDACi, TSA (Fig. 3B), noe som indikerer Ron reduksjonen er et fellestrekk for Pan-HDACi behandling. Vi deretter bestemt hvorvidt forandringer i Ron protein var i det minste delvis på grunn av endringer i dens transkripsjon. Behandling med PS betydelig redusert mRNA-nivået av Ron i en tidsavhengig måte (fig. 3C). I tillegg er celler behandlet med DMSO alene (løsningsmiddel for PS og TSA) hadde ingen innflytelse på Ron uttrykk både på mRNA og proteinnivå. Tidligere studier har vist at Ron fosforylering aktiverer en kaskade av nedstrøms signalmolekyler inkludert Akt fosforylering [6], [15], [17]. Vi Deretter ble virkningene av PS på nedstrømscellesignalisering. CAPAN-1, L3.6pl og CFPAC-1-cellene ble behandlet med PS. Etter behandling i 8 og 24 timer ble Akt fosforylering redusert på en konsentrasjonsavhengig måte i alle 3 bukspyttkjertelcancercellelinjer (Fig. 3D). PS behandling for 24 og 48 timer også redusert både XIAP og survivin protein nivåer i en konsentrasjonsavhengig måte i kreft i bukspyttkjertelen celler (Fig. 3D).
A) kreft i bukspyttkjertelen celler ble behandlet med ulike konsentrasjoner av PS for 8 timer, 24 timer, og 48 timer. Western blot for ron ble utført. β aktin fungerte som en lasting kontroll. B) Celler ble behandlet med TSA med IB for ron. Betydelig antall celler var døde (ca. 80%) i 1000 nM TSA-behandlede CAPAN-1-celler ved 48 timer. C) Celler ble behandlet med 50 nM av PS etter 8, 24 og 48 timer. RT- qPCR ble utført på total RNA for å bestemme nivået av mRNA ron. GAPDH mRNA ble anvendt som en intern kontroll. D) Celler ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av PS ved de angitte tidspunkter. Western blot for Pakt, XIAP og Survivin uttrykk. B-aktin ble brukt en lasting kontroll.
PS Redusert cellevekst og økt celle apoptose gjennom induksjon av Cell Cycle Regulator p21 og caspase aktivitet
Funksjonen til IAP familiemedlemmer XIAP og survivin er å inhibere kaspase 3, 7, 9 aktivitet og caspase-avhengig celle apoptose ved å binde til de aktive kaspasene [42]. Vi viser at etter 48 t inkubasjon PS redusert celleproliferasjon (fig. 4A) og øket celle apoptose (Fig. 4B) på en konsentrasjonsavhengig måte i alle 3 cellelinjer som ble testet, som bestemt ved MTT og DNA-fragmentering. Tidligere studier har rapportert at HDACi behandling resulterer i nedsatt spredning av kreft i bukspyttkjertelen celler på grunn av en arrestert i cellesyklus og induksjon av caspase-avhengige programmert celledød [33]. Vi har oppdaget at en økning av cyklin-avhengig kinase inhibitor (CDK) p21 i kreft i bukspyttkjertelen celler etter HDACi behandling (Fig. 4C). Økt Capase-9 og PARP-spaltning følgende kaspase-aktivering ble også observert i CAPAN-1 og L3.6pl celler (Fig. 4C). Vi har funnet at i CFPAC-1-celler, ble øket caspase 9 spalting bare detektert ved høye konsentrasjoner av PS-behandling på 48 timer, men ikke ved 24 timer. Tilsvarende ble PARP spalting bare sett ved den høye konsentrasjon av PS-behandling i CFPAC-1-celler, noe som indikerer at CFPAC-1-celler er forholdsvis resistente overfor PS indusert-celle apoptose sammenlignet med CAPAN-1 og L3.6pl celler.
Celler ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner av PS, A) cellevekst ble målt ved MTT; B) celle apoptose ble målt ved DNA-fragmentering; C) Western blot for p21, og caspase aktivitet (PARP og caspase 9 cleavages). B-aktin ble brukt som en lasting kontroll.
Ron Knockdown eller Ron mAb IMC-RON8 Følsomme kreft i bukspyttkjertelen celler til PS Behandling
Både IMC-RON8 og PS downmodulated Ron uttrykk. IMC-RON8 reduserer onkogene signalisering gjennom Pakt og perk og hemmer cellemigrasjon i kreft i bukspyttkjertelen celler. Imidlertid, IMC-RON8 ikke påvirker celleproliferasjon og celle apoptose
in vitro
som vist ved MTT, PARP og kaspase 9 spaltinger, som er den samme for Ron knockdown (data ikke vist). PS, imidlertid induserer signifikant celle apoptose og reduserer celleproliferasjon i kreft i bukspyttkjertelen celler. Kombinasjonen mellom Ron knockdown eller IMC-RON8 og PS kan kompensere for manglende hemming av celleoverlevelse i Ron målretting IMC-RON8 eller Ron knockdown. For å bestemme de proliferative virkninger av Ron knockdown og PS-behandling, ble en standard kolonidannelsesbestemmelsen utføres. Først ble kryptert (SC) og Ron shRNA plasmider levert inn L3.6pl celler ved transfeksjon-infeksjon for å etablere L3.6pl SC-kontroll og Ron knockdown stabile cellelinjer. Encellede kloner A6 og B21 ble valgt etter puromycin behandling. Ron shRNA spesifikt slått ned Ron uttrykk, ettersom c-Met som har høy sekvensidentitet med Ron, viste ingen endring (Fig. 5A). Deretter L3.6pl SC og Ron KD kloner A6 og B21-celler ble behandlet med lave konsentrasjoner av PS. Resultatene viste at både L3.6pl SC og Ron KD cellevekst ble signifikant hemmet av PS i en konsentrasjons-avhengig måte (Fig. 5A). PS behandling ved den samme konsentrasjonen redusert kolonidannelse i Ron KD L3.6pl celler i en større grad enn Ron SC kontrollceller (Fig. 5A). Ron KD selv ikke endre celleproliferasjon i kreft i bukspyttkjertelen celler. Vi neste gjennomført myke agarose analyser for ytterligere å bestemme transformasjons egenskaper L3.6pl celler med Ron KD og PS behandling. Figur 5B viste at L3.6pl Ron KD kloner produsert færre kolonier (30-40%) enn Ron SC celler i myk agarose. PS betydelig redusert kolonier som dannes i begge L3.6pl Ron SC og KD-cellekloner (Fig. 5B). Interessant, PS behandling førte til betydelig ytterligere færre koloni tall i L3.6pl Ron KD celler enn i L3.6pl SC celler på alle PS konsentrasjoner (Fig. 5B). Størrelsene av kolonier i PS behandlet L3.6pl Ron KD celler var åpenbart mindre enn PS behandlede SC-celler (data ikke vist). For ytterligere å bestemme hvilken rolle Ron i kreft i bukspyttkjertelen, ble IMC-RON8 introdusert for å måle mulige kombinasjonseffekter sammen med PS. I begge L3.6pl (fig. 5C) og CFPAC-1 (fig. 5D) celler, kan blokkering av Ron med IMC-RON8 redusere kolonidannelse sammenlignet med kontroller uten noen behandling (opptil 50%). Kombinasjonsbehandling med PS og IMC-RON8 ytterligere generert betydelig færre koloni tall med mindre størrelse enn enkeltmedikamentbehandling alene både L3.6pl og CFPAC-1 celler (Fig. 5C og 5D).
A) L3. 6PL celler ble stabilt transfektert med Ron SC og shRNA plasmider. Ron KD kloner A6 og B21 ble valgt for klonogene analyse: L3.6pl Ron SC og KD-kloner A6 og B21 ble behandlet på dag 2 med PS ved indikerte konsentrasjoner i 48 timer. Etter vasking ble cellene dyrket i ytterligere 10 dager i 10% FBS inneholdende medium. Cellekolonier ble visualisert etter MTT farging og kvantifisert i DMSO. B). Forankrings-uavhengig vekst av L3.6pl SC og Ron KD kloner behandlet med PS ble bestemt som beskrevet i Materialer og Metoder. Soft argrose analysen ble også utført for C) L3.6pl celler og D) CFPAC-1 celler behandlet med enten IMC-RON8 eller PS alene eller deres kombinasjoner.
mekanismene som ligger til grunn IMC-RON8 overfølsomhet kreft i bukspyttkjertelen celler til PS
for å bestemme effekten av kombinasjonsbehandling med PS og IMC-RON8 på Ron uttrykk, CAPAN-en, L3.6pl og CFPAC-1 celler ble behandlet med de angitte konsentrasjoner av IMC-RON8 , PS eller deres kombinasjon. Vi fant ut at Ron ble degradert av IMC-RON8 etter 24 timer behandling (Fig. 6A). PS enkelt behandling redusert Ron, Pakt og økt PARP cleavage. Imidlertid ko-behandling ytterligere senket Ron ekspresjon (Fig. 6A), sammenlignet med enkelt behandling alene i alle tre bukspyttkjertelcancercellelinjer vi undersøkt. Videre co-behandling også ytterligere redusert Pakt og økt PARP cleavage (fig 6B). Disse kan forklare den reduserte kolonidannelse i kombinasjonsbehandling i forhold til monoterapi alene.
A) Ron uttrykk etter samtidig behandling av CAPAN-en, L3.6pl og CFPAC-1 celler med IMC-RON8 og PS. B) Effekt av co-behandling av IMC-RON8 og PS på Pakt og PARP cleavage. β-actin ble brukt som en lasting kontroll.
Diskusjoner
Denne studien identifisert en potensiell ny terapeutisk tilnærming i bukspyttkjertelkreft ved hjelp av en kombinasjon strategi gjennom å utnytte både genetiske og epigenetiske funksjoner. Kreft i bukspyttkjertelen er en av de mest utfordrende problemene i kreftterapi. Nåværende kjemoterapi av gemcitabin har en svært lav svarprosent ( 20%) og legemiddelresistens utvikler seg raskt resulterer i behandlingssvikt [2]. Således blir nye terapeutiske strategier et presserende behov.
ron har nylig blitt rapportert å være sterkt uttrykt i kreft i bukspyttkjertelen celler og pasientprøver [5], [6]. Stimulering med MSP aktiverer Ron og dens nedstrøms signalering, inkludert PI3K /Akt og MAPK og fremmer celle migrasjon og invasjon. Imidlertid Ron aktivering hadde ingen virkning på proliferasjonen i bukspyttkjertelcancerceller [6]. Knockdown av Ron har vist økt mottakelighet for apoptose av tykktarmskreftceller til vekstfaktor deprivasjon stress gjennom mutant p110α aktivering [14], [15]. Men, kreft i bukspyttkjertelen celler ikke inneholde p110α mutasjoner. Ron KD hadde ingen effekt på celleproliferasjon og apoptose som vurderes av MTT, PARP og caspase 9 splittelser
in vitro plakater (data ikke vist) i kreft i bukspyttkjertelen celler.
Våre studier her viste at IMC -RON8 downmodulated Ron uttrykk, som var i samsvar med tidligere studier som mus anti-Ron mAbs ZT /g4, ZT /f2 og ZT /c9 reduserte Ron uttrykk i tykktarm kreft celler [43]. Menneskelig mAb IMC-41A10 effektivt redusert MSP-mediert Ron aktivering og dens nedstrøms PI3K /Akt og MAPK aktivisering [17]. MAPK signale reduksjon av IMC41A10 ble dokumentert av perk reduksjon i alle kreftcellelinjer valgt. Imidlertid er effekten av IMC41A10 på pakt ikke konsekvent i alle cellelinjene. For eksempel IMC41A10 hadde sterk innvirkning på reduksjon av Akt aktivering i HT29, Du-145 og AGS, mens IMC-41A10 ikke endre Pakt i andre celler, inkludert kreft i bukspyttkjertelen cellelinje BxPC3 [17].
IMC-RON8, en annen fullstendig humane anti-ron-mAb, viste antitumoraktivitet mot human tykktarm, lunge og bukspyttkjertel xenotransplantater i nakne mus [44]. Våre studier her vist at IMC-RON8 effektivt hemmet Ron fosforylering i CFPAC-1 celler, samt nedstrøms pMAPK og Pakt aktivering i alle bukspyttkjertelkreft cellelinjer vi undersøkt inkludert BxPC3 (data ikke vist). Dette indikerte at IMC-RON8 er funksjonell for å hemme MSP-mediert signalveier og viser sterk effekt med hensyn til å blokkere PI3K /Akt sti.
Tidligere arbeid fra vår lab og andre har vist at Akt aktivering er knyttet til
